一株优良野生黑木耳菌株的筛选及其栽培特性

刘欣　张华　潘宇峰　马晓乾

摘要：  从野生黑木耳材料中，分离、纯化得到25个不同菌株，通过生物学特性和拮抗试验，选出8个独立菌株。综合测定8个菌株的长满袋天数、污染率、耳片形状及颜色、干木耳子实体产量四个指标，HM07表现优异，是适合在该地区栽培的菌株。

关键词：  野生黑木耳；  菌株；  栽培

中图分类号：   S 759. 81               文献标识码：   A                文章编号：１００1 － 9499（２０23）03 － 0042 － 03

Abstract 25 different strains were isolated and purified from wild Auricularia auricula collected in Daxing'an Mountains. By observing the biological characteristics of each strain and through antagonistic test， 8 independent strains were selected. Based on the four indexes of full bag days， pollution rate， ear shape and color and dry ear fruiting body yield of 8 strains， HM07 has excellent performance and is suitable for cultivation in this area.

Key words wild Auricularia auricula; strain; cultivation

黑木耳（Auricularia auricula）具有較高的药用和食用价值[ 1 - 3 ]。大兴安岭是我国最北、面积最大的现代国有林区，野生黑木耳在黑龙江大兴安岭分布广泛，种质资源十分丰富[ 4 ]。本研究通过驯化该地区野生黑木耳菌株，从而选育出适合寒地栽培的品质优良、产量高的黑木耳菌株，通过将其应用于生产实践中，使高寒地区黑木耳生产具有良好的种源供应，更好的促进大兴安岭地区黑木耳产业发展，为林区经济发展和产业结构调整提供有利资源。

1 材料与方法

1. 1 黑木耳材料来源

在加格达奇林业局古里林场、塔河林业局盘古林场及西林吉林业局金沟林场选择具有代表性的地点，收集了15株生长良好的野生黑木耳子实体，连同其生长的耳木一同带回。

1. 2 试验方法

1. 2. 1 供试培养基

母种培养基配方（一级菌种）（改良的PDA培养基），分别加入：马铃薯200 g、KH4PO4 3 g、MgS04 1.5 g、葡萄糖20 g、琼脂粉18 g、水1 000 ml。

栽培种培养基配方（三级菌种），分别加入：阔木屑80%、麦麸18%、1%石膏、蔗糖1%、干料∶水=1∶12（高压灭菌3 h）。

1. 2. 2 分离、纯化黑木耳菌株

组织分离法：首先使用70%的酒精棉球对黑木耳子实体的表面进行消毒，切取一小部分组织块。切取组织块时需要在无菌条件下使用70%酒精，进行表面消毒l min，马上移入含0.1%升汞溶液中进行消毒1～2 min，使用无菌纯水冲洗3次，再用灭菌过的剪刀将组织块剪成2 mm大小，接入改良过的PDA平板培养基上，在25℃恒温下进行培养。

基内菌丝分离法：选择皮下生有耳芽、长有子实体的耳木，用酒精将其表面浸湿，点燃后使用无菌刀片劈开耳木，通过横断面分辨出有菌丝的部位，分离材料选取1 cm厚的木块，在0.1%升汞中无菌条件下浸泡15～20 s后取出，用无菌水洗去残留的消毒液，将无菌纱布吸干水分后置于另一块无菌纱布之上，用解剖刀灭菌后将木块劈成火柴头大小的木块，使用无菌针少量挑取长有菌丝的耳木接种到改良的PDA平板培养基上，在25℃恒温下进行培养。

纯化培养：在菌落边缘选取前端菌丝体，斜面进行接种，恒温培养。反复移植2～3次，得到纯菌株。纯化后的菌种转接、扩繁到斜面培养基的试管中保藏，作为备份。

1. 2. 3 拮抗试验

将供试黑木耳菌株两两块接种到直径90 mm的平板培养基中，接种块相距30 mm，25℃下静置培养7～15天后，待平板内不同菌丝菌株接触后，观察菌丝接触部位、菌丝的亲和程度及拮抗线形成情况，做好记录，具体形态特征隆起、隔离型、沟型参照《GB/T12728食用菌术语》的规定来判定[ 5 ]。通过该试验，可以初步排除采集菌株中的相同菌株，提高后续试验的效率。

1. 2. 4 菌丝长势、长速对比试验

（1）将得到的纯化菌株置于25℃恒温培养箱中培养，定期观察各菌株在室温下的生长情况，如菌丝粗壮、浓密程度、颜色等。精确测量菌落半径并记录结果。通过对比菌丝浓密度和菌落形态可以得出菌种的生长势。

