炮制工艺对何首乌成分的影响

程燕燕

何首乌的炮制方法最早来源于唐代,主要包括对原材料的净制方法、加热方法及辅料的选择等[1-2]。在《中国药典》中指出,何首乌的炮制方法大致分为黑豆汁蒸、黑豆汁炖、清蒸三种类型[3]。通过对我国各个省市的炮制规范进行总结,发现还有黑豆汁高压蒸、黑豆汁屉上蒸片等炮制方法[4-5]。另外,即便是采用同一种炮制方法,如果炮制时间的不同,得到的何首乌的成分含量也会受到明显影响[6-7]。何首乌具备解毒、通便、润肠的作用,经过炮制后,能起到益血、补肝、乌发的效果[8-9]。何首乌中的二苯乙烯苷可保肝,属何首乌中的主要物质[10-11]。本研究中,笔者对不同炮制工艺下、不同炮制时间下何首乌成分的含量受到的影响进行分析,以期确认最佳的炮制何首乌的工艺,保证炮制质量,现报道如下。

1 仪器、材料与方法

1.1 实验仪器 包括超声波清洗器、高效液相色谱仪、脱气机、四元泵、恒温箱、VWD检测器及HP化学工作站等。

1.2 材料 何首乌原材料来源于广东省、云南、四川、贵州的干燥块根。

1.3 二苯乙烯苷含量测定方法

1.3.1 色谱条件:3.9 mm×150 mm,5 μm色谱柱,流动相乙腈—水13∶87,流速1.0 mg/min,波长322 nm,柱温40 ℃。

1.3.2 对照溶液的制备及线性关系的研究:获取二苯乙烯苷的对照品,通过精密性称量,转移至棕色量瓶中,使用甲醇配置溶液,即每1 ml中含有0.03 mg的对照品溶液,分别吸取1、3、5、7、9 μl,注入液相色谱仪,根据以上色谱条件,测定峰面积,将测量得到的峰面积积分值作为纵坐标,将样量作为横坐标,由此表示二苯乙烯苷在0.03～0.27 μg之间的线性关系。

1.3.3 供试品溶液的制备:根据标准执行,称取0.1 g何首乌饮片粗粉,通过精密性称取,转移到锥形瓶中,精密性称取50%乙醇25 ml,然后称量。加入回流30 min,冷却至室温,再次称量,使用50%乙醇补充缺失的重量,均匀混合,充分稀释,然后使用0.45 μm的微孔滤膜对上清液进行过滤,得到的续滤液,将其当作供试品溶液。

1.3.4 精密度试验:精密性吸取同一供试品溶液,重复进样,共5次。

1.3.5 重复性试验:精密性称取同一份样品,共5分,按照供试品溶液处理,对其含量进行测定。

1.3.6 回收率试验:对同一份样品进行精密性称取,共得到5份样品,然后在样品中加入二苯乙烯对照品,按照供试品溶液处理,然后测定含量[12]。

1.3.7 供试品含量测定:通过不同的炮制方法炮制12 h、32 h,统计二苯乙烯苷的含量;通过测定豆汁炖不同时间下二苯乙烯苷的含量;通过黑豆汁炖32 h不同批次何首乌饮片;对二苯乙烯苷含量进行测定。

2 结 果

2.1 不同炮制方法下二苯乙烯苷含量比较 黑豆汁高压蒸片工艺下炮制12 h的二苯乙烯苷含量最高,黑豆汁炖片工艺下炮制32 h二苯乙烯苷含量最高,见表1。

表1 不同炮制方法下的二苯乙烯苷含量比较 (%)

2.2 不同批次何首乌生片和黑豆汁炖32 h后二苯乙烯苷与蒽醌含量比较 在生片状态下,来源于广东的三种何首乌中的二苯乙烯苷含量最高,其次为云南,四川和贵州的二苯乙烯苷含量大致相同。在黑豆汁炖32 h下,来自于云南的何首乌片的二苯乙烯苷含量最高,其次为来自于广东的何首乌生片,然后为来自于贵州的何首乌片,最低的为来自于四川的何首乌片。来自于云南的生片总大黄素含量最高、来自于广东的三种黑豆汁炖32 h片总大黄素水平最高、来自于广东的三种生片总大黄素甲醚含量最高,来自于广东的3种黑豆汁炖32 h片总大黄素甲醚含量最高,见表2。

