利用液相色谱法同时分析氯苯胺的研究

张伟亚，徐 宁，廖连燕，徐 烨

(1.河北民族师范学院，河北 承德 067000；2.东北大学 理学院，辽宁 沈阳 110819)

氯苯胺的同分异构体包括邻氯苯胺、间氯苯胺和对氯苯胺，每种异构体都是用途非常广泛的有机物质，尤其在染料、医药产品及新型农药(杀虫剂、除草剂)等方面，是很多医药、农药、染料和橡胶合成的重要原料或中间体[1]。同时氯苯胺的三种异构体都具有高毒性，能够损害人体肝脏和肾脏、血液系统及神经系统等，其一旦进入环境中，会对生态环境构成严重威胁[2]。

在环境分析中，卤代芳香胺类化合物的分析检测一直是热点与重点。对于水样中苯胺类化合物的分析检测，现行的国家标准检测方法是分光光度法，但该方法操作十分繁琐，显色时间较长。气相色谱法对氯苯胺三种异构体单独进行检测的报道较少，多集中在与其它芳香胺同时检测的报道上，对于沸点和性质非常相近的异构体之间的分离检测，气相色谱法大多需要柱前衍生化反应，以求改变待测物质的性质，从而达到更好分离的目的，但衍生过程效率较低，重现性差。而高效液相色谱在社会各领域应用广泛、普及率非常高，因此，在环境问题日益突出的今天，建立一种方法采用高效液相色谱来实现氯苯胺三种同分异构体同时分析分离与检测，是非常重要的。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Agilent 1200型高效液相色谱仪，紫外检测器；色谱柱，ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱，4.6 mm× 250 mm，5 μm。邻氯苯胺(98%)、间氯苯胺(99%)、对氯苯胺(98%)，上海阿拉丁试剂有限公司；甲醇，色谱纯。

1.2 色谱条件

流速，0.9 mL/min；柱温，35 ℃；进样量，10 μL；紫外检测波长，242 nm；流动相体系，甲醇(A)/水(B)。

1.3 样品的储存

本实验中，三种物质的混合标准溶液在冰箱中(4 ℃)保存，至少能够保存1周，用于实验分析与检测。

1.4 预处理操作

过滤：将实际水样经0.45 μm的滤膜过滤，量取10 mL转入离心管。分散液相微萃取：按照优化选择的条件进行操作，加入0.2 mL萃取剂三氯甲烷、分散剂加入0.6 mL异丙醇，加盐量(NaCl)为0.1 g，pH值调节在7～8，轻轻摇匀后离心4 min，选取下层有机相进仪器进行分析检测[3-4]。

2 实验结果

2.1 流动相配比和洗脱方式的选择

异构体之间的性质非常接近，故分离氯苯胺异构体时选用等度洗脱方式。实验考察了流动相配比发生改变时，三种待测物质的分离情况。随着流动相中甲醇比例逐渐减少，邻氯苯胺与间氯苯胺之间的分离度逐渐变小，而间氯苯胺与对氯苯胺之间的分离度逐渐增大，最佳色谱分离图如图1所示。

1.对氯苯胺 2.间氯苯胺 3.邻氯苯胺

由图1可知，氯苯胺三种异构体出峰效果良好，相互之间无干扰，同时达到完全分离。此时，流动相中的配比是甲醇(A)∶水(B)= 40∶60。

2.2 标准曲线和检出限

在最佳条件下，对混合标准样品进行色谱分析，以氯苯胺三种异构体的浓度(x)为横坐标，对应的峰面积(y)为纵坐标，建立三种组分的标准曲线，见表1。

表1 线性方程和检出限

2.3 精密度

精密度通常以多次测量值的相对标准偏差(RSD)来表示，是衡量分析结果重现性的重要指标，用来反映实验结果的可靠性。本实验分为两种情况：①考察仪器性能的稳定性，进行11次平行进样，计算其相对标准偏差。②考察实验方法的重现性，取7份相同的水样进行全程实验，计算7次分析检测结果的相对标准偏差，结果见表2。

表2 精密度实验结果

从表2可以得出，实验过程中所使用的仪器性能稳定，本实验方法重现性良好，表明实验检测结果可靠。

2.4 加标回收率

回收率=

加标回收率是衡量分析实验结果准确度的重要依据。以空白水样，依次进行低、中、高加标回收率实验，按照预处理操作过程进行萃取富集，在最佳的色谱条件下进行分析检测，测定结果见表3。

表3 回收率结果(n=7)

由表3可知，各组分的平均回收率在92.3%～104%，表明本方法准确、可靠。

3 结论

本文采用高效液相色谱法实现了氯苯胺三种异构体的同时分离与检测。该方法快速、灵敏，前处理过程操作简单、有机溶剂使用量少、安全环保，能够应用于日常环境监测工作中。