2019~2021年花溪区H5、H7亚型禽流感免疫抗体监测情况及分析

浦同灿　李世静　周莉　罗时霞

摘 要：为了解2019～2021年花溪区的禽流感免疫效果，对其管辖的部分涉农乡镇（街道）随机采集120～400日龄的鸡群血清样品4 391份，采用血凝抑制试验对禽流感H5和H7亚型进行免疫抗体检测，根据高致病性禽流感诊断技术中抗体效价标准进行判定，HI抗体效价≥4log2，判定个体免疫效力合格；群体免疫抗体合格率≥70%，判为群体抗体合格率达标。检测结果显示，花溪区（H5+H7亚型）禽流感免疫抗体合格率2019、2020、2021年依次为91.03%、91.78%、96.19%，呈现逐年上升趋势；H7亚型抗体合格率高于H5亚型，规模化鸡场抗体合格率高于大户和散养户。综上所述，禽流感免疫抗体合格率均高出国家标准，说明全区免疫工作较扎实有效；监测禽流感免疫抗体为花溪区科学预防H5、H7亚型禽流感的流行提供数据支撑，推动花溪区的家禽业健康持续发展。

关键词：H5、H7亚型禽流感；血凝抑制试验；抗体合格率；评估

中图分类号：S855.3     文献标识码：B文章编号：1673-1085（2023）07-0037-06

禽流感（Avian Influenza，AI）是禽流行性感冒的简称，属于正黏病毒科流感病毒属A型禽流感病毒（Avian Influenza virus，AIV）引起的人兽共患烈性传染病之一[1]，能够感染所有的家禽、野禽。被世界动物卫生组织（OIE）定为A类传染病，我国将其列为一类传染病[2-3]。

高致病性禽流感对养禽业的打击几乎是毁灭性的，该病发生后对鸡群的发病率和致死率极高，给家禽养殖场户带来极大的经济损失。目前，世界范围内流行的高致病性禽流感亚型主要为H5亚型和H7亚型。农业农村部官网数据显示，2019年中国一共报告高致病性禽流感疫情4起，2020年共报告高致病性禽流感疫情7起，2021年共报告高致病性禽流感疫情8起，家禽、野禽均存在不同程度感染[4]，高致病性禽流感疫情在我国的发生呈上升趋势，防控压力十分严峻。

为遏制禽流感疫情发生，我国从2005年开始对全国家禽实施H5亚型禽流感强制免疫，2017年秋季开始在免疫H5亚型禽流感的基础上，对全国家禽全面开展H7N9免疫。实践证明，疫苗免疫接种是预防高致病性禽流感的有效手段。我国的禽流感疫苗发展，从最初的禽流感H5N1（Re-6）单苗到二价灭活疫苗（H5N1Re-8+H7N9Re-2），直到现在已被广泛使用的重组禽流感病毒（H5+H7）三價灭活疫苗（H5N1Re-6株+Re-12株，H7N9 H7-Re2株）。随着禽流感病毒毒株流行情况的变化，采用最新毒株研制的疫苗能将疫情带来的风险降到最低水平。

为强化花溪区家禽养殖持续引领“强省会”示范带动作用，切实巩固花溪“小班哥”“双无抗”优质鸡蛋品牌，区农业部门对禽业疫病的防控尤为重视，对全区高致病性禽流感免疫抗体水平进行长期跟踪监测，以便实时掌握花溪区免疫抗体水平及分布情况，及时发现预警全区高致病性禽流感防控的薄弱环节，实时更新或采取科学防疫措施。本文对花溪区2019～2021年高致病性禽流感免疫抗体监测情况进行汇总、整理、分析，以期为花溪区高致病禽流感流行概况进行科学风险评估及研判，对下一步完善花溪区禽流感的防控措施具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 样品来源

样品来源和数量：根据2019～2022年花溪区疫病监测与流行病学调查计划，按乡镇养殖存栏分配情况，覆盖花溪区辖区内的大部分规模养鸡场、蛋鸡养殖大户和农村散养户，共采集4 391份免疫过重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N1Re-6株+Re-12株，H7N9 H7-Re2株）的鸡群血清样品。样品采集方法和处理：血清样品一般于疫苗免疫28 d后采集，鸡翅静脉采血不少于2 mL，放于无抗凝剂的真空采血管，待血液凝固后，3 000 r/min离心5 min，取上层清亮液体移置于1.5 mL EP管中，静置保存于4 ℃冰箱备用。

1.2 试验试剂

1.2.1 检测试剂 禽流感H5亚型标准抗原、阳性血清、阴性血清购自哈尔滨国生生物科技有限公司，H7亚型标准抗原、阳性血清、阴性血清购自中国哈尔滨维科生物开发公司，0.1 mol/L、pH7.2的磷酸盐缓冲液（PBS）购自博士德生物工程有限公司。

1.2.2 1%浓度的红细胞悬液 采用真空抗凝管采集未经免疫的健康公鸡（由本单位实验室提供）静脉全血，轻微摇晃均匀，用配制好的pH7.2、0.01 mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）反复多次洗涤干净后，按照比例配制成1%红细胞悬液，在4 ℃下保存备用。

