余甘子化学成分研究

刘晓晖，吕 乔，吉 雄，方 程，费嘉翔，刘显军，刘敬珣，孙海峰

（深圳烟草工业有限责任公司，广东 深圳 518110）

余甘子Phyllanthus emblicaL.为大戟科叶下珠属乔木，初食味酸涩，良久乃甘，故名 “余甘子”，主产于我国云南、广东、广西、福建等省区，是卫生部批准的药食同源药材［1］，具有清热凉血、消食健胃、生津止咳之功效，常用于治疗血热血瘀、消化不良、腹胀［2］。余甘子具有抗氧化［3-4］、抗炎［5］、抗肿瘤［6］，抗病毒［7］等作用，其化学成分包括酚酸类、黄酮类、萜类等［8］。本研究从余甘子果实中分离得到9 个化合物。

1 材料

Bruker Ascend 600 MHz 型核磁共振仪，德国布鲁克公司；Agilent 6890N 气相色谱、Agilent 1100 series TripleTOF 6600＋型质谱仪，美国Agilent公司；Waters ACQUITY UPLC I-Class PLUS 高效液相色谱、Waters LC Prep 150 型制备液相色谱，美国Waters 公司；YMC-Pack ODS-A 色谱柱（250 mm×4.6 mm，250 mm×20 mm，5 μm），日本YMC 公司；N-3000 型旋转蒸发仪、FDU-1100 型冷冻干燥机，日本东京理化器械株式会社；AL104 型万分之一电子分析天平，瑞士梅特勒-托利多公司；Sephadex LH-20 型凝胶，瑞典Pharmacia 公司。甲醇、乙酸乙酯由天津国药试剂厂生产。

余甘子于2021 年9 月购自云南省楚雄市，经郑州轻工业大学黄申副教授鉴定为正品。

2 提取与分离

余甘子干燥果实（10 kg）粉碎后，经60%丙酮15 L 超声提取3 次，每次3 h，减压浓缩后得浸膏3.62 kg。浸膏经水5 L 分散后，依次用石油醚和乙酸乙酯萃取。萃取后水部位655 g 加水分散后用Sephadex LH-20 葡聚糖凝胶色谱分离，依次用水和甲醇梯度洗脱，得167 个流分，经高效液相检测后合并获得Fr.A～Fr.O。Fr.C 经制备液相色谱分离（15%乙腈-水）得到化合物6（18 mg，tR＝17.7 min，284 nm）、7（5 mg，tR＝24.1 min，284 nm）。Fr.D 经制备液相色谱分离（15% 乙腈-水）得到化合物3（6 mg，tR＝30.7 min，284 nm）、4（3 mg，tR＝9.01 min，220 nm）。Fr.E 经制备液相色谱分离（10%乙腈-水）得到化合物1（6 mg，tR＝9.9 min，280 nm）、2（6 mg，tR＝31.4 min，227 nm）、5（2 mg，tR＝8.3 min，220 nm）。Fr.F 经制备液相色谱分离（3% 乙腈-水）得到化合物8（36 mg，tR＝8.9 min，270 nm）、9（36 mg，tR＝6.9 min，278 nm）。

取2 mg 化合物1，加入2 mol／L HCl 2 mL，封口，85 ℃水浴中反应4 h，用等体积氯仿萃取2次，将水层减压浓缩至干，获得化合物1 结构中的糖部分。糖部分用2 mL 无水吡啶溶解，再加入2 mgL-半胱氨酸甲酯盐酸盐，在60 ℃水浴条件下反应1 h。减压浓缩除去溶剂后，加入0.5 mL 三甲基硅咪唑，在60 ℃水浴条件下反应2 h。反应结束后用2 mL 正已烷进行萃取，正已烷相通过气相色谱进行分析［9］。

3 结构鉴定

化合物1 为白色无定形粉末。HR-ESI-MS 显示其准分子离子峰m／z369.080 4 ［M＋Na］＋（计算值m／z369.079 8 C14H18O10Na），结合1H-NMR 和13CNMR 谱确定其分子式为C14H18O10，不饱和度为6。

综合分析化合物1 的1H、13C-NMR 和HSQC 数据（表1），初步推断其结构中含有一分子没食子酰基单元 ［δC166.9，149.1，146.3，120.7，112.4，106.4；δH7.26（2H，s）］，一分子糖单元［δC96.0，78.9，78.1，74.0，71.0，62.3；δH5.68（1H，d，J＝8.4 Hz，H-1′），3.40～3.85（6H，m，H-2′，3′，4′，5′，6′）］，一分子甲基［δC56.7；δH3.89（3H，s）］。在HMBC 谱中（图1），δH7.26与δC166.9，149.1，146.3，120.7，112.4，106.4的相关信号确认没食子酰基单元的存在；δH3.89（3H，s）与δC149.1 的相关信号确认甲基与没食子酰基的C-3（δC149.1）相连；δH5.68（1H，d，J＝8.4 Hz，H-1′）与δC166.9 的相关信号确认没食子酰基与一分子糖单元的C-1′位相连形成酯苷。糖单元的端基H 信号的偶合常数（J＝8.4 Hz）表明糖的端基碳构型为β 型。此外，酸水解和衍生化气相分析检出D-葡萄糖，与对照品D-无水葡萄糖出峰时间基本一致，表明化合物1 结构中的糖单元为D-葡萄糖。

