安徽地区女性叶酸代谢酶基因多态性及代谢风险因素与年龄相关性研究

方 婷，张 迪，陈 浩，郭 莹，张雯雯，李志强

(合肥金域检验实验室有限公司，安徽 合肥 230088)

亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)和甲硫氨酸合成酶还原酶(MTRR)是叶酸代谢过程的关键酶。据多篇文献报道，中国南北方地区MTHFR A1298C、C677T及MTRR A66G位点多态性分布存在明显差异[1-2]。但对于叶酸代谢能力与年龄的关系鲜见明确的数据支持。本研究对安徽地区女性叶酸代谢相关基因多态性进行了分析，并将MTHFR C677T 位点基因型频率数据与我国其他12个省市进行比较，进一步探讨了年龄因素(18～49岁育龄期女性)对叶酸代谢风险程度的影响，为育龄女性备孕或孕期补充叶酸提供数据参考，同时为研究与相关疾病的发生、发展机制提供遗传学数据基础。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2020年3月10日至8月17日本公司收集的499例女性全血样本作为研究对象，年龄18～49岁，其中18～49岁育龄妇女全血样本477例。为区分安徽地区女性MTHFR C677T位点基因型频率与其他地区的差异，同时收集了既往报道从北至南12个不同省市MTHFR C677T位点相关资料。本研究已通过金域医学伦理委员会审批(审批编号2022016)。

1.2方法 用全血细胞核酸提取试剂盒(天根生化科技有限公司，中国)进行基因组DNA提取，利用聚合酶链反应(PCR)扩增试剂盒(江西诺德医疗器械有限公司，中国)特异性扩增MTHFR A1298C、C677T及MTRR A66G位点。扩增PCR程序：60 ℃，30 s(信号收集)；95 ℃，10 min；95 ℃，15 s；60 ℃，40 s(信号收集，40个循环)；60 ℃，30 s(信号收集)。获得各样本3个位点的基因分型后对各位点及整体叶酸代谢能力进行风险性分析。

1.3统计学处理 利用SPSS21.0统计软件进行数据分析。采用χ2检验，分析安徽地区女性MTHFR C677T位点与既往文献报道的我国其他12个省市及中国人群基因型频率的差异；比较不同年龄女性叶酸代谢能力水平(正常，低、中、高度风险)所占比例。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1安徽地区女性MTHFR A1298C、C677T及MTRR A66G位点基因型及等位基因型频率与中国人群比较 MTHFR A1298C位点中AA、AC及CC基因型频率分别为65.5%、31.1%和3.4%，突变基因C的基因型频率为18.9%；MTHFR C677T位点中CC、CT、TT基因型频率分别为30.7%、49.9%和19.4%，突变基因T的基因频率为44.4%；MTRR A66G位点中AA、AG、GG基因型频率分别为55.3%、37.3%和7.4%，突变基因G的基因型频率为26.1%。安徽地区女性MTHFR A1298C及MTRR A66G位点基因型及等位基因型频率与中国人群比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；MTHFR C677T位点基因型及等位基因型频率与中国人群比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1、2。

表1 安徽地区女性MTHFR A1298C、C677T及MTRR A66G位点基因型频率与中国人群比较

表2 安徽地区女性MTHFR A1298C、C677T及MTRR A66G位点等位基因型频率与中国人群比较

2.2安徽地区女性MTHFR C677T位点与中国其他地区比较 安徽地区女性MTHFR C677T位点基因型频率与甘肃[3]、江苏[4]地区比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；与赤峰[5]、长春[6]、北京[7]、唐山[8]、海阳[2]、河南[1]、温州[9]、昆明[10]、泉州[11]、惠州[12]地区比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 安徽地区女性MTHFR C677T位点基因型频率与中国其他地区比较

2.3叶酸代谢能力水平与年龄的相关性 18～<30岁女性中叶酸代谢能力水平为中、高度风险者占12.23%(34/278)，30～49岁年龄中、高度风险者占26.13%(52/199)。30～49岁中、高度风险者是18～<30岁的2倍以上，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 叶酸代谢能力水平与年龄的相关性

3 讨 论

2020年由中国医药教育协会临床合理用药专业委员会等发布的《中国临床合理补充叶酸多学科专家共识》指出，围受孕期叶酸缺乏会显著增加神经管缺陷、流产、死胎及巨幼细胞贫血等风险。叶酸的缺乏在普通人群中同样与多种疾病的发生、发展相关，如动脉粥样硬化、冠心病、急性心肌梗死、脑卒中、认知障碍、自带孤独症谱系障碍、抑郁症、慢性肾脏病及风湿免疫等。值得注意的是，长期大剂量(>1 mg/d)补充叶酸同样也可能产生健康风险，如一些叶酸敏感的癌症(结直肠癌、前列腺癌等)、掩盖维生素B12缺乏、加重神经系统退行性病变、降低免疫力等[13]。因此，合理、个性化地补充叶酸显得尤为重要。

从表3可见，以河南省为界，TT基因型频率由北至南呈依次递减趋势。一大样本人群数据表明，我国山东地区TT基因型频率最高[14]，本研究中山东海阳市和河南省比较，差异无统计学意义(P>0.05)。纬度的差异与规律的基因型频率变化的内在联系还需进一步探讨。本研究中安徽地区女性TT基因型频率(19.4%)低于全国水平(28.0%)，但明显高于南方地区(温州、昆明、泉州、惠州等)，差异均有统计学意义(P<0.05)，但与江苏地区比较，差异无统计学意义(P>0.05)。这种现象可能与两地人群流动较大密切相关，提示两地育龄女性应加大推广合理补充叶酸的力度，以降低各种不良事件的发生。值得注意的是，两地育龄女性叶酸补充量不能直接参照北方人群的补充标准，以避免过量补充叶酸导致的疾病风险，如叶酸敏感性癌症(结直肠癌、前列腺癌)等[13]。

SONG[15]指出，对于每天叶酸摄入量大于335 μg/d的女性患卵巢癌的风险较低[校正后比值比(OR)为0.50]，但MTHFR A1298C位点CC和C677T位点TT基因型人群会增加患卵巢癌风险(校正后的OR分别为1.76和2.14)。高叶酸摄入量者对卵巢癌发展及预后可能具有一定的保护作用。关注MTHFR A1298C及C677T位点基因多态性可为临床治疗叶酸缺乏相关疾病提供更多的诊疗思路。

从表4 可见，30～49岁女性中叶酸代谢能力水平为中、高度风险者是18～<30岁的2倍以上。洪为胜[16]研究表明，29～49岁孕妇叶酸依从率为73.8%，低于18～24、25～28岁孕妇叶酸依从率(分别为74.6%、82.3%)，不同年龄孕妇叶酸依从率比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。

综上所述，安徽地区女性高年龄者中叶酸代谢能力水平为高度风险者比例高于低年龄者中，但其叶酸依从率却低于低年龄组，故对于该类人群必须加强叶酸增补相关工作的宣传，从而减少新生儿出生缺陷和其他不良事件的发生。理论上讲，以叶酸代谢相关基因型为依据的代谢风险评估应不随年龄的变化而改变，但本研究结果显示，30～49岁女性中叶酸代谢能力水平为中、高度风险者是18～<30岁的2倍以上，尚有待于进一步探究其原因。