血清EBV抗体及其DNA联合检测对鼻咽癌诊断价值

［摘要］ 目的 探讨血清EB病毒（EBV）抗体以及EBV-DNA联合检测在鼻咽癌治疗前诊断中的临床价值。

方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测163例鼻咽癌病人和140例健康对照者血清EBV衣壳抗原IgA（VCA-IgA）、早期抗原IgA（EA-IgA）、Rta蛋白IgG（Rta-IgG）抗体水平，荧光定量聚合酶链式反应法检测EBV-DNA载量，评价各项指标在鼻咽癌诊断中的价值。

结果 鼻咽癌病人血清EBV VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG抗体效价和EBV-DNA载量水平以及其阳性率均显著高于健康对照者（t=12.499～14.597，Z=12.893，χ2=51.274～153.132，P＜0.05）。VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA联合检测诊断鼻咽癌的曲线下面积（AUC）为0.992。Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌病人VCA-IgA、Rta-IgG抗体效价及EBV-DNA载量均显著高于Ⅰ～Ⅱ期病人（t=3.332、4.324，Z=10.507，P＜0.05）。

结论 VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA联合检测对于鼻咽癌早期筛查及诊断具有较高的临床价值。

［关键词］ 鼻咽癌；疱疹病毒4型，人；抗体，病毒；DNA，病毒；诊断

［中图分类号］ R739.63

［文献标志码］ A

［文章编号］ 2096-5532（2023）01-0064-04

doi：10.11712/jms.2096-5532.2023.59.017

［网络出版］ https：//kns.cnki.net/kcms/detail/37.1517.R.20230302.1738.005.html;2023-03-03 17：08：42

VALUE OF COMBINED MEASUREMENT OF SERUM EPSTEIN-BARR VIRUS ANTIBODIES AND EPSTEIN-BARR VIRUS DNA IN THE DIAGNOSIS OF NASOPHARYNGEAL CARCINOMA

QIN Ni， WANG Shuai， LIU Wen

（School of Basic Medicine， Qingdao University Medical College， Qingdao 266071， China）

; ［ABSTRACT］ "Objective "To investigate the clinical value of combined measurement of serum Epstein-Barr virus （EBV） antibodies and EBV-DNA in the preoperative diagnosis of nasopharyngeal carcinoma.

Methods "A total of 163 patients with nasopharyngeal carcinoma and 140 healthy controls were enrolled. ELISA was used to measure the serum levels of VCA-IgA， EA-IgA， and Rta-IgG， and quantitative real-time PCR was used to measure EBV-DNA load. The value of each indicator in the diagnosis of nasopharyngeal carcinoma was analyzed.

Results ""Compared with the healthy controls， the patients with nasopharyngeal carcinoma had significantly higher titers of VCA-IgA， EA-IgA， and Rta-IgG antibodies and significantly higher load and positive rate of EBV-DNA （t=12.499-14.597，Z=12.893，χ2=51.274-153.132，Plt;0.05）. Combined measurement of VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA had an area under the ROC curve of 0.992 in the diagnosis of nasopharyngeal carcinoma. The patients with stage Ⅲ-Ⅳ nasopharyngeal carcinoma had significantly higher titers of VCA-IgA and Rta-IgG antibodies and EBV-DNA load than those with stage Ⅰ-Ⅱ nasopharyngeal carcinoma （t=3.332， 4.324，Z=10.507，Plt;0.05）.

Conclusion "Combined measurement of VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA has a high clinical value in the early screening and diagnosis of nasopharyngeal carcinoma.

［KEY WORDS］ "nasopharyngeal carcinoma; herpesvirus 4， human; antibodies， viral; DNA， viral; diagnosis

鼻咽癌是起源于鼻咽黏膜上皮细胞的头颈部恶性肿瘤，其发病率居头颈部恶性肿瘤首位［1-3］。鼻咽癌起病隐匿、早期症状不明显、发病位置狭窄，易被忽视且易扩散转移，大多数病人发现时已处于中晚期，严重影响了病人的预后［4］。早发现早诊断，有利于鼻咽癌病人的治疗和预后。EB病毒（EBV）与鼻咽癌的发生密切相关，可以潜伏感染鼻咽部黏膜上皮细胞引发癌变，并刺激机体产生相应的抗体，如EBV衣壳抗原IgA（VCA-IgA）、早期抗原IgA（EA-IgA）、Rta蛋白IgG（Rta-IgG）等，这些抗体可作为鼻咽癌的血清学标志物，然而单个指标检测对鼻咽癌的血清学辅助诊断效能不理想，目前临床上多采用多个指标联合检测的方式［3，5］。应用荧光定量聚

