红细胞贫血指标和血红蛋白电泳联合地中海贫血基因检测在α-地中海贫血诊断中的临床价值

卢新兆 黄晓华 郑小凤 李新才 黄浩南

[关键词]红细胞贫血；地中海贫血；血红蛋白电泳；基因诊断

地中海贫血是人体血液中珠蛋白基因发生突变或者缺失引起珠蛋白生成障碍的单基因遗传性疾病。患者红细胞中血红蛋白的组分和含量发生改变，导致不同程度的溶血贫血，影响红细胞的携氧能力，因此地中海贫血患者容易发生感染、发热、免疫功能低下并会引起黄疸、肝脾肿大、小儿发育不良、心脏肺功能不全[1]。本研究通过全自动血液分析仪和毛细管电泳仪及PCR检测仪器对患者进行地中海贫血筛查，红细胞贫血指标先进行初筛，血红蛋白电泳检测提高效率，地中海贫血基因检测提高准确率，联合检测才能进一步明确诊断。通过红细胞贫血指标和血红蛋白电泳联合地中海贫血基因检测，提高患者地中海贫血的诊断水平，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2018年1月至2021年6月福建医科大学附属龙岩市第一医院门诊及住院治疗的诊断为α-地中海贫血患者51例为α-地中海贫血组，其中男15例，女36例。纳入标准[2]：根据中华医学会临床血液学分会关于地中海贫血诊断标准进行确诊的患者。排除标准：①骨髓造血功能引起的贫血；②缺铁性贫血；③恶性肿瘤性贫血；④其他原因贫血。对照组为本院体检健康人群50例，其中男24例，女26例。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05）。本研究已经医院医学伦理委员会批准。

1.2 红细胞贫血指标检测

患者空腹抽静脉抗凝血2ml，红细胞血红蛋白（Hb），红细胞平均体积（MCV），红细胞平均血红蛋白量（MCH），红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC），利用日本希森美康公司生产的全自动血液分析流水线及配套质控品试剂进行检测。男性血红蛋白<120g/L，女性血红蛋白<110g/L判断为贫血。

1.3 血红蛋白电泳检查

患者空腹抽静脉抗凝血2ml，使用法国西比亚公司生产的全自动毛细管血红蛋白电泳仪进行分析，所用的质控品和试剂为公司配套生产，严格按照仪器操作规程及试剂说明书进行，仪器全自动完成血红蛋白电泳结果的分析处理，最后得出血红蛋白的各种电泳区带。男女HbA2正常参考值为2.2～3.3，HbA2<2.2判断为α-地中海贫血表型阳性。

1.4 地中海贫血基因检测

空腹采取患者抗凝血液标本，试剂为深圳亚宁生物公司生产的α-地中海贫血点突变基因和缺失型基因检测试剂盒。应用聚合酶链反应反向斑点杂交与聚合酶链反应进行地中海贫血基因检测，分别检测常见的α-地中海贫血三种缺失型（α-SEA，α-3.7，α-4.2）和三种非缺失型突变基因（α-WS，α-QS，α-CS）。严格按照操作规程进行，首先提取全血DNA，利用PCR仪进行扩增，再用导流杂交技术显色，最后结果判断与分析。

1.5 统计学方法

应用SPSS20.0统计学软件进行数据处理，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用独立样本t检验，计数资料用[n（%）]表示，P<0.05为差异有统计学意义。根据红细胞贫血各指标及血红蛋白电泳HbA2等结果绘制ROC曲线，通过AUC值判断对地中海贫血诊断效能。

2 结果

2.1 地中海贫血患者贫血情况

51例地中海贫血患者有46例贫血，贫血总发生率为90.20%，其中15例男性患者中14例都有贫血，贫血发生率为93.33%。36例女性患者中32例都有贫血，贫血发生率为88.89%，红细胞贫血指标值及各种贫血百分比见表1。在本研究结果中，α-地中海贫血组HbA2，Hb，MCV，MCH及MCHC均低于正常对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.2 α-地中海贫血患者血红蛋白电泳分析

51例α-地中海贫血患者，有50例HbA2<2.2，表型阳性率为98.04%，大部分地中海贫血患者同时检出HbH、HbBart’s、HbCS的一种或多种区带[3]。其中男性15例，女性36例，血红蛋白电泳结果见表3。33例α-地中海贫血患者进行地中海贫血基因检测，31例检出三种基因缺失型和三种基因突变型中的一种或混合型，以α-SEA型为主，2例未检出常见基因型。见表4。