菌丝生长速率（mm/d ）= 菌落半径（mm）/菌丝生长天数（d）

（2）各菌株分别接种三级菌100 袋，待菌丝铺满料面时，随机选取 10 袋，每隔 2天观察菌丝长势，测量其长度并记录菌丝长满袋的时间，计算日均菌丝生长速度。

1. 2. 5 栽培出耳试验

每个菌株平行做 100 袋栽培袋，闭光恒温培养直到菌丝长满袋，然后散色光照促使耳基形成，最后将菌袋移到耳场进行出耳栽培，记录菌株袋料栽培菌丝特征、出耳产量、满袋天数和耳片特征，并计算污染率。

2 结果与分析

2. 1 黑木耳菌株的分离、纯化及拮抗试验

从采集的野生黑木耳材料中， 通过组织分离法和基内菌丝分离，共分离、纯化得到25个不同菌株，经室内观测各菌株营养生长和生殖生长的生物学特性，通过拮抗试验，排除了采集菌株中的相同菌株，选出其中8 个独立菌株进入后续试验， 分别编号为HM01、HM02、HM03……HM08。

2. 2 菌丝长势、长速对比试验

不同菌株菌丝生长速度见表1，不同菌株菌丝的营养生长性状见表2、表3。

从表1中可以看出，HM07号菌丝生长最快，为（5.9±0.02）mm/d，HM01、HM05次之，达到了5.0 mm/d，HM08號菌丝生长最慢，仅有3.8 mm/d。

从表2、表3中可以看出供试菌株中HM01、HM05及HM07号菌丝生长旺盛、菌丝粗壮、洁白、长势好。HM02、HM03及HM04菌丝生长菌丝生长较好，HM06、HM08号菌丝长势较差、菌丝稀疏、较细不健壮。

2. 3 栽培出耳试验

不同黑木耳菌株产量情况见表4，黑木耳菌株子实体商品性能见表5。

从表4可以看出，HM07号菌丝生长最快，且菌丝活性最强，污染率相对较低，木耳产量最高，达到了39.62 g；HM01和HM05次之，HM02、HM08号长势最差，产量相对较低，仅为28.17 g。

目前市场对黑木耳商品性能分析的指标如下：耳片形状为碗状和小片为优，耳片颜色正面黑褐色为质量好，颜色发黄色均为劣质。由表5 可知HM01、HM05、HM07 号菌株商品性能表现符合优秀黑木耳商品的要求且优于其他试验菌株。

3 结论与讨论

（1）从采集的野生黑木耳材料中，分离、纯化得到25个不同菌株，观测各菌株的生物学特性，进一步通过拮抗试验，选出其中8个独立菌株进入后续试验。

（2）平板菌丝生长速度和袋料菌丝生长速度基本上保持一致，菌袋菌丝的生长速度高低和干木耳子实体产量的多少呈正相关的关系。综合8个菌株的污染率、长满袋天数、耳片形状及颜色、干木耳子实体产量这四个指标，只有HM01、HM05及HM07在3个方面都表现较好，是适合在该地区栽培的菌株。其中HM07菌株菌丝体洁白色，浓密，生长整齐，后期分泌出褐色液体；菌丝呈管状，有横隔，分枝，有锁状联合。子实体特征表现为：新鲜的子实体呈半透明状，胶质，碗型，极富有弹性，直径一般为 8～10 cm，厚为 0.8～1mm，干燥后快速缩成角质状，且又脆又硬。子实体颜色为黑褐色，有背腹面区分，背面部位平滑且有毛，腹面具有羊肚状的皱褶，颜色区分不为明显，品质优良。

参考文献

［1］ 李玉.  中国黑木耳［M］.  长春：  长春出版社， 2001.

［2］ 李红卫.  黑木耳的营养［J］.  中国果蔬， 2004（2）： 47．

［3］ 张燕燕，  刘新春，  王雪，  等.  黑木耳营养成分及生物活性研究进展［J］.  南方农业， 2018， 12（29）： 130 - 134.

［4］ 楼隆后，  朱慧真，  汤华光，  等.  木耳属种类的初步研究［J］.中国食用菌， 1992，15（4）： 30 - 32.

［5］ 国家技术监督局食用菌术语GB/T12728-2006［S］.  2006，12.

［6］ 陶梅，  赵存玉，  张晓燕.  寒地野生黑木耳人工驯化技术研究［J］.林业科技， 2017，42（1）：40-41.

［7］ 郭鑫.  地栽黑木耳菌种选育、  鉴定与替代原料研究［D］. 哈尔滨： 黑龙江大学， 2010.

［8］ 殷培峰.  桑金钱菌的培养性状及其生理活性物质的研究［D］.苏州： 苏州大学， 2005.