UPLC-MS/MS法同时快速测定保健食品中10种降压类非法添加化学药

王晓峰 许琨琨 卢文斌 吴芳海 蔡振世 林晓明

摘 要：目的：建立同时测定保健食品中10种降压类非法添加化学药的UPLC-MS/MS快速检测方法。方法：液相采用ACQUITY UPLC?BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）柱，以超纯水（含0.1%甲酸）-乙腈（0.1%甲酸）为流动相，进行梯度洗脱，进样量2 μL，流速0.3 mL·min-1，柱温30 ℃。质谱采用ESI，正、负离子多反应监测模式，进行定性分析和定量分析。结果：盐酸普萘洛尔、酒石酸美托洛尔、艾司洛尔、比索洛尔、坎地沙坦、厄贝沙坦、替米沙坦、氯沙坦、缬沙坦和吲达帕胺的分离度良好，线性范围内相关性均较好，R2均大于0.996 3；平均回收率为93%～118%；RSD为1.4%～4.9%（n=6）；方法检出限为0.10～5.00 μg·kg-1；方法定量限为0.30～15.00 μg·kg-1；单次分析仅需12 min。结论：该方法操作便捷、检测时间短、灵敏度高、结果准确，适用于保健食品中10种降压类非法添加化学药的快速筛查及定量检测。

关键词：UPLC-MS/MS；保健食品；降压类药物

Abstract： Objective： To establish a UPLC-MS/MS rapid detection method for simultaneously determining 10 illegally added chemical antihypertensive drugs in health foods. Method： ACQUITY UPLC?BEH C18（ 2.1 mm×100 mm， 1.7 μm） column was used in the liquid phase with ultrapure water （containing 0.1% formic acid）-acetonitrile （0.1% formic acid） as the mobile phase for gradient elution， the injection volume was 2 μL， flow rate was 0.3 mL·min-1， and column temperature was 30 ℃. The mass spectrometry was performed by ESI， positive/negative ion multiple reaction monitoring mode for qualitative and quantitative analysis. Result： The separation degree of propranolol， metoprolol， amlodipine， bisoprolol， candesartan， irbesartan， telmisartan， losartan， valsartan， and indapamide was good， and the linear range correlations were good， all R2 values were greater than 0.996 3. The average recovery rate was 93%～118%. RSD was 1.4%～4.9% （n=6）. The LOD was between 0.10～5.00 μg·kg-1， and the LOQ was between 0.30～15.00 μg·kg-1. A single analysis only requires 12 min. Conclusion： The method is simple to operate， has short detection time， high sensitivity， and accurate results， and it is suitable for the rapid screening and quantitative detection of 10 illegally added chemical antihypertensive drugs in health foods.

Keywords： UPLC-MS/MS; health food; antihypertensive drugs

隨着近年来我国经济的迅速发展，人们的生活质量得到了很大提高，同时老年人口不断增加，导致出现越来越多的高血压患者，市场上也出现了越来越多的辅助降压类保健食品。为了牟取不当利益，一些不法分子会在保健食品中非法添加化学药物，以增强其产品功效。非法添加化学药物的保健食品很可能给服用者带来一定的副作用和不良反应，严重的甚至导致死亡。因此国家严厉打击化学药物在保健食品中被非法添加的违法违规行为，而对这类非法保健食品进行检测，成为相关部门监管执法的重要依据。目前，我国颁布的针对辅助降血压类保健食品中非法添加化学药物的检验方法有药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件2009032、2014008两份文件，主要针对利血平、硝苯地平等12种降压类化学药物的检验[1]。本文筛选了另外10种降压类化学药物，建立了用UPLC-MS/MS快速定性和定量分析保健食品中这10种化学药物的方法[2-8]。

本方法增加了筛查覆盖面、提高了检验效率，可为监管部门的监管工作提供技术保障。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

盐酸普萘洛尔（批号：ALT600791）、酒石酸美托洛尔（批号：ALT702199）、艾司洛尔（批号：ALT701847）、比索洛尔（批号：FS1619422）、缬沙坦（批号：ALT601380）、氯沙坦（批号：ALT601382）、厄贝沙坦（批号：ALT601379）、坎地沙坦（批号：FS1619633）、替米沙坦（批号：FS1606242）、吲达帕胺（批号：FS1605112），均购自天津阿尔塔科技有限公司；色谱纯乙腈（品牌：默克）；色谱纯甲酸（品牌：ROE）；水为超纯水；三重四极杆液质联用仪（爱博才思公司，Triple Quad 5500）。

1.2 色谱与质谱条件

1.2.1 色谱条件

色谱柱：ACQUITY UPLC?BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；流动相：A相为超纯水（含0.1%甲酸），B相为乙腈（含0.1%甲酸）；流速：0.3 mL·min-1；柱温：30 ℃；进样量：2 μL；梯度洗脱见表1。