2.3 各指标ROC曲线分析

分析各贫血指标及血红蛋白电泳对α-地中海贫血组的诊断价值，计算敏感度和特异度，以1-特异性为横坐标，敏感度为纵坐标，绘制HbA2、Hb、MCV、MCH、MCHC等指标的ROC曲线，AUC分别为0.990、0.987、0.994、0.970、0.960，各指标AUC和对照组比较均显著提高地中海贫血诊断的敏感度和特异度。见图1。

3 讨论

α-地中海贫血是因为16号常染色体α蛋白质肽链基因发生缺失或突变引起的贫血性疾病[4]。贫血是地中海贫血最主要的临床体征，在本研究中，51例α-地中海贫血患者有46例出现贫血，贫血阳性率90.20%，其中以中度贫血为主，部分发生重度贫血，甚至出现极重度贫血，严重危及患者的生命。α-地中海贫血组Hb、MCV、MCH、MCHC均显著低于对照组，差异有统计学意义。

红细胞贫血指数是地中海贫血筛查最简单实用的方法，缺铁性贫血和轻型地中海贫血在临床上都是小细胞低色素性贫血，因而单纯贫血指标不能鉴别这两种疾病，容易造成轻型地中海贫血的漏检，因此敏感度和特异度不足，存在一定的假阳性和假阴性。全自动毛细管血红蛋白电泳分析仪是地中海贫血筛查的重要方法，自动化程度高，操作简单速度快，敏感度和特异度显著提高。本研究发现51例α-地中海贫血患者有50例HbA<2.2，同时检出α-地中海贫血可能出现的HbH、HbBart’s、HbCS等区带，这些区带可以出现其中一种或者多种，浓度也不同，与α-地中海贫血类型和病情严重程度相关。因此，红细胞贫血指数和全自动毛细管电泳仪检测血红蛋白，可以提高地中海贫血的检出率，减少地中海贫血的漏诊[5]。

小部分α-地中海貧血静止型及轻型在红细胞贫血指标大部分是正常的，临床上也没有明显症状，这是由于静止型及轻型地中海贫血基因型多数是只有一种或者两种α-珠蛋白缺失或者发生突变，可以通过红细胞的代偿功能增强，使得静止型和轻型地中海贫血患者的红细胞指标正常，血红蛋白电泳也存在部分α-地中海贫血的漏检，没有严重的贫血及与贫血有关的并发症[6]。因此为了减少α-地中海贫血静止型及轻型的漏诊率，根据临床诊断需要进行增加地中海贫血基因检测是必需的，因为地中海贫血基因检测是地中海贫血诊断的金标准，虽然检测方法比较复杂，费用较高，但是能够防止红细胞贫血指数及血红蛋白电泳仪筛查地中海贫血的漏诊，提高地中海贫血的检出率[7]。本研究在33例α-地中海贫血患者进行常见的三种缺失型和三种突变型基因检测中，31例检出地中海贫血基因阳性，2例静止型α-地中海贫血未检测出地中海贫血基因。本地区α-地中海贫血最常见的基因型为东南亚缺失型α-SEA，其次是α-3.7缺失型和α-4.2缺失型，跟华南地区及福建泉州地区地中海贫血的基因型的研究报道比较接近[8-9]。α-地中海贫血基因突变型最常见的是α-CS突变，其次是α-QS突变这跟广东地区的报道也相似[10-11]。

通过多项目ROC曲线分析，联合检测在地中海贫血的诊断符合率显著升高，有效地减少轻型地中海贫血的误诊和漏诊率，提高地中海贫血确诊的准确度[12]。

红细胞贫血指标和红细胞血红蛋白电泳检测是筛查地中海贫血的重要方法，同时具有高度的敏感度和特异度，显著提高地中海贫血患者的检出率[13-14]。由于少数轻型地中海贫血患者及罕见型存在漏诊，联合地中海贫血基因检测以及蛋白测序技术，可以大大提高地中海贫血的确诊和检出率[15-16]。地中海贫血是一种严重危害人类健康的遗传性疾病，提早预防是关键，特别是做好婚前及孕产前诊断和羊水检查，降低地中海贫血发生率具有重要的临床指导意义。