子宫内膜癌组织NRP1、Talin1的表达及其临床意义

王红玫,韩伟,张丹

(重庆市大足区人民医院 妇科,重庆 402360)

我国子宫内膜癌在女性生殖系统恶性肿瘤中是发病率仅次于宫颈癌的第二大恶性肿瘤,且其发病年龄趋于年轻化[1]。子宫内膜癌发生在子宫内膜,在女性围绝经期和绝经后发生较多[2]。迄今,子宫内膜癌的发病机制尚未完全明确,寻找能够有效预测子宫内膜癌预后的生物标志物对于其靶向治疗具有重要意义。神经纤毛蛋白-1(NRP1)是一种跨膜糖蛋白,在胚胎组织发育、血管生成、肿瘤转移中有重要作用[3]。有研究发现,NRP1表达上调改变肿瘤微环境,促进肿瘤细胞有丝分裂,刺激肿瘤生长、浸润、转移[4]。踝蛋白1(Talin1)是一种细胞骨架蛋白,广泛参与癌症的发生发展过程,如癌细胞的极化、转移等[5-6]。目前,对子宫内膜癌组织NRP1、Talin1表达研究较少。本研究通过检测子宫内膜癌组织中NRP1、Talin1的表达,探究二者与肿瘤进展、预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月至2017年1月在我院就诊的子宫内膜癌患者156例,患者均行手术治疗,术中收集癌组织和癌旁组织。患者年龄31～76岁,平均(62.50±12.76)岁,其中≥60岁87例,<60岁69例;肿瘤大小≥5 cm 50例,<5 cm 106例;淋巴结转移46例,未转移110例;肿瘤低分化65例,中、高分化91例;肿瘤浸润深度浅肌层93例,深肌层63例;临床分期Ⅰ～Ⅱ期99例,Ⅲ期57例。纳入标准:(1) 按照《子宫内膜癌诊断与治疗指南(第四版)》[7]诊断为子宫内膜癌的患者;(2) 初诊,具有手术治疗指征并接受手术治疗者;(3) 在本院治疗前未接受过放、化疗或其它抗肿瘤治疗者。排除标准:(1) 伴有慢性疾病,如合并心脑血管疾病等;(2) 合并其他恶性肿瘤;(3) 孕期或哺乳期女性;(4) 有心理或精神障碍。本研究通过本院伦理委员会批准,患者及家属知情并签署同意书。

1.2 主要仪器和试剂

鼠抗人NRP1抗体购自中国上海恪敏生物科技有限公司;鼠抗人Talin1单克隆抗体购自中国深圳市康初源有限公司;免疫组织化学试剂盒购自深圳子科生物有限公司;显色试剂盒购自中国深圳市康初源有限公司;二抗购自上海莼试生物技术有限公司;石蜡切片机购自中国上海恪敏生物科技有限公司;显微镜购自北京德航五洲科技有限公司。

1.3 样品采集

采集子宫内膜癌患者癌组织和癌旁组织,置于无液氮RNA样品组织保存液中,-80 ℃保存待测。

1.4 免疫组化法检测NRP1、Talin1表达情况

采用免疫组化法测定患者癌组织和癌旁组织NRP1、Talin1表达水平。用4%甲醛将待测组织样本固定24 h,石蜡包埋, 4 μm厚切片。对切片脱蜡、脱水,加入相应的一抗,4 ℃孵育过夜,然后用PBS冲洗两次,加入二抗,4 ℃孵育1 h,采用DAB显色、苏木素复染,然后分化、脱水、封片、镜检。

1.5 染色结果判定标准

采用半定量评分法判定表达结果。阳性细胞比例判定标准:阳性细胞比例<25%记为0分;25%～50%记为1分;51%～75%记为2分;>75%记为3分。染色强度判定标准:无染色记为0分;弱染色记为1分;中染色记为2分;强染色记为3分[8]。根据染色指数判定结果,染色指数为阳性细胞比例和染色强度评分的乘积,染色指数范围为0～9分,染色指数≥3分为阳性,染色指数<3分为阴性[9]。评分过程由两名专业人员操作。

1.6 随访

对子宫内膜癌患者术后进行为期5年的随访。随访方式为电话随访或入院复查,随访内容为患者生存情况。随访终止时间为2022年1月,随访终点为患者死亡或随访结束。本研究中,随访死亡患者死因均为子宫内膜癌。

1.7 统计学处理

采用SPSS 25.0统计软件处理数据。计数资料以例表示,行χ2检验。采用Kaplan-Meier法分析NRP1、Talin1表达与患者预后的关系。采用多因素Cox回归分析影响子宫内膜癌患者预后的危险因素。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 癌组织和癌旁组织NRP1、Talin1阳性表达情况

癌组织中NRP1阳性率为62.82%,高于癌旁组织的35.26%(P<0.05);Talin1在癌组织中的阳性率为61.54%,低于癌旁组织的95.51%(P<0.05)。见表1、图1。

表1 癌组织和癌旁组织NRP1、Talin1阳性表达情况 例

A.子宫内膜癌组织NRP1的表达;B.癌旁组织NRP1的表达;C.子宫内膜癌组织Talin1的表达;D.癌旁组织Talin1的表达图1 癌组织和癌旁组织中NRP1、Talin1的阳性表达

2.2 NRP1、Talin1表达与子宫内膜癌患者临床病理特征的关系

组织分化程度低、临床分期Ⅲ期的子宫内膜癌患者NRP1阳性率升高,Talin1阳性率降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);不同年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、肌层浸润患者NRP1、Talin1的表达差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 NRP1、Talin1表达与子宫内膜癌患者临床病理特征的关系 例

