快速冰冻切片技术在病理诊断中的应用

黄秀华 三明市沙县区总医院 （福建 三明 365050）

内容提要： 目的：探讨快速冰冻切片技术在病理诊断中的应用。方法：选取2020年1月～2022年1月在本院进行病理检查的病理组织标本100例作为观察对象，采取随机分配的方式将标本分为观察组与对照组，每组各50例，其中对照组实施常规石蜡切片技术（仪器为LEICA RM2245半自动轮转式切片机，产地品牌：进口德国LEICA），观察组实施快速冰冻切片技术（仪器为LEICA CM 1950冰冻切片机，产地品牌：进口德国LEICA）。对比不同切片技术下标本符合率及相关指标。结果：通过比较两组间标本不同制作方式下的符合率，观察组符合率和对照组区别不大；同时在相关指标中，观察组清晰度、细胞结构以及细胞形态指数均与对照组常规切片指标相差不大，二者间差异不大，具有统计学意义，P>0.05。结论：在病理学临床诊断中实施快速冰冻切片具有较高临床应用价值。对比常规石蜡切片方式诊断过程速度快，从而针对患者病情做出快速反应；术中实行冰冻切片可避免患者实行二次手术，临床医生通过术中冰冻结果，选择手术范围，具有非常重要的意义。因此临床中可根据患者的实际情况选择是否实行快速冰冻切片。

冰冻切片是病理切片技术之一，是通过冰冻技术快速制备病理切片，让医生在术中得到病理结果的过程。通常可在30min之内把组织迅速冷冻，经过切片、染色、封片等环节，制作出病理切片，病理医生立刻作出诊断，提供给临床医生病理报告。冷冻切片的种类较多，有低温恒冷箱冰冻切片法、二氧化碳冰冻切片法等，现阶段临床实用性最为广泛地为低温恒冷箱冰冻切片。在实施快速冰冻切片过程中，如果取材、制作未依照操作规范执行，极易造成病理组织呈冰晶、褶皱、脱落等不良状态，使其清晰度及结构发生变化。因此技术人员需在制作期间特别注意不良因素造成的隐患，以保证标本清晰度与切片检测质量，为后续诊断和治疗提供可靠的实验室检查依据[1-3]。本文选取本院病理组织标本100例作为观察对象，通过为其实行快速冰冻切片技术检查，进而明确其适用效果。现报道如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

选取2020年1月～2022年1月在本院进行病理检查的病理组织标本100例作为观察对象，采取随机分配的方式将标本分为观察组与对照组，每组各50例。对照组实施常规石蜡切片技术处理，观察组实施快速冰冻切片技术检查。其中，观察组样本来源男性25例，女性25例，年龄35～45岁，平均（40.12±0.25）岁；对照组样本来源男性35例，女性15例，年龄35～45岁，平均（40.18±0.15）岁。组间样本一般资料无显著差异，具有统计学意义。

1.2 方法

观察组：实施快速冰冻切片技术（见图1）。在标本选择时需明确选取新鲜活体组织，将组织部位毛发以及脂肪剔除，注意规避坏死部位以及伤患出血位置的标本。标本大小需保持在1.5cm×1.5cm左右，标本厚度为<0.2cm，仪器选择为LEICA CM 1950冰冻切片机（品牌：LEICA；产地：德国），待病理医生取材后，用OCT包埋剂完全包裹组织，快速置于恒冷切片机内进行冷冻，骤冷愈快愈好，避免冰晶产生，待组织冻透后利用LEICA CM 1950冰冻切片机切片，依照标本调节切片机温度一般为-20～-25˚C，切片厚度一般为6～7μm，细胞较质密的组织如淋巴结、肝脏等组织，切片厚度为5μm。而后将其切片放置于玻璃片上，快速置于AF固定液1min左右，水洗，Harris苏木素加温染色1min，稍水洗，百分之一盐酸酒精分化3S，稍水洗，氨水返蓝，待其染色水洗呈蓝色后，再滴入适量酸性染料水溶性伊红Y，水洗后乙醇二甲苯脱水透明后用中性树脂封片[4]。

