血清趋化蛋白Chemerin对肥胖哮喘儿童诊断价值的临床研究

刘翠云，王晓佳，施 森，马金海

肥胖目前是世界范围内主要的公共健康挑战之一。肥胖会增加某些疾病和机体紊乱的风险，包括2型糖尿病、高血压、慢性肾病和抑郁症等[1]。报告显示，全世界目前大约有13%的肥胖人群[2]。在2011—2014年，2至19岁的人群中有17%肥胖；在2011—2012年，有38%人具有超重或肥胖问题，且肥胖人群的比例在过去三十年来呈大幅增长[3]。肥胖人群数量的增加正在给公共卫生和社会经济带来沉重负担。因此，控制肥胖是非常必要的[4]。哮喘是一种慢性炎症性疾病，它是由多种因素引发的，如运动、过敏原或刺激物暴露、天气变化或病毒性呼吸道感染[5]。有研究表明，肥胖会增加哮喘的严重程度，这证明了这两种疾病之间的密切联系[6-7]。Chemerin是一种最近发现的趋化蛋白，其作用依赖于功能性受体ChemR23表达[8]。有研究报道，在各种炎症部位，包括急性银屑病和狼疮性皮肤病变以及严重狼疮性肾炎患者的肾脏中，Chemerin表达水平升高，这与浆细胞样树突细胞的组织浸润有关，表明Chemerin具有促炎作用[9-11]。最近的一项研究表明，Chemerin在急性病毒性肺炎和吸烟引起的肺部炎症的气道中表达上调[12]。但是Chemerin在肥胖性哮喘是否有发挥调控作用，报道比较少，本文旨在探讨Chemerin与肥胖型哮喘的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选取2019年1月至2020年12月于本院就诊并被确诊为哮喘急性发作期患儿，诊断标准参考中华医学会儿科学会呼吸学组制定的儿童支气管哮喘诊断标准。

1.1.1 纳入标准包括：①年龄小于14岁；②符合哮喘急性发作期诊断标准；③同意参与临床试验。

1.1.2 排除标准包括：①原发病2周内使用激素；②合并细菌感染、真菌感染、自身免疫性疾病；③长期使用免疫抑制剂的患者。根据纳入标准共纳入68例患儿，依据排除标准筛选后，共纳入60例体重指数(BMI)>28 kg/m2的患儿作为观察组。另纳入60例年龄和性别相仿，体重指数(BMI)<28 kg/m2的哮喘患儿作为对照组。本研究经本院伦理委员会审核，研究对象入选后由家属代替签署知情同意书。

1.2 检测血清Chemerin、血清IL-4与INF-γ水平：采用ELISA试剂盒检测2组患儿Chemerin水平。静脉采取2组患儿血液，待凝固，3 000 r/min离心10 min，取上清，按照ELISA试剂盒说明书测血清Chemerin水平。

1.3 检测血清EOS数量：采用自动化生化仪。检测2组患儿血清EOS数量。

1.4 检测血清SOD与MDA：静脉采取2组患儿血液，待凝固，3 000 r/min离心10 min，取上清液，按照商品化试剂盒检测说明书测血清SOD与MDA水平。

1.5 PCR技术检测血清T-bet与GATA3 mRNA水平：采用PCR方法检测T-bet 与GATA3 mRNA水平。具体步骤如下，根据Trizol试剂说明书提取细胞RNA，并根据cDNA逆转录试剂盒说明合成cDNA。RT-qPCR反应在StepOnePlus实时荧光定量PCR系统上通过两步法进行。反应条件为95 ℃预变性1 min，95 ℃变性5 s，60 ℃退火和延伸60 s、30 s，共40个循环。引物序列如下：T-bet，forward，5′-GCCAGGGAACCGCTTATATG-3′，reverse，5′-GACGATCATCTGGGTCACATTGT-3′；GATA3，forward，5′-GAGGTGGACGTACTTTTTAACATCG-3′，reverse，5′-GGCATACCTGGCTCCCGT-3′；GAPDH，forward，5′-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3′，reverse，5′-TCCACC ACCCTGTTGCTGTA-3′。