2.3 NRP1、Talin1表达与患者预后的关系

对患者随访5年,NRP1阳性患者的累计生存率为61.22%(60/98),阴性患者为93.10%(54/58);Talin1阳性患者的累计生存率为92.71%(89/96),阴性患者为41.67%(25/60)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,NRP1阳性患者生存率低于阴性患者(χ2=18.821,P<0.001),Talin1阴性患者生存率低于阳性患者(χ2=48.893,P=0.001),见图2。

图2 NRP1、Talin1表达与预后的关系

2.4 Cox回归分析影响子宫内膜癌预后的危险因素

以子宫内膜癌患者生存状况为因变量(死亡=1,存活=0),以年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、肌层浸润、组织分化程度、临床分期和NRP1、Talin1表达为自变量,进行Cox回归分析。单因素、多因素Cox回归分析结果均显示,NRP1阳性表达、Talin1阴性表达、分化程度低、临床分期Ⅲ是影响子宫内膜癌患者预后的危险因素(P<0.05)。见表3。

表3 Cox回归分析影响患者预后的危险因素

3 讨 论

子宫内膜癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,其发病率排全球女性罹患癌症的第六位[7]。近年来,子宫内膜癌发病率升高、发病年龄趋于年轻化[10]。子宫内膜癌多发生于绝经期、绝经后的女性,临床表现为阴道异常流血,多数患者确诊时已是中晚期[11]。目前,子宫内膜癌的主要治疗手段为手术治疗、放疗、化疗、内分泌治疗等,但患者预后较差,生存时间短[12-13]。迄今,子宫内膜癌的发生机制尚未完全清楚。寻找子宫内膜癌有效的生物标志物,对改善患者的治疗、预后,提升患者生存质量具有重要的意义。

NRP1是属于神经纤毛蛋白家族的一种跨膜受体,具有调节神经系统轴突、促进血管新生、修复血管损伤等功能[4,14]。多项研究表明,NRP1在肿瘤的发生发展中起重要作用。有研究发现,在食管鳞状细胞癌中NRP1过表达促进癌细胞增殖,刺激食管鳞状细胞癌的发展[15]。因此,NRP1有可能是癌症治疗的潜在靶点。Talin1属于踝蛋白家族,踝蛋白家族是一类重要的大分子骨架蛋白、调控蛋白,在不同环境中具有不同的作用机制,发挥特定的功能[16]。Talin1位于细胞基质附着位点,通过活化整合素进而影响肿瘤的发生、转移等[17]。迄今,对子宫内膜癌中NRP1和Talin1的表达水平及其与病情进展、预后的关系研究较少。本研究结果显示,NRP1在癌组织中的表达水平高于其在癌旁组织中的表达水平,Talin1在癌组织中的表达水平低于其在癌旁组织中的表达水平,说明NRP1和Talin1的异常表达均与子宫内膜癌发生发展有关。Zhu等[18]发现,胆管癌中NRP1表达上调促进癌细胞的增殖和迁移,促进肿瘤生长。已证实,Talin1与肝癌细胞的迁移和黏附有关,并且可作为肝癌的诊断指标[19]。以上研究提示,NRP1、Talin1异常表达可能通过某种途径调控子宫内膜癌细胞增殖、迁移等活性,进而对疾病进展有积极促进作用。杨永超等[4]研究显示,NRP1异常表达与涎腺腺样囊性癌的临床分期、肿瘤细胞是否侵犯颈部淋巴结、组织学类型有关。本研究结果显示,组织分化程度低和临床分期Ⅲ期的子宫内膜癌患者NRP1阳性率升高,Talin1阳性率降低,表明NRP1和Talin1可能通过某种途径参与子宫内膜癌的发生发展,与病情恶化有关,可作为其临床检测指标。此外,NRP1高表达的肝细胞癌患者术后1年内复发率高于低表达者[20]。有研究[21]表明,在结直肠癌中,Talin1低表达促进肿瘤发展,低表达者预后较差。结合NRP1、Talin1表达情况,本研究采用Kaplan-Meier法分析两者与子宫内膜癌患者的预后关系,结果显示NRP1阳性患者的生存率低于阴性患者,Talin1阴性患者的生存率低于阳性患者,提示NRP1高表达、Talin1低表达的子宫内膜癌患者生存率较低、预后较差,二者可能成为子宫内膜癌治疗的潜在靶基因。多因素Cox回归分析显示,NRP1高表达、Talin1低表达是影响子宫内膜癌患者不良预后的危险因素,提示NRP1高表达和Talin1低表达具有评估子宫内膜癌患者预后的作用,通过检测二者表达水平,临床可制定合理治疗方案,改善治疗、预后效果,降低死亡率。

综上所述,子宫内膜癌患者组织中NRP1表达上调,Talin1表达下调,二者与组织分化程度、临床分期以及患者预后密切相关,是影响子宫内膜癌患者预后的危险因素。NRP1和Talin1共同参与了子宫内膜癌的发生发展过程,与肿瘤发展关系密切,可作为预测子宫内膜癌患者预后的生物标志物。临床可参考二者表达水平评估患者病情,进而改善预后。但本研究并未对子宫内膜癌的发病机制与NRP1和Talin1的关系进行研究,后续需进一步探索二者与子宫内膜癌发生的关系。