转录因子FoxQ1在肺癌患者血浆中表达及预后价值

孙玉书 温珍平 贺晓花 牟永平

(内蒙古医科大学附属肿瘤医院 北京大学肿瘤医院内蒙古医院 1肿瘤内科A区,内蒙古 呼和浩特 010020;2检验科)

目前肺癌引起的死亡人数已超过乳腺癌、结直肠癌、胰腺癌等,成为癌症死亡的首要原因〔1〕。非小细胞肺癌(NSCLC)是最常见的肺癌类型,其侵袭、转移及耐药等因素导致5年生存率仅15%左右〔2〕。因此开发新的生物靶点成为肺癌研究最受关注的领域之一。有报道表明,转录因子叉头框Q1基因(FoxQ1)在一些肿瘤组织中(乳腺癌,肠癌)〔3,4〕过表达,可能与恶性肿瘤侵袭、转移有关。叉头转录因子家族成员通过招募共激活因子调节基因转录,参与细胞生长、分化、凋亡、迁移等多种生物学过程,其突变和表达异常与发育畸形、代谢性疾病及肿瘤发生有关。FoxQ1是叉头转录因子家族较新的成员之一,该基因位于人类染色体6 p23-25,现已被证实在人类某些恶性肿瘤发生发展中扮演着一个非常重要的角色,早期研究发现FoxQ1与细胞的分化有关〔5〕,FoxQ1过表达可能促进肺癌细胞的生长。本文分析FoxQ1表达量与病理因素的关系并评估其对肺癌患者预后的诊断价值。

1 材料与方法

1.1临床资料及样本 收集2016年5月至2018年6月内蒙古自治区肿瘤医院肺癌患者血浆标本90例,作为肺癌组,临床病理结果显示:鳞状细胞癌17例、腺癌45例、小细胞癌24例、大细胞癌4例;高分化16例、中分化44例、低分化30例;临床TNM分期Ⅰ期17例,Ⅱ期24例,Ⅲ期27例,Ⅳ期22例。入组标准:①术前未经过任何抗肿瘤治疗;②由病理医师或行磁共振成像(MRI)、CT检查确诊的原发性肺癌患者;③有完整的临床病理及流行病学资料。根据年龄、性别匹配,按1∶1比例选择同一时期在医院进行健康体检的健康人群作为对照组,共90例。确定入组研究对象后,收集每位研究对象的流行病学资料(包括年龄、性别、肿瘤家族史及个人史、吸烟史、饮酒史等),进行肺癌肿瘤标志物检测,包括癌胚抗原(CEA)、神经特异性烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白19片段(CYRFA21-1)等。收集临床病理相关资料,包括:肿瘤组织学分型、分化程度及临床分期等。本研究已经获得参加研究者的知情同意,并经内蒙古自治区肿瘤医院伦理委员会批准。

1.2主要试剂 CEA试剂盒、NSE试剂盒及CYRFA21-1试剂盒均购自罗氏公司;FoxQ1含量检测采用上海酶联生物科技有限公司货号为201904#的人FoxQ1酶联免疫分析试剂盒。

1.3血浆样本收集 收集研究对象早晨空腹静脉血2份各3 ml,1份用于肺癌标志物检测,1份用于FoxQ1表达量检测。所有血液样本在室温下静置半小时,然后以2 000 r/min的速度离心10 min,小心吸取上清液至离心管中,然后再以3 000 r/min的速度离心10 min,留取上清,置低温冰箱中保存。

1.4血浆FoxQ1含量检测 取10 μl上述血浆加入96孔酶标板,按照试剂盒说明书进行加样,酶标试剂,显色,加入终止液,15 min之内读取OD值,做标准曲线的直线回归方程式,计算样本实际浓度。

1.5肺癌标志物浓度测定 应用罗氏COBAS E601全自动电化学发光免疫分析仪通过电化学免疫分析法对CEA、NSE、CYFRA21-1浓度进行测定,全部操作依据试剂盒或仪器说明书完成。