合酶链式反应（FQ-PCR）技术检测血清EBV-DNA载量能够提高鼻咽癌早期筛查的准确率，近年来逐渐引起重视［6-8］。本研究在常用的鼻咽癌抗体标志物组合（VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG）的基础上，联合检测血清EBV-DNA载量，以探讨血清EBV抗体和EBV-DNA联合检测在鼻咽癌治疗前诊断中的价值。现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象

2019年12月—2020年12月，选取青岛大学附属医院住院及门诊确诊的鼻咽癌病人163例（鼻咽癌组），其中男95例，女68例，年龄42～84岁，平均（63.39±8.90）岁。所有病例均经组织病理检查确诊为鼻咽癌，且未合并其他恶性肿瘤或器官衰竭，3个月内均未发生急性感染、急性心脑血管疾病及严重创伤，采血检验前均无手术、化疗、放疗及免疫治疗史。依据中国鼻咽癌2008临床TNM分期标准进行分期，其中Ⅰ～Ⅱ期70例（早期），Ⅲ～Ⅳ期93例（晚期）。同期选取体检中心的140例健康体检者作为对照组，其中男73例，女67例，年龄为38～84岁，平均（62.45±9.77）岁；均排除鼻咽部疾病，且无心脑血管疾病、急性感染及严重创伤。两组的年龄及性别差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 标本采集与检测

鼻咽癌病人均于入院后治疗前采集清晨空腹静脉血5 mL，体检者均于体检日采集清晨空腹静脉血5 mL，均以4 000 r/min离心10 min，分离血清。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG抗体水平，采用FQ-PCR法检测EBV-DNA载量，所有检测均严格按照仪器及配套试剂的说明进行操作。抗体阳性判断标准：VCA-IgA、EA-IgA以标本吸光度（A）值/校准品A值≥1.1为阳性；Rta-IgG以标本A值/临界值≥1为阳性，其中临界值根据说明书提供的方法计算。VCA-IgA、EA-IgA及Rta-IgG的结果以相对A值（rA）表示，rA=S/CO，S/CO为标本A值与cutoff值的比值。采用自动分析软件对FQ-PCR结果进行分析，EBV-DNA以＞5×105 copies/L为阳性。联合检测采用平行试验（并联试验）方法，检测项目其中一项为阳性即判断为阳性。

1.3 统计学分析

使用SPSS 23.0统计学软件进行数据统计分析。符合正态分布的计量资料以±s形式表示，组间比较采用成组t检验；不符合正态分布的计量资料以中位数（M）和四分位数间距（QU－QL）形式表示，组间比较采用秩和检验；计数资料以例数和百分数表示，组间比较采用χ2检验。根据血清EBV抗体和EBV-DNA检测结果绘制受试者工作特征（ROC）曲线，采用公式计算诊断灵敏度、特异度、准确度和曲线下面积（AUC）等指标［9］。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结" 果

2.1 两组血清EBV抗体效价及EBV-DNA载量的比较

鼻咽癌组血清VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG抗体效价和EBV-DNA载量水平及其阳性率均高于对照组，差异均有统计学意义（t=12.499～14.597，Z=12.893，χ2=51.274～153.132，P＜0.05）。结果见表1、2。

2.2 血清EBV抗体和EBV-DNA检测对鼻咽癌的诊断价值

单项检测中，AUC最高的指标为EBV-DNA（0.930），灵敏度最高的为VCA-IgA（78.53%），特异度最高的为EBV-DNA（92.86%），准确度最高的为EBV-DNA（84.49%）；联合检测中，AUC最高的指标为VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA（0.992），灵敏度最高的为VCA-IgA+EA-IgA+EBV-DNA以及VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA（100.00%），特异度最高的则为VCA-IgA+EA-IgA+EBV-DNA（65.00%），准确度最高的为VCA-IgA+EA-IgA+EBV-DNA（83.83%）。见图1和表3。

2.3 不同分期鼻咽癌病人血清EBV抗体效价和DNA载量比较

Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌病人血清VCA-IgA、Rta-IgG抗体效价和EBV-DNA载量明显高于Ⅰ～Ⅱ期病人，差异均具有统计学意义（t=3.332、4.324，Z=10.507，P＜0.05）；Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌病人EBV-DNA阳性率明显高于Ⅰ～Ⅱ期病人，差异具有统计学意义（χ2=46.802，P＜0.05），但不同分期鼻咽癌病人3项抗体阳性率比较差异无显著意义（P＞0.05）。见表4、5。

