神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂在自发性脑出血患者中的表达与作用

宫萍 钱希岷 徐黎明 吴卫文△

(复旦大学附属中山医院青浦分院,(1.神经内科;(2.检验科,上海 201700)

自发性脑出血是一种常见的脑卒中疾病,具有高发病率、高死亡率、高致残率的特点,给社会和家庭都带来了沉重的负担[1]。其中血脑屏障(BBB)损伤是脑出血后水肿形成的重要机制之一,而脑水肿是脑出血患者病情恶化和死亡的重要原因。因此,控制脑水肿、降低颅内压是脑出血治疗的重点之一。神经源性丝氨酸蛋白酶抑制剂(NSP)主要在中枢和外周神经系统的神经元中表达,是一种众所周知的组织型纤溶酶原激活物(t-PA)抑制剂[2]。研究[3]发现,外源性NSP能够减少脑缺血后脑血管通透性的增加从而减少BBB损伤。目前关于NSP的神经保护作用已有很多研究,但主要是在缺血性卒中、癫痫等中枢神经系统疾病,在脑出血中的作用研究较少。本研究希望通过测定ICH患者的NSP浓度,探讨NSP在ICH患者中的表达及与临床预后的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年11月至2021年7月我院神经内科住院的自发性脑出血患者65例纳入脑出血组。纳入标准:诊断为自发性脑出血,参考中国脑出血诊治指南(2019)[1];发生脑出血至入院时间<24 h;幕上出血者出血量<30 mL,幕下出血者出血量<10 mL;GCS评分≥5分;同意加入本次研究;签署知情同意书。排除标准:合并其他急性中枢神经系统疾病;合并恶性肿瘤、严重心、肝、肾功能不全及血液系统疾病等;病例资料缺失。选取同期我院医护人员及来院体检的社区居民50例纳入对照组。入组标准:年龄、性别与脑出血组匹配;既往无中枢神经系统疾病病史;签署知情同意书。

1.2方法 血清NSP的检测:脑出血组于入院次日,抽血时间距发病(38.6±10.7)h,对照组体检当日,均为清晨空腹抽取肘静脉血3 mL,室温血液自然凝固10～20 min,离心20 min左右(2 000～3 000 r/min),分离血清后置-20℃冰箱保存,待所有标本收集完成后集中进行检测。应用双抗体夹心法测定标本中NSP水平,用纯化的NSP捕获抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被的微孔中依次加入NSP,再与辣根过氧化物(HRP)标记的检测抗体结合,经过彻底洗涤后加底物四甲基联苯胺(TMB)显色,用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中NSP含量。

1.3观察指标 选择美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评估脑出血患者病情的严重程度[4];选择格拉斯哥昏迷评分(GCS)评估脑出血患者意识状态,GCS评分<15分为意识障碍[4];选择改良Rankin量表(mRS)评估脑出血患者神经功能恢复情况[6],将mRS≥2分者作为预后不良组,mRS<2分为预后良好组。

2 结 果

2.1一般资料情况比较 脑出血组共纳入病例65例,3例因3月后失访,最终完成研究62例,其中男38例,女24例;平均年龄(57.51±14.49)岁;有高血压史48例,糖尿病史11例。对照组纳入50例,其中男29例,女21例;平均年龄(60.82±14.18)岁;有高血压史15例,糖尿病史6例。两组在性别、年龄、糖尿病史方面对比差异无统计学意义(P>0.05),脑出血组有高血压史占比高于对照组(P<0.001)。

2.2脑出血组与对照组NSP浓度比较 脑出血组入院次日NSP浓度为(2.57±0.47)ng/mL,对照组NSP浓度为(2.03±0.78)ng/mL。脑出血组NSP浓度明显高于对照组(P<0.001)。

2.3脑出血组预后不同患者的临床资料及NSP水平比较 脑出血患者发病3个月后行改良Rankin量表评分,其中预后良好组37例,预后不良组25例。两组在性别、年龄、高血压史、糖尿病史、首诊舒张压水平、脑出血部位(基底核区与非基底核区)、脑出血是否破入脑室等方面无统计学差异(P>0.05)。预后良好组在入院时NIHSS评分、是否存在意识障碍、脑出血量、首诊收缩压水平均低于预后不良组(P<0.05),预后良好组NSP浓度高于预后不良组(P<0.05)。见表1。

表1 两组预后不同脑出血患者临床资料及NSP浓度比较

2.4自发性脑出血预后相关因素Logistic回归分析 对脑出血组患者预后不同两组有统计学差异的指标进行Logistic回归分析,结果显示入院时NIHSS评分、脑出血量是影响自发性脑出血患者预后的独立因素(P<0.05)。见表2。

表2 影响ICH患者预后的相关因素Logistic回归分析

3 讨 论

NSP是丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族中的一员,主要抑制t-PA、尿激酶型纤溶酶原激活剂和纤维蛋白溶酶活性,对tPA作用最强[7]。体外实验动物发现脑缺血后脑组织中NSP表达上调,外源性给予NSP可减小缺血梗死灶体积、减少神经细胞凋亡、阻止小胶质细胞激活、降低血脑屏障通透性减轻脑水肿,而细胞凋亡、脑水肿、血脑屏障破坏等在缺血和出血性卒中机制中存在共同之处[8-9]。临床研究[10-11]表明,急性缺血性卒中患者血清NSP水平在入院时高表达预示较好临床结局。W.Li等[12]在非t-PA诱导的脑出血小鼠中发现NSP在其脑组织中表达增加,在出血后48 h达高峰,血肿周围局部注射NSP可减轻脑血肿及血脑屏障通透性,证实NSP在非t-PA诱导的脑出血小鼠中存在神经保护作用,文中推测NSP可能在修复血管内皮中发挥作用,改善脑出血时血脑屏障完整性从而缓解脑水肿。

为研究NSP在临床脑出血患者中的表达,本研究检测62例在发病24 h内入院的自发性脑出血患者的血清NSP水平,通过与50例健康体检者对比,自发性脑出血患者发病后血清NSP水平明显升高(P<0.05),与W.Li等[12]在脑出血小鼠中观察的结果一致。进一步研究NSP浓度与ICH患者预后的相关性,对脑出血患者在发病3个月后采用改良Rankin量表评分进行预后评估,其中37例预后良好,25例预后不良,对两组患者进行临床相关资料及NSP浓度比较,发现预后良好组在入院时NIHSS评分、发病时存在意识障碍、脑出血量、首诊收缩压水平等方面均较预后不良组低(P<0.05),而NSP浓度预后良好组高于预后不良组(P<0.05),提示NSP可能对脑出血患者预后有保护作用;对两组间有统计学差异的指标进Logistic回归分析,结果显示入院时NIHSS评分、脑出血量是影响自发性脑出血患者预后的独立因素(P<0.05),NSP浓度暂未得到统计学差异,考虑可能因样本量过小有一定关系,需进一步增加样本量明确NSP与脑出血预后的相关性。

综上所述,本研证实自发性脑出血患者发病后血清NSP水平升高,虽然回归分析未得到NSP与自发性脑出血患者预后的显著性关系,但预后良好组NSP水平高于预后不良组,提示可能对预后有一定保护作用,后期可进一步增加样本量进行分析。NSP在自发性脑出血中的作用可以为脑出血治疗提供一种可尝试的治疗思路。