1.3 检测方法

本试验操作均参照GB/T 18936-2003、GB/T 18936-2020高致病性禽流感诊断技术进行，使用血凝抑制试验（Heamoglutination Inhibition，HI）检测鸡血清样品中禽流感抗体效价。试验用标准抗原稀释倍数为4 HAU，采取完全抑制4 HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。根据高致病性禽流感诊断技术规范中抗体效价标准进行判定，即HI效价≥4log2，即判定为个体免疫抗体水平合格；群体免疫抗体合格率≥70%，判为群体抗体合格率达标。

1.4 数据分析

通过EXCEL2019软件对血清样品检测结果进行个体抗体合格率、群体抗体合格率分类统计，整理分析花溪区2019～2021年禽流感在家禽群体间的分布情况。

2 花溪区免疫鸡群H5、H7亚型免疫抗体水平

对2019、2020、2021年从花溪区麦坪镇、石板镇、马铃乡等13个涉农乡镇（街道）的多个养殖场（规模场、大户、散户）采集的4 391份鸡血清样品通过HI检测抗体效价，H5、H7亚型免疫抗体合格率检测结果见表1，比较图见图1。

2.1    H5、H7亚型抗体合格率三年的总体情况

从表1可看出，2019～2021年全区高致病性禽流感免H5亚型抗体合格的样品总数为4 020份，抗体合格率为91.55%；H7亚型抗体合格的样品总数为4 098份，抗体合格率为93.33%；（H5+H7）抗体平均合格率为92.42%；抗体合格率均超过了90%，大大高于国家标准水平（70%）。

2.2    H5、H7亚型抗体合格率比较

从表1可看出，2019年H5亚型抗体合格率90.7%（1 258/1 387），H7亚型抗体合格率91.35%（1 267/1 387）；2020年H5亚型抗体合格率91.58%（1 392/1 520），H7亚型抗体合格率91.97%（1 398/1 520）；2021年H5亚型抗体合格率92.32%（1 370/1 484），H7亚型抗体合格率96.56%（1 433/1 484）；2019～2021年H5亚型抗体合格率为91.55%，H7亚型抗体合格率为93.33%。

从图1明显看出，2019～2021年H5和H7亚型抗体合格率均呈逐年上升趋势，但2020～2021年间H7亚型抗体水平变化最明显，而且H7亚型每一年的抗体合格率和三年的抗体平均合格率均高于H5亚型。

2.3   规模场与大户、散户的H5、H7亚型免疫抗体水平

检测结果见表2，H5、H7亚型抗体合格率比较见图2所示。

2.3.1 H5亚型抗体合格率 从表2可知，2019年规模场H5亚型抗体合格率为92.04%，大户、散养户为88.17%，二者平均合格率为90.7%；2020年规模场为91.95%，大户、散养户为90.87%，平均抗体合格率为91.58%；2021年规模场为92.94%，大户、散养户为91.3%，平均合格率为92.32%。

2.3.2 H7亚型抗体合格率 从表2可知，2019年规模场H7亚型抗体合格率为92.98%，大户、散养户为88.38%，二者平均合格率91.35%；2020年规模场为92.05%，大户、散养户为91.82%，平均合格率91.97%；2021年规模场为97.5%，大户、散养户为95.03%，平均合格率96.56%。

2.3.3  规模场与大户、散养户抗体合格率比较 地位比较：从表2可知，规模场采集的样品数占到了总样品数的60%以上（2019、2020、2021年分别为65.25%、65.39%、62.06%），说明规模化鸡场在花溪区养鸡业占主流地位。

H5、H7亚型抗体合格率比较：2019～2021年参与随机抽样的免疫鸡群的H5亚型和H7亚型抗体合格率，规模场均在90%以上，大户、散养户均在88%以上，规模场每一年的H5、H7亚型抗体免疫水平总体上要好于大户、散养户（图2），其中2020年规模场与大户、散户的H5、H7亚型抗体合格率差值最小，分别为1.08%、0.23%。但无论是规模场还是大户、散养户，H7亚型抗体合格率均高于H5亚型。

抗体合格率变化趋势比较：2019、2020、2021年连续三年，大户、散养户的H5、H7亚型抗体合格率变化一直保持上升态势，但规模场抗体合格率在2020年均出现下降趋势，见图2所示。

3 分析与讨论

3.1 禽流感抗体总体水平逐年上升

2019、2020、2021年，花溪区高致病性禽流感抗体总水平依次为91.03%、91.78%、96.19%。从监测结果看，三年来，花溪区禽流感免疫抗体水平合格率逐年上升，均高于农业农村部规定的群体合格率（≥70%），说明花溪区对高致病性禽流感防疫工作高度重视，业务技术督促指导到位，扎扎实实做好了家禽群体免疫、防疫工作，且取得良好的成效，为推动花溪区的家禽业健康持续发展做出了贡献。