1.6统计学方法 采用SPSS25.0软件进行正态性检验、t检验、单因素方差分析、χ2检验,血浆FoxQ1表达水平与肺癌发病风险之间的关系应用多因素非条件Logistic回归分析、Kaplan-Meier来分析血浆FoxQ1表达在肺癌预后诊断中价值。

2 结 果

2.1两组基本资料比较 与对照组相比,肺癌组血浆中CEA、NSE、SCCA及CYFRA21-1水平显著升高(均P<0.05),吸烟比例显著升高(P<0.05),饮酒比例无显著性差异(P>0.05)。见表1。

表1 两组基线资料比较

2.2两组血浆FoxQ1的表达及肺癌患者不同临床参数与FoxQ1表达的关系 肺癌组血浆中FoxQ1表达水平〔(195.44±44.39)ng/ml〕较对照组〔(77.57±38.56)ng/ml〕显著升高(t=-2.884,P=0.004)。晚期肺癌患者血浆转录因子FoxQ1的表达水平显著高于早期肺癌患者(P<0.05)。血浆FoxQ1表达水平与年龄、性别、组织学类型及肿瘤分化程度无显著性关联(P>0.05)。见表2。

表2 血浆FoxQ1表达水平与肺癌患者临床参数关系

2.3血浆FoxQ1表达与肺癌发病风险之间的关系 以对照组的中位数为参照将肺癌患者分成FoxQ1高表达组(≥177.57 ng/ml)和低表达组(<177.57 ng/ml),在校正了年龄、性别、吸烟、饮酒、CEA、NSE及CYFRA21-1等混杂因素后发现:与血浆FoxQ1表达水平低者〔42例(46.7%)〕相比,血浆FoxQ1表达水平高者〔48例(53.3%)〕肺癌发病风险显著上升(校正比值比为2.36,95%可信区间为1.30～4.29,wald=7.91,P<0.05)。

2.4血浆FoxQ1表达水平在肺癌预后诊断中的价值 90例肺癌患者总体中位生存时间为22.4个月。FoxQ1高表达组平均生存时间〔(16.2±2.0)个月〕显著短于低表达组〔(28.3±3.1)个月;χ2=21.09,P<0.01〕。见图1。

图1 FoxQ1高、低表达组生存曲线

3 讨 论

肺癌已成为绝大多数国家主要癌症死亡原因,早期诊断和治疗对改善肺癌患者的预后及降低死亡率有重要意义〔6〕。血液肿瘤标志物因其创伤小、无有害射线接触,患者依从性好等优点而深受人们关注,已逐步成为临床诊断肿瘤的一个重要手段。叉头转录因子家族成员通过招募共激活因子调节基因转录,参与细胞生长、转化、凋亡、迁移等多种生物学过程,其表达异常与肿瘤发生有关〔7〕。有研究发现FoxQ1在胃癌组织中高表达,患者术后无复发生存期(RFS)低于FoxQ1表达阴性者,FoxQ1与患者术后复发及RFS缩短相关〔8〕;杨洲等〔9〕发现在根治性手术切除的64例直肠癌患者术后血清FoxQ1水平显著降低,其升高或降低程度与患者远期预后密切相关。

由于FoxQ1在人体肿瘤组织中表达显著升高,提示FoxQ1可能是一个癌因子,其表达异常在肿瘤进化演变过程中发挥了重要作用。Feng等〔10〕研究发现肺癌组织中FoxQ1 mRNA 和蛋白表达量均高于正常组织,伴随上皮型钙黏蛋白(E-cad)表达缺失,参与了细胞上皮-间质转化(EMT),结果提示FoxQ1在肺癌的进化演变过程中发挥癌基因的作用,肺癌患者血浆FoxQ1可能作为新的肺癌潜在的治疗靶点。

本文结果提示,血浆FoxQ1表达水平升高与肺癌发病风险增高显著正相关,FoxQ1在肺癌组织中高表达,且与不良预后有关。目前对 FoxQ1具体调控机制尚不清楚。探究 FoxQ1作用的分子机制是今后研究的热点方向,进一步探索 FoxQ1在肺癌发生、发展中的生物学和分子学机制,将有助于更好地阐述肺癌的生物学行为,而下调FoxQ1基因的表达可能成为肺癌治疗的新思路。