1.6 流式细胞术检测血Th1/Th2 水平：用CD4结合的APC-eFluor 780(RM4-5)、T-bet结合的eFluor 660(eBio4B10)、GATA-3结合的Per CP-eFluor 710(TWAJ)或对照特异的荧光标记抗体染色。用抗CD16/32封闭细胞以减少非特异性结合，并用抗CD4染色。随后，细胞被固定、透化，并进一步用转录因子抗体染色。

2 结果

2.1 2组患儿基本情况比较：观察组患儿男性24 例(40.0%)，女性36例(60.0%)；对照组男性22例(36.7%)，女性38例(63.3%)。2组年龄、性别、WBC、NEUT，RBC，HGB和PLT水平之间比较差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 2组患儿基本情况比较

2.2 2组患儿检测指标水平比较：与对照组比较，观察组患儿血清中Chemerin水平显著升高；观察组患儿血清中INF-γ水平显著降低(P<0.05)，IL-4水平显著升高(P<0.05)；观察组患儿血清中EOS数量显著升高。与对照组患儿比较，观察组患儿血清中SOD活性显著降低，MDA显著升高(P<0.05)；观察组患儿血清中T-bet mRNA水平显著降低(P<0.05)，GATA3 mRNA水平高于对照组(P<0.05)。与对照组比较，观察组患儿血清中Th1细胞显著降低(P<0.05)，Th2细胞水平显著升高(P<0.05)，见表2与图1(目录后)。

表2 2组患儿检测指标水平比较

3 讨论

近年来，肥胖和哮喘的发病率呈同步上升趋势。肥胖的存在增加了包括哮喘在内的几种疾病的风险[13-14]。哮喘在肥胖人群中比在非肥胖人群中更常见[15-16]。研究表明，哮喘患者BMI比没有患哮喘的人更高[17-19]。此外，一些肥胖的哮喘患者具有显著的呼吸困难症状。同样，大量研究也证明超重和哮喘之间存在密切关系[20-23]。Chemerin最初被认为是一种趋化蛋白，主要促进组织对树突状细胞和自然杀伤细胞的募集。Chemerin作为一种新型的脂肪因子，已证实参与人体内炎症-氧化应激系统的调控。本文通过临床研究，阐述Chemerin与肥胖哮喘的关系，结果显示，肥胖儿童血清Chemerin升高的同时影响机体的Th1/Th2平衡。

Chemerin是由163个氨基酸组成的蛋白质，主要分布于白色脂肪组织和肺脏，少量表达于肝脏、心脏和棕色脂肪组织。研究发现，Chemerin可以通过调节一系列炎性因子水平，参与体内炎症-氧化应激反应的调控[24]。有报道称，Chemerin对Th17/Treg具有调节作用，其可以通过抑制Th17水平参与银屑病发生发展的调控[25]，说明Chemerin对机体的免疫T细胞有调节作用。但是对于Chemerin与Th/Th2平衡之间的作用报道较少。本研究以肥胖哮喘患儿为研究对象，结果发现，继续发作期肥胖哮喘患儿血清Chemerin显著升高。Chemerin呈升高状态的同时，患儿机体Th1/Th2失衡，表现为肥胖哮喘患儿血清中INF-γ显著降低，IL-4水平显著升高、血清中T-bet mRNA水平显著降低，GATA3 mRNA水平显著升高。以上结果显示，Chemerin水平与Th1/Th2失衡之间有密切的关系。

氧化应激是哮喘急性发作中的重要病理机制之一。目前关于Chemerin与氧化应激水平之间的研究报道较少。本研究结果显示，观察组患儿血清中SOD活性显著降低、MDA显著升高，上述变化趋势与Chemerin水平呈正相关。

综上所述，本研究证明Chemerin在肥胖性哮喘中具有重要作用，其变化与患者机体Th1/Th2失衡有密切关系，可以作为配合Th1/Th2结果判断患者哮喘病情严重程度的指标之一。而对于Chemerin调控肥胖性哮喘的潜在分子机制还有待进一步研究。