3.2   规模场禽流感抗体水平略好于养殖大户、散养户

从监测结果可看出，无论是H5亚型还是H7亚型，规模鸡场的免疫抗体水平均略高于养殖大户和散养户，说明规模场的免疫工作做得更到位。分析主要有两方面的原因：一是规模场设备机械化程度更高、管理比较规范、疫病防控意识更强，且场内的兽医和技术人员专业水平相对较高，待遇较好，人员稳定性高、流动性小，另外制定的免疫程序更科学合理，因此鸡场的免疫工作更为扎实，鸡群整体的抗体水平达标率更高；二是近年来，基层兽医工作负担越来越重，各版块重点技术工作人员缺乏，为此大多基层单位存在人员混用的现象，加上防疫经费不足、部分在编人员为非专业人员，使原本薄弱的基層动物疫病防控力量逐渐减弱，因此对散养户，基层村级防疫人员在每年春秋防疫工作开展难度大，导致部分乡（镇、街道）、村畜禽免疫环节和防控措施未严格落实到位，免疫环节出现“漏网之鱼”，是造成抗体水平参差不齐的主要因素之一。

4 小结

抗体检测是反映疫苗免疫效果的一个重要依据，是评价和指导动物疫病防控工作的重要措施之一，也是评判疫苗免疫效果的重要手段之一。2019～2021年花溪区监测辖区内大部分免疫鸡群高致病性禽流感H5和H7亚型免疫抗体水平，群体合格率超出了国家标准达标率，免疫工作成效显著。目前及今后，花溪区禽流感防控的重中之重依然是做好高致病性禽流感疫苗免疫工作，无论是监管部门、基层防疫部门还是各类型养殖场，在禽流感防控工作中要杜绝一切侥幸和倦怠心理。区乡都要充分认识到这项工作的重要性，尤其是部分乡镇，要加强对村级防疫人员的监督管理，认真组织开展对散养户家禽免疫工作，确保不漏户、不漏禽。抗体监测不仅仅是为了完成上级部门安排的任务，还要区级严格建立免疫效果的追溯机制，对抗体检测效果不理想的养殖场（大户、散户），加强督促、指导乡镇对辖区家禽群体完成补免工作，确保在二次监测时达到群体免疫合格达标，减少一切影响禽流感疫情的风险因素，为当地家禽养殖业的持续快速发展提供安全和保障。

参考文献：

[1]  冯秀红，郝建勇，曹建伟，等.广东江门地区2011-2013年H5、H9亚型禽流感抗体监测结果分析[J].广东畜牧兽医科技，2015，40（6）：30-31.

[2]  成进，彭晓玲，夏俊，等.2009-2010年新疆地区家禽禽流感免疫抗体监测与分析[J].中国动物检疫，2011，28（7）：51-53.

[3] 甘孟侯.禽流感[M].2版.北京：中国农业出版社，2002：1-3.

[4]  邓蒲媛，杨叶，李宁.汉中市H5亚型禽流感抗体监测与分析[J].中国畜牧业，2022（2）：121-122.

Surveillance and Analysis of Immune Antibodies against Avian Influenza H5 and H7 in Huaxi District during 2019 to 2021

PU Tongcan，LI Shijing，ZHOU Li，LUO Shixia

（Guiyang Huaxi District Agriculture and Rural Bureau，

Guiyang  550025，Guizhou，China）

Abstract：  To understand the immunization effect of avian influenza in Huaxi district，during 2019 to 2021， 4 391 serum samples were randomly collected from scale field （free-range farm） in some agriculture-related townships （streets） in Huaxi District， and antibodies against H5 and H7 subtypes of avian influenza were detected by hemagglutination inhibition test，according to the antibody titers of diagnostic techniques for highly pathogenic avian influenza，the HI antibody titers were ≥4log2，which indicated that the individual's immune efficacy was qualified.The qualified rate of group antibody was ≥70%， which was judged as the qualified rate of group antibody.The results showed that during 2019 to 2021， the total antibody levels of highly pathogenic avian influenza were 91.03%， 91.78%， 96.19%， indicating that the qualified rate of avian influenza antibody in Huaxi district showed an increasing trend year by year.The antibody level of H7 subtype was higher than H5 subtype. The level of immune antibody in scale farm was higher than that in large and free-range farm. In conclusion，the qualified rate of immune antibody for avian influenza is higher than the national standard，indicating that the prevention and control of avian influenza in Huaxi District was relatively solid. Monitoring of AIV antibody provides data support for scientific prevention of H5 and H7 subtype avian influenza in Huaxi District， and promotes the healthy and sustainable development of poultry industry in Huaxi District.

Keywords：H5 and H7 subtypes of Avian influenza; Hemagglutination inhibition; Qualified rate of antibody; Evaluate

收稿日期：2023-05-31

第一作者簡介：浦同灿（1980—），男，博士研究生，高级兽医师，主要从事动物疫病预防控制及畜牧技术推广工作，E-mail：447236210@qq.com。

*通信作者简介：李世静（1990—），女，硕士研究生，兽医师，主要从事动物疫病预防控制及卫生监督工作，E-mail：3316867704@qq.com。