图1 化合物1 的主要的HMBC 相关性Fig.1 Key HMBC correlations of compound 1

表1 化合物1 的1H-NMR（600 MHz，CD3OD）和13C-NMR 数据（150 MHz，CD3OD）Tab.1 1H-NMR（600 MHz，CD3OD）and 13C-NMR data（150 MHz，CD3OD）of compound 1

综合以上信息，化合物1 的结构鉴定为1-O-（3-methoxyl-galloyl）-β-D-glucopyranose。

化合物2：无定形粉末，ESI-MSm／z：525［M＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.66（1H，s，H-2），6.65（1H，s，H-2′），6.60（1H，d，J＝1.8 Hz，H-5），6.58（1H，d，J＝1.8 Hz，H-5′），6.56（1H，dd，J＝1.8，6.0 Hz，H-6），6.54（1H，dd，J＝1.8，6.0 Hz，H-6′），4.22（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1″），4.06（1H，d，J＝6.0，12.6 Hz，H-9a），3.86（1H，dd，J＝2.4，12.0 Hz，H-6″a），3.74（6H，s，3，3′-OCH3），3.66（1H，dd，J＝4.8，12.0 Hz，H-6″b），3.63（1H，m，H-9′a），3.58（1H，dd，J＝1.8，6.6 Hz，H-9′b），3.55（1H，d，J＝7.2 Hz，H-9b），3.34（2H，overlapped，H-3″，4″），3.27（1H，m，H-5″），3.22（1H，m，H-2″），2.71（1H，m，H-7a），2.64（2H，m，H-7′），2.60（1H，m，H-7b），2.08（1H，m，H-8），1.99（1H，m，H-8′）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：148.8（C-3），148.8（C-3′），145.5（C-4），145.4（C-4′），134.0（C-1），133.8（C-1′），122.8（C-6），122.8（C-6′），115.7（C-5），115.7（C-5′），113.5（C-2），113.4（C-2′），104.7（C-1″），78.2（C-5″），78.0（C-3″），75.3（C-2″），71.7（C-4″），71.1（C-9），62.8（C-9′），62.6（C-6″），56.2（3，3′-OCH3），43.9（C-8′），41.4（C-8），35.9（C-7），35.5（C-7′）。以上数据与文献［10］报道基本一致，故鉴定为裂环异落叶松脂醇-9-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物3：无定形粉末，ESI-MSm／z：343［M＋Na］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.81（1H，d，J＝15.6 Hz，H-7），7.63（2H，m，H-2，6），7.42（3H，m，H-3，4，5），6.58（1H，d，J＝15.6 Hz，H-8），5.60（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1′），3.86（1H，d，J＝1.8，12.0 Hz，H-6′a），3.70（1H，d，J＝4.8，12.0 Hz，H-6′b），3.37～3.48（4H，m，H-2′，3′，4′，5′）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：167.1（C-9），147.6（C-7），135.6（C-1），131.8（C-4），130.1（C-2，6），129.4（C-3，5），118.3（C-8），95.9（C-1′），78.9（C-5′），78.0（C-3′），74.0（C-2′），71.1（C-4′），62.3（C-6′）。以上数据与文献［11］报道基本一致，故鉴定为1-O-trans-cinnamoyl-β-D-glucopyranose。

化合物4：无定形粉末，ESI-MSm／z：253［M＋Na］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.48（1H，d，J＝7.8 Hz，H-4），7.34（1H，brd，J＝7.8 Hz，H-7），7.14（1H，t，J＝7.2 Hz，H-6），7.05（1H，t，J＝7.2 Hz，H-5），4.70（1H，m，H-11），3.96（1H，dd，J＝5.4，12.0 Hz，H-9），3.43（1H，dd，J＝4.8，16.2 Hz，H-8a），3.02（1H，m，H-8b），1.74（3H，d，J＝6.6 Hz，H-12）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：173.9（C-13），138.6（C-7a），131.5（C-2），127.5（C-3a），123.3（C-6），120.5（C-5），119.2（C-4），112.3（C-7），107.8（C-3），59.7（C-9），51.1（C-11），24.4（C-8），17.2（C-12）。以上数据与文献［12］报道基本一致，故鉴定为（9S，11S）-1-methyl-1，2，3，4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid。