1.2.2 质谱条件

（1）盐酸普萘洛尔等9种化合物。离子源：ESI；扫描方式：MRM，正离子模式；气帘气：20 psi；离子化电压：5 500 V；温度：500 ℃；喷雾气（GS1）：50 psi；辅助加热气（GS2）：50 psi。

（2）缬沙坦。离子源：ESI；扫描方式：MRM，负离子模式；气帘气：20 psi；离子化电压：-4 500 V；温度：500 ℃；喷雾气（GS1）：50 psi；辅助加热气（GS2）：50 psi。各化合物质谱参数见表2。

1.3 混合标准曲线系列的制备

精密称取上述10种化合物的对照品各10 mg，用乙腈溶解，并转移至10 mL容量瓶中定容，配制成浓度为1.0 mg·mL-1的混合标准储备溶液。用乙腈将混合标准储备溶液（1.0 mg·mL-1）稀释1 000倍，配制成1 000 ng·mL-1的混合标准工作溶液。用超纯水将混合标准工作溶液（1 000 ng·mL-1）分别稀释成浓度为10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、200 ng·mL-1、300 ng·mL-1和500 ng·mL-1的混合标准曲线系列。

1.4 样品处理方法

称取1 g（精确到0.001 g）样品置于50 mL离心管中，往离心管中加入20 mL乙腈，涡旋混匀后超声提取15 min，用离心机（转速：5 000 r·min-1）离心10 min，然后转移上清液到50 mL容量瓶中，重复上述步骤，将上清液合并，用乙腈定容至50 mL，摇匀，取上清液过0.22 μm微孔滤膜，滤液直接供测定。

2 结果与分析

2.1 专属性试验

分别将混合标准溶液（100 ng·mL-1）、加标供试品溶液（加标浓度100 ng·mL-1），按“1.2”项下测定，结果见图1、图2。结果显示对照品与加标供品中各组分色谱峰保留时间一致，且各组分间无干扰，表明方法专属性良好。

2.2 线性范围与检出限、定量限试验

将“1.3”项下的混合标准曲线系列溶液按“1.2”项下测定，并绘制标准曲线，横坐标（X）为混合标准溶液浓度，纵坐标（Y）为各成分峰面积。取阴性样品，按100 μg·kg-1的添加量加入混合对照品溶液，经适当稀释后进样，分别以S/N=3时和S/N=10时计算各化合物的检出限和定量限，结果见表3。10种化合物在线性范围内相关性均较好，且具有较高的灵敏度，能够满足检测要求。

2.3 加标回收率及重复性试验

按“1.4”项下方法平行制备6份加标浓度为100 ng·mL-1的加标供试品溶液，并按“1.2”项下测定，记录色谱峰面积，计算RSD，同时代入“2.2”项下线性回归方程中计算平均浓度，并计算平均回收率，结果见表4。该方法各化合物的平均回收率在93%～118%，结果比较满意；RSD范围在1.4%～4.9%，重复性较好。

2.4 进样精密度试验

取100 ng·mL-1混合标准溶液平行测定6次的RSD评价精密度。由表5可知，各化合物的精密度均符合检测要求。

2.5 基质效应考察结果

将不含目标待测物的胶囊样品按“1.4”项下方法处理后得到基质空白溶液，分别向基质空白和乙腈中添加一定浓度的待测物混合标准溶液，进行UPLC-MS/MS分析。通过计算各化合物在基质溶液与标准溶液中峰面积的比值，用来评价样品的基质效应。若两者的峰面积之比在80%～120%，表明基质效应不明显；在50%～80%或120%～150%，表明存在轻微的基质效应；低于50%或高于150%则表明基质效应极其显著[4-5]。测得结果分别为盐酸普萘洛尔126%、酒石酸美托洛尔109%、艾司洛尔122%、比索洛尔117%、氯沙坦121%、厄贝沙坦136%、坎地沙坦122%、替米沙坦96%、吲达帕胺111%和缬沙坦103%，由此可知，盐酸普萘洛尔、艾司洛尔、氯沙坦、厄贝沙坦、坎地沙坦均存在轻微的基质效应，酒石酸美托洛尔、比索洛尔、替米沙坦、吲达帕胺、缬沙坦基质效应不明显。因此，可采用配制基质匹配标准曲线的方法来减少基质对目标化合物的影响，以提高定量分析的准确度。

2.6 供试品的含量测定

采用所建立的方法对5种辅助降压类保健食品进行了检测，均未檢出上述10种化合物。同时做加标实验，加标水平均为5.00 mg·kg-1，结果见表6，10种化合物回收率均在86%～118%，结果准确可靠。

3 结论

随着治疗高血压的化学药品种越来越多，在辅助降压类保健食品中可能被非法添加的种类和方式也越来越多样，需要通过不断的研究和试验，以满足现实检测的需要。本方法的前处理简单快速、样品检测时间短、灵敏度高且结果准确可靠，扩大了降压类非法添加化学药物的筛查范围，为保障公众食品安全，打击违法添加行为，监管保健食品市场提供了有力的技术支持。

参考文献

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