图1.快速冰冻切片

对照组：实施常规石蜡切片技术（见图2）。仪器为LEICA RM2245半自动轮转式切片机（品牌：LEICA；产地：德国）。技术人员接收患者病理标本，清点无误后签收，而后对标本实施脱水、包埋、切片、染色、封片等程序，均依照相关流程执行，全程核对组织数量，注意脱水试剂的浓度，脱水试剂容积应为组织的5～10倍以上，保证脱水质量，包埋石蜡过滤防止杂质，避免刀痕，切片刀锋利，切片时用力均匀，厚度约3～5μm。Harris苏木素染色5～10min，流水冲洗，1%盐酸酒精分化5s左右，水洗，氨水返蓝，待其染色水洗呈蓝色后，酸性水溶性伊红Y染1min左右。封固前须由梯度酒精脱水，二甲苯透明，湿封，且在此期间不可出现气泡，不得有树胶外溢。标签须附着玻片左侧，编号字迹清晰[5]。

图2.常规石蜡切片

1.3 观察指标与判定标准

①对比两种切片检测后诊断确诊率。以两组患者最终结果作为参照值，比较组间标本在不同方法下的诊断符合率，且明确组间良性肿瘤、恶性肿瘤以及交界性肿瘤占比情况，随即作出组间数据对比。②两种切片技术相关指标评分。请由本院两名经验丰富的病理医生对不同技术下的切片质量进行评测，总计分值为10分，分数越高，切片质量越高。

1.4 统计学分析

通过统计学软件SPSS23.0对患者群体进行数据研究，研究资料采用进行表述，相关数值进行t检验分析，同时两组数值在P>0.05条件下，其可判断为两组间差异较大，具有统计学意义。

2.结果

2.1 对比两种切片检测后诊断确诊率

通过诊断结果可知，观察组在实施冰冻切片技术检测下，检出良性肿瘤患者24例（48%）、恶性肿瘤20例（40%）、交界性肿瘤4例（8%），共计48例，检出率96%。对照组在实施常规切片检测下，检出良性肿瘤患者24例（480%）、恶性肿瘤20例（40%）、交界性肿瘤4例（8%），共计48例，检出率96%。两组患者检出效果无明显差异，有统计学意义，P>0.05。

2.2 两种切片技术相关指标评分

通过对两组检查数据结果对比可知，观察组清晰度为（8.54±0.25）分；细胞结构为（8.13±1.34）分；细胞形态为（8.49±0.38）分。对照组清晰度为（8.53±0.18）分；细胞结构为（8.09±0.14）分；细胞形态为（8.89±0.18）分。两组切片技术下三项指标无显著差异，有统计学意义，P>0.05。