化合物5：无定形粉末，ESI-MSm／z：225［M＋Na］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.47（1H，d，J＝7.8 Hz，H-4），7.33（1H，brd，J＝7.8 Hz，H-7），7.12（1H，t，J＝7.2 Hz，H-6），7.04（1H，t，J＝7.2 Hz，H-5），4.63（1H，m，H-11），3.90（1H，dd，J＝5.4，12.0 Hz，H-9），3.40（1H，dd，J＝4.8，16.2 Hz，H-8a），2.98（1H，m，H-8b），1.71（3H，d，J＝6.6 Hz，H-12）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：138.5（C-7a），130.9（C-2），127.7（C-3a），123.1（C-6），120.4（C-5），119.1（C-4），112.2（C-7），108.0（C-3），59.9（C-9），50.9（C-11），24.8（C-8），17.6（C-12）。以上数据与文献［13］报道基本一致，故鉴定为nonialkaloid A。

化合物6：无定形粉末，ESI-MSm／z：473［M＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.82（1H，d，J＝16.2 Hz，H-7），7.63（2H，m，H-2，6），7.43（3H，m，H-3，4，5），6.58（1H，d，J＝16.2 Hz，H-8），5.58（1H，d，J＝7.2 Hz，H-1′），4.83（1H，d，J＝7.2 Hz，H-1″），3.30～4.00（12H，m，H-2′，3′，4′，5′，6′，2″，3″，4″，5″，6″）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：167.0（C-9），147.9（C-7），135.6（C-1），131.9（C-4），130.1（C-2，6），129.4（C-3，5），118.1（C-8），104.1（C-1″），95.9（C-1′），78.5（C-5″），78.4（C-5′），78.3（C-3″），78.0（C-3′），75.8（C-2′），74.2（C-2″），71.7（C-4′），71.6（C-4″），69.8（C-6′），62.3（C-6″）。以上数据与文献［14］报道基本一致，故鉴定为 1-O-trans-cinnamoyl-β-Dglucopyranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranose。

化合物7：无定形粉末，ESI-MSm／z：443［M＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.81（1H，d，J＝16.2 Hz，H-7），7.63（2H，m，H-2，6），7.42（3H，m，H-3，4，5），6.58（1H，d，J＝16.2 Hz，H-8），5.58（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1′），4.93（1H，d，J＝0.6 Hz，H-1″），3.35～4.05（12H，m，H-2′，3′，4′，5′，6′，2″，3″，4″，5″）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：167.0（C-9），147.7（C-7），135.6（C-1），131.8（C-4），130.1（C-2，6），129.4（C-3，5），118.2（C-8），110.0（C-1″），95.8（C-1′），85.7（C-4″），83.2（C-2″），78.8（C-3″），77.9（C-3′），77.6（C-5′），74.0（C-2′），71.6（C-4′），67.9（C-6′），63.0（C-5″）。以上数据与文献［14］报道基本一致，故鉴定为1-O-trans-cinnamoyl-α-L-arabinopyranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranose。

化合物8：无定形粉末，ESI-MSm／z：171［M＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.05（2H，s，H-2，6）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：170.6（C-7），146.4（C-3，5），139.4（C-4），122.3（C-1），110.3（C-2，6）。以上数据与文献［15］报道基本一致，故鉴定为没食子酸。

化合物9：无定形粉末，ESI-MSm／z：333［M＋H］＋。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.13（2H，s，H-2，6），5.66（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1′），3.86（1H，dd，J＝1.2，12.0 Hz，H-6′a），3.70（1H，dd，J＝5.6，12.0 Hz，H-6′b），3.40～3.50（4H，m，H-2′，3′，4′，5′）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：167.1（C-7），146.5（C-3，5），140.3（C-4），120.7（C-1），110.5（C-2，6），95.9（C-1′），78.8（C-5′），78.2（C-3′），74.1（C-2′），71.1（C-4′），62.3（C-6′）。以上数据与文献［16］报道基本一致，故鉴定为1-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖苷。

4 讨论

作为卫生部批准的药食两用中药，余甘子富含多种生物活性成分，在民间尤其是西藏有很广泛的应用。我国余甘子资源丰富，在东南和西南地区多有种植。近年来对余甘子的研究多集中于提取物或某类成分的药理作用。因此，对余甘子的化学成分进行系统的研究是十分必要的。为了避免余甘子化学成分因加工而产生变化［17］，本研究以余甘子的60%丙酮提取物为对象，从中分离鉴定了9 个单体化合物。其中，化合物1 为新化合物，化合物2～7为首次从余甘子中分离得到。这些化合物从化学结构上可分为木脂素类、酚酸酯苷类、生物碱类。化合物3 对小鼠黑色素瘤B16 细胞增殖有一定的抑制作用［18］；化合物5、9 具有一定的降糖［13，19］活性；化合物6～7 表现出一定的抗氧化［18］活性；化合物8 具有抗肿瘤活性［20］。本研究鉴定了余甘子化学成分的多样性，有助于明确其药效物质基础及其潜在药用价值，为余甘子的开发应用提供依据。