2.3 不同炮制工艺下蒽醌含量比较 豆汁高压蒸12 h下游离大黄素含量最高、豆汁蒸32 h下游离大黄素甲醚含量最高,生片状态下,总大黄素、总大黄素甲醚、结合大黄素及结合大黄素甲醚的含量最高,见表3。

表2 不同批次何首乌生片和黑豆汁炖32 h后二苯乙烯苷 与蒽醌含量比较 (%)

表3 不同炮制工艺下蒽醌的含量比较 (mg/g)

2.4 豆汁炖不同时间下二苯乙烯苷、蒽醌及鞣质含量比较 豆汁炖在0 h下二苯乙烯苷含量最高,0 h>12 h>24 h>36 h>48 h;豆汁炖36 h后游离大黄素、游离大黄素甲醚含量最高,豆汁炖0 h下总大黄素、总大黄素甲醚、结合大黄素、结合大黄素甲醚含量最高;获取豆汁炖不同时间下各个饮片粉末10 g,通过精密性称定,按照药典方法进行测定,发现豆汁炖0 h下的何首乌中的鞣质含量最高,见表4。

表4 豆汁炖不同时间下二苯乙烯苷、蒽醌及鞣质含量 比较 (%)

3 讨 论

何首乌的块根较肥厚,形状为长椭圆形,颜色为黑褐色,何首乌的叶子为卵形、长度最长可达7 cm,宽度最宽可达5 cm,顶端逐渐变得更尖,基部为心形或类似心形,两面相对粗糙,边缘为全缘,何首乌的花的花序为圆锥状,长度最长可达20 cm,主要表现为分枝开展,苞片为三角状卵形,小突起,顶端尖,每个苞片中会存在2～4花,花梗相对细弱,长度最长只有3 mm,下部具关节,花被深裂,既包括白色又包括淡绿色,花被片为椭圆形,大小不一,外面三片较大。何首乌的果实为瘦果卵形,具三棱,长度最长只有3 mm,颜色为黑褐色,光泽明显,主要在花被内寄存,花期为8～9个月。

由表1显示,何首乌通过不同的方法进行炮制,黑豆汁高压蒸片工艺下炮制12 h的二苯乙烯苷含量最高,黑豆汁炖片炮制32 h二苯乙烯苷含量最高,通过同一种炮制方法,随着炮制时间的不断延长,二苯乙烯苷的含量越来越低,等48 h后,其含量约为生片含量的17%。由表2同样表示,不同批次的黑豆汁炖片中的二苯乙烯苷的含量和对应的生片相比更低,可能由二苯乙烯苷对湿、热不稳定性而引发的。

将两种游离的蒽醌含量的和作为指标,通过不同的炮制工艺进行炮制,根据表3结果中表明,黑豆汁高压蒸12 h和常规压力的黑豆汁蒸片以及黑豆汁炖32 h下的含量相比无明显差异,均优于清蒸后的含量,含量最低的为黑豆汁屉上蒸后。通过黑豆汁炖进行炮制,根据表4结果表明,随着炮制时间的逐渐延长,总游离蒽醌的含量先升高,再降低,总蒽醌的含量以及结合蒽醌的含量逐渐降低;由表2中的结果表明,黑豆汁炖片中的总大黄素、大黄素甲醚的含量和生片相比更低。由此可见,在炮制期间,结合蒽醌、游离蒽醌的含量也会逐渐降低,引发该现象的主要原因和游离蒽醌的热稳定性不足引发的。

在炮制何首乌期间,鞣质含量的变化报道极少,本研究结果表4中,炮制时间和鞣质含量具有密切联系,两者之间的关系为负相关性,而引发负相关性的主要原因需要进一步深入研究。

从以上研究中测定的3类成分含量(二苯乙烯苷、蒽醌、鞣质)入手,黑豆汁炖炮制后的含量稍微优于黑豆汁蒸炮制的含量。在各个省市的炮制规范中发现,黑豆汁高压蒸12 h炮制方法的应用不普遍,只有几个城市采用该方法进行炮制,因此仍需增加药理实验进一步验证。

总蒽醌的含量测定,需要通过水解进行考察,考察之后,确认需要水解10 min方可,这也与以往报道中的蒽醌含量的测定相符[13]。

利益冲突:所有作者声明无利益冲突。