深圳地区0～2岁健康儿童淋巴细胞亚群参考区间的建立*

王甩艳,黄 涛,卢文深,莫红梅△

1.广东省深圳市罗湖区人民医院医学检验科,广东深圳 518001;2.广东省深圳市儿童医院检验科,广东深圳 518026

体内不同的免疫功能状态是辅助临床疾病诊断、探索疾病发病机制、病程、预后、监测、指导临床治疗方案的重要依据之一。淋巴细胞或淋巴细胞亚群的数量和功能变化在临床各种类型免疫缺陷症、自身免疫性疾病及肿瘤等疾病的诊疗中具有十分重要的作用。在免疫性疾病和血液疾病中儿童时期淋巴细胞亚群会发生剧烈变化,外周血淋巴细胞亚群的免疫表型能否为诊治提供重要信息也取决于年龄匹配的健康个体的参考值,已有很多学者在各种种族人口中对外周血淋巴细胞亚群的参考范围进行了评估[1-5]。然而国内目前尚无统一的0～2岁健康儿童淋巴细胞亚群的参考区间。因此,建立本地区的淋巴细胞亚群的参考区间是十分重要和必要的。本研究建立了深圳地区0～2岁健康儿童淋巴细胞亚群的相对和绝对数量的参考区间,现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2018年7月1日在广东省深圳市罗湖区人民医院和广东省深圳市儿童医院健康体检的268例0～2岁健康儿童外周血标本检测淋巴细胞亚群的相关数据,其中男136例,女132例。依据《中华人民共和国卫生行业标准WST-402-2012》收集相关数据。排除标准:(1)患有黄疸、自身免疫性疾病、恶性黑色素瘤、中枢神经系统病变等;(2)肝、肾功能不全;(3)体检结果异常;(4)近期出现发热、咳嗽等不适;(5)近期有用药史。

1.2仪器与试剂 仪器为迈瑞BriCyte E6 流式细胞仪,依据标准操作程序检测淋巴细胞亚群各参数值。使用迈瑞CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC四色试剂和CD3-FITC/ CD16+CD56+-PE/CD45-PerCP/CD19-APC四色试剂。

1.3方法

1.3.1室间质量评价 2017年10月至2021年10月实验室皆参加全国临床检验室间质量评价淋巴细胞亚群10个检验项目全部合格,保证了检测结果的正确度。

1.3.2建立参考区间[6]

1.3.2.1标本采集与检测 按试剂盒说明书要求采集儿童血清,用上述仪器及试剂进行检测。

1.3.2.2数据中疑似离群值的判断 采取Dixon法判断离群值。将疑似离群点和其相邻点的差值D和数据全距R相除,D/R应≤1/3,超出1/3考虑为离群点。若有≥2个疑似离群点可将最小的疑似离群点如上进行处理。若>1/3则剔除所有数据;若<1/3则保留所有数据。

1.3.2.3分组 按性别分组,采用统计学方法比较组间差异,若差异有统计学意义则在保证每组标本数为120例的条件下重新计算参考区间;若差异无统计学意义则无需重新计算参考区间。

1.3.2.4参考区间的验证 采用小样本参考个体的验证,选择20例健康儿童外周血标本(符合相应的排除标准)对参考区间进行验证,20例参考个体中<2例的数值在参考区间之外则参考区间适用。

2 结 果

2.2不同性别儿童淋巴细胞亚群各项指标比较 女性儿童CD3+CD4+%、CD3+CD4+/CD3+CD8+比值均高于男性, CD3+CD8+%低于男性,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同性别儿童其他指标水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1、2。

表1 不同性别儿童外周血淋巴细胞亚群T、B、NK细胞相对数

表2 不同性别儿童外周血淋巴细胞亚群T、B、NK细胞绝对数个/微升)

2.3淋巴细胞亚群的参考区间 深圳地区0～2岁健康儿童淋巴细胞亚群T、B、NK细胞的相对数、绝对数的参考区间见表3、4。

表3 外周血淋巴细胞亚群T、B、NK细胞相对数的参考区间

表4 外周血淋巴细胞亚群T、B、NK细胞绝对数的参考区间(个/微升)

2.4参考区间验证结果 女性儿童中CD3+CD4+/CD3+CD8+比值不在建立的参考区间范围内1例,其余检测值均在参考区间范围内,故建立的参考区间适用于本地区儿童。见表5。

表5 外周血淋巴细胞亚群参考区间验证结果(n=20)

3 讨 论

淋巴细胞是人体发挥免疫功能的重要组分,尤其是在儿童抗感染免疫中发挥着重要作用,是防卫病原体入侵最有效的武器。根据其生物功能和细胞表面抗原表达情况分为NK(CD3-CD16+CD56+)、T(CD3+)、B(CD3-CD19+)淋巴细胞不同亚群[7]。T淋巴细胞是淋巴细胞的主要组分,具有多种生理学功能,是人体细胞免疫功能状态的重要指标,T淋巴细胞水平升高多为发生超敏反应,降低则多表示机体免疫功能降低,易发生感染。成熟T淋巴细胞可根据其细胞表面CD4、CD8的表达不同分为CD4+T淋巴细胞 (CD3+CD4+)和 CD8+T淋巴细胞(CD3+CD8+)。其中CD4+T淋巴细胞主要为辅助性T细胞,既可通过产生细胞因子辅助细胞免疫和体液免疫,同时也可起到免疫抑制的作用。CD4+T淋巴细胞增高容易出现超敏反应,发生自身免疫性疾病,降低则易发生感染等。CD8+T淋巴细胞主要为细胞毒性T淋巴细胞,是免疫反应中的直接杀伤性细胞,可通过释放毒性蛋白导致细胞凋亡从而杀伤靶细胞。其增加可导致严重的免疫缺陷,减少可发生过强的免疫反应。另外辅助性T淋巴细胞与细胞毒性T淋巴细胞比值(CD3+CD4+/CD3+CD8+)也有其一定的意义,升高常表明细胞免疫功能处于极度活跃状态,常见于自身免疫性疾病;比值降低则相反,表明细胞免疫功能处于免疫抑制的状态,常见于免疫缺陷病、感染性疾病,如恶性肿瘤、呼吸道感染等。B淋巴细胞也是淋巴细胞的主要组分之一,能通过产生分泌各种免疫球蛋白和抗体,从而介导体液免疫应答[8]。其水平升高一般与变态反应性疾病和感染性疾病相关,降低常见于免疫缺陷病和感染性疾病。NK细胞是机体重要的免疫细胞,发挥介导病原体感染细胞的细胞毒作用[9],在抗肿瘤、抗病毒感染、免疫调节中发挥着重要作用。因此,不同的免疫应答途径会使淋巴细胞亚群水平出现不同变化,即淋巴细胞及其亚群的消长能反映机体在不同条件下免疫功能的变化,可用于与免疫系统明显相关疾病的辅助诊断、判断病情、评估预后、指导治疗及疗效监测,而提供这一重要信息依据于年龄匹配的健康个体的参考值。

综上所述,对0～2岁儿童这一特殊群体国内外目前尚无统一的淋巴细胞亚群的健康人群参考区间。及早发现儿童非正常细胞免疫状态可及早明确重症感染的原因和原发性疾病的诊断,而0～2岁儿童淋巴细胞亚群存在较大差异,并且不同地区实验室所用的流式细胞仪不同、试剂不同、对试验数据处理的方法也有差异。因此,建立本地区0～2岁健康儿童淋巴细胞亚群的参考区间无论是对今后的基础研究还是当前临床诊治均显得尤为重要和必要。