3.讨论

在肿瘤诊断过程中病理诊断作为金标准，通过对患者实施手术切除、穿刺等方式，从而获取病理标本，利用光学显微镜等配套仪器对标本实施动态观察[6]。随着现阶段病理诊断的路径不断优化，病理方法的不断创新，常规石蜡切片活检已不能满足临床需求，冰冻切片填补了常规石蜡切片速度慢的缺点[7]。冰冻切片是外科手术科室与病理科之间的一种紧急会诊方式。通过手术切取一小块组织，不经过常规固定脱水石蜡包埋等冗繁程序后，通过特制的包埋剂，将组织冻结于-20˚C左右，切成薄片并染色，进行镜下观察，以帮助手术确定组织良恶性，切除方式，切除范围，确认不易肉眼辨认的组织等，进而能够明确判定患者位置肿瘤恶性程度，可对患者确病情做到有效评估，便于制定后续治疗方案。随着现阶段快速冷冻切片技术广泛实施，其应用优势成效也逐步趋于明显。快速冰冻切片优点在于：简便，不需要对组织固定、脱水、透明、包埋等即可进行切片；组织变化不大；能很好地保存脂肪和类脂等；能比较完好地保存各种抗原活性及酶类；用时短、速度快，可在短时间内对手术标本进行病理诊断，进而确定临床手术方案[8]。因此，冰冻切片技术通过对待检部位进行冷冻，使其能够快速达到检测的适温标准，从而使检测流程更为便捷，让患者能够在短时间明确的诊断[9]。在使用器械上主要通过恒温冷冻切片机完成操作，在仪器构造上主要由冷箱和切片机组成，其具有快速制冷、主动除霜、自行消毒以及负压等作用。在功能作用上，其可通过物理降温使形象组织标本在冷冻环境下，保持一定硬度进行切片。在实用优势上，该实施过程速度快，可以提高工作效率。同时，恒温冷冻切片机可依照实际需求调整切片厚度，制备不同厚度病理切片，以适应不同实验需求。同时，冷冻切片机通过微波、液氮等技术，可以针对组织标本快速冻结，确保组织原始形态、结构保存完好，制备切片质量高，适用于各种临床病理研究。临床采用冷冻切片机技术操作便捷，仅需放置标本加以冷冻，即可制备高质量切片样本，适合大部分临床应用。相较于传统石蜡包埋技术，冷冻切片机无需依照有毒溶剂和昂贵设备，成本价格更低，更加环保。此外，该应用技术能够在较短的时间内向患者及家属报告疾病发展情况，降低其心理压力，缩短等待结果时长，有利于围手术方案顺利进行。不过在实施过程中仍需注意应注意安全，避免切伤手指，还应明确刀片角度和速度，确保切片质量和厚度。以及在使用后应及时清洗维护，保证设备的正常使用寿命[10]。

快速冰冻切片技术可以使检测效率得以明显提升，对病理诊断准确性得以有效保证。不过若不依照规范处理，则标本易成冰晶状物质或成褶皱脱落，进而导致细胞形态、结构及透明度受到影响。为此需依照临床作业实施标准进行严格处理[11-13]。为能够使患者标本保持在良好状态下，应快速取材，在对患者标本选择上应遵循标本取材规定，取材大小需保持在1.5cm×1.5cm左右，太大难以切完整，厚度>0.3cm，则冰冻费时，若标本温度过低，则易影响患者标本保存质量，出现脆硬现象。因此，在标本选取上需尽可能进行合理控制，确保切片质量，注意观察冷冻质量，冷冻适温需于0˚C以下，并做好特殊环境的维持工作[13-16]。

人体的体液分为混合液，含有蛋白质、核酸、核糖等有机分子以及部分盐类物质。所以人体组织标本需于0˚C受冻，进而要求技术人员需要熟练掌握冰冻技术，明确冰冻适温、用时等相关标准，确保快速冰冻技术顺利实施，同时针对切片厚度和质量，技术人员应熟练掌握使用规定和适时流程。在确保切面干净完整基础上，染色后还需进行二次脱水处理，最后，在使用中性胶封膜过程中胶量不宜过多，防止胶片胶水溢出[17-20]。

本研究结果可知，观察组快速冰冻切片技术（仪器为LEICA CM 1950冰冻切片机，产地品牌：进口德国LEICA）符合检出率与对照组常规切片技术（LEICA RM2245半自动轮转式切片机，产地品牌：进口德国LEICA）无显著差异，快速冰冻切片技术在检出速度上优于常规活检，组间差异并不是很大，具有统计学意义，P<0.05。

综上所述，通过将快速冰冻切片技术应用于临床病理诊断中，具有良好的检出效果，优点是速度快，可以为后续诊治以及围术治疗提供有力依据，常规和快速冰冻切片技术具有互补的作用，临床中可根据患者的实际情况选择检测技术。