3 讨" 论

近年来，鼻咽癌的发病率逐年升高，在我国其发病率和死亡率均高于世界平均水平［4，10］。EBV是可引起人类B淋巴细胞感染的疱疹病毒，与鼻咽癌的发生发展密切相关。机体感染EBV产生的多种特异性抗体，如VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG等，具有不同的临床意义，它们在不同鼻咽癌病人血清中的滴度有一定差异，且其血清水平与病人病情密切相关［5］。

VCA-IgA和EA-IgA检测在鼻咽癌筛查及辅助诊断中已有较多应用。Rta蛋白是EBV裂解期BRLF1基因突变表达的一种编码蛋白，能诱导促进鼻咽部上皮细胞分裂发生癌变，是目前备受关注的新分子靶标，检测EBV Rta-IgG有助于早期鼻咽癌的辅助诊断［10］。国内外已经有不少研究证实了Rta-IgG与VCA-IgA、EA-IgA联合检测在鼻咽癌早期诊断中的潜在价值［11-12］。EBV感染机体后可潜伏在淋巴细胞内，并以环状DNA的形式游离于细胞质中，因此检测EBV-DNA拷贝数可反映病人体内EBV载量［13-14］。

本文研究结果显示，鼻咽癌组血清VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG抗体效价和EBV-DNA载量及其阳性率均显著高于健康对照组，提示该4项指标可用于鼻咽癌的辅助诊断。进一步分析这4项指标的诊断价值，单项检测中AUC最大的为EBV-DNA（0.930），其诊断效能最优，且其诊断特异度及准确度也最高，但诊断灵敏度低于VCA-IgA。因此，在临床筛查鼻咽癌时各项标志物常采用联合检测且并联试验的方法，以提高诊断的阳性率。本文研究结果显示，联合检测可明显提高诊断效能，4项指标联合检测的AUC及灵敏度均最高，常规两种抗体和EBV-DNA检测组合VCA-IgA+EA-IgA+EBV-DNA的AUC、灵敏度及特异度也明显高于单纯抗体组合VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG，表明VCA-IgA+EA-IgA+Rta-IgG+EBV-DNA联合检测在临床筛查鼻咽癌时具有较好的应用潜力。

目前，EBV抗体效价与鼻咽癌临床分期的相关研究较多，但结果存在一定的争议［15］。而EBV-DNA拷贝数的检测可以更直观地体现机体内EBV的含量，为探究EBV载量与鼻咽癌分期的关系提供了便利。本研究初步探讨了163例鼻咽癌病人3种EBV抗体和EBV-DNA与鼻咽癌病人TNM分期的关系，结果显示，Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌病人血清VCA-IgA、Rta-IgG抗体效价和EBV-DNA载量明显高于Ⅰ～Ⅱ期病人，并且EBV-DNA阳性率也明显高于Ⅰ～Ⅱ期病人，但其他3项指标的阳性率在早期和晚期病人中无统计学差异。以往的研究已经证实，VCA-IgA阳性提示病毒大量复制，而EA-IgA阳性提示病毒进入复制阶段［16］。因此，与EA-IgA相比较，血清VCA-IgA滴度变化更为明显。随着临床分期的升高，鼻咽癌会刺激EBV编码蛋白的高表达，Rta蛋白表达也会增高，进而使得相应抗体效价增高［11，17］。因此，晚期鼻咽癌病人血清中的Rta-IgG水平明显高于早期病人。随着病情的恶化，肿瘤细胞释放到外周血可引起病人血清中EBV-DNA拷贝数的增加［1］。因此，EBV-DNA拷贝数与肿瘤分期呈正相关性。今后的研究中，我们将扩大样本量，在根据检测结果区分不同分期的病人时重新计算截断值，并进一步分析各项标志物区分不同分期鼻咽癌病人的诊断价值。

综上所述，相较于单一的EBV抗体检测，联合检测可提高诊断效能，并且在初筛时3项抗体联合EBV-DNA检测更为理想，有利于病人的早期诊断、病情判断及个性化治疗方案的及时制定，在鼻咽癌病人辅助诊断和治疗中具有一定的临床价值。

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（本文编辑 马伟平）