温度对东北林蛙蝌蚪生长发育和性别比例的影响※

●吴 旻 付议颉 常 雷 闫彩虹 王永明 范忠义岑欣桉 衣 岩 张舒童 卫功庆※※

（1.吉林农业大学动物科学技术学院 吉林 长春 130118；2.延边北方参茸保健品有限公司 吉林 延边 133200）

东北林蛙（Rana dybowskii）俗称蛤士蟆，是东北地区独有的一种经济动物[1]。哈蟆油（Oviductus Ranae），为雌性林蛙输卵管的干制品，是一种传统的动物药和滋补佳品，以其补虚、养阴、养肺、滋肾、益肝等作用被广泛应用[2]。林蛙从卵中孵化出来的蝌蚪并不具有性别，直至变态完全才发育出性别器官[3]，并且其性别与性染色体无明显相关性。前期研究表明，林蛙的性别形成受温度影响较大[4]，而只有雌蛙生产哈蟆油，故通过控制温度提高饲养林蛙中雌性林蛙的比例，可以提高经济效益，推动产业发展。

本试验在相同的饲养条件下，探究15～20℃温度区间蝌蚪的生长速率、变态率以及性别比例等指标的规律，为林蛙的工厂化育苗提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

东北林蛙蛙卵、水族箱、蝌蚪饲料、电子分析天平、温度计、冰袋、小动物解剖用具等。

1.2 试验设计及指标测定

取出孵化7 d、大小相近的蝌蚪360只，随机分为4组（低温组Ⅰ，中温组Ⅱ，高温组Ⅲ，常温组Ⅳ），每组3个重复，每个重复30只蝌蚪。饲养条件：将Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ 3组的养殖水温使用冰袋环绕法分别控制在（15.0±0.5）℃、（16.5±0.5）℃和（17.5±0.5）℃，Ⅳ组不控温，试验期间水温为（19.5±0.9）℃。记录各组蝌蚪体重、半数后肢长出日龄、半数前肢长出日龄、半数完全变态日龄、变态率、幼蛙的雌性比例等指标。每日07:00、13:00、19:00更换冰袋，每天换冰袋前进行温度测定。每周使用电子分析天平对蝌蚪称重一次，每天观察蝌蚪变态发育情况，统计前腿、后腿以及完全变态时间，使用半数变态为基准统计。变态后，将水族箱一侧用砖块垫起，以免蝌蚪尾巴退化后溺水死亡。性别鉴定方法根据邓秋香[5]林蛙早期的性别鉴定方法进行优化。

1.3 数据处理与统计方法

所有数据经过 Excel 2010进行初步整理后，使用 SPSS Statistics 18.0 进行显著性检验，数据以“平均数±标准误”表示，其中P＜0.05表示差异显著。

2 结果与分析

2.1 温度对东北林蛙蝌蚪变态发育时间的影响

温度对东北林蛙蝌蚪发育的影响，见表1。由表1可以看出，在变态发育的3个主要阶段，随 着温度的升高，林蛙的变态发育速率会变快。

表1 蝌蚪变态发育进程（日龄） 单位：d

2.2 温度对东北林蛙蝌蚪体重的影响

温度对东北林蛙蝌蚪体重影响，见图1。由图1可知，随着温度升高，蝌蚪的生长速率加快，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组蝌蚪体重均在4周龄时到达顶峰，而Ⅳ组（常温对照组）蝌蚪体重到达顶峰时间延后至约5周龄。且在变态发育的过程中，随着蝌蚪成为幼蛙，溺死率增加，第五次测量之后高温组已经出现多只变态完全而溺死的幼蛙，低温组却刚刚开始变态，故无法从数据中体现。

图1 不同温度下蝌蚪体重变化

2.3 温度对东北林蛙蝌蚪期死亡率的影响

温度对东北林蛙蝌蚪期死亡率的影响，见图2。由图2可知，Ⅰ组东北林蛙蝌蚪期死亡率比Ⅳ组低3.30%，Ⅱ组东北林蛙蝌蚪期死亡率与Ⅳ组相近，Ⅲ组东北林蛙蝌蚪期死亡率比Ⅳ组低6.63%，在本试验条件下，高温组，即温度在（17.5±0.5）℃时，东北林蛙蝌蚪期死亡率最低。

图2 不同温度下蝌蚪期死亡率

2.4 温度对东北林蛙蝌蚪变态性别的影响

温度对东北林蛙蝌蚪变态性别的影响，见图3。由图3可知，Ⅰ组东北林蛙雌蛙率比Ⅳ组低2.3%，Ⅱ组雌蛙率比Ⅳ组低6.3%，Ⅲ组雌蛙率比Ⅳ组高3.2%。由于东北林蛙雌蛙经济效益远大于雄蛙，因此在本试验条件下，高温组，即温度在（17.5±0.5）℃时，东北林蛙蝌蚪变态发育雌蛙率最高。

图3 不同温度下雌蛙占比

3 讨论

在此前林蛙属动物的研究中，多数为中国林蛙的研究，而东北林蛙的研究相对较少。本试验对东北林蛙的性别与环境温度的关系进行了研究。此前，沈阳农业大学的胡梦如[6]通过试验得出中国林蛙在自然条件下的雌性率约为55.3%；Ju等[7]研究发现，磷脂酰肌醇3激酶参与孕激素调节引起的东北林蛙卵母细胞成熟；Kwon等[8]就东北林蛙卵泡卵母细胞体外自发成熟相关条件展开了研究。相比于东北林蛙，中国林蛙在自然条件下的雌性率较高，这可能是由于地理上的差异导致的，细胞层面此前的研究对本试验也有一定的指导意义。

哈尔滨师范大学的徐骁骁等[9]研究发现，随着温度的升高，东北林蛙的发育速率加快，在胚胎发育过程中改变温度可能会导致组织器官的生长发生改变，在解剖过程中，本试验除了性别差异外，生长速率上与该研究一致，在本试验中，未进行器官大小上差异的比对。

通常情况下，较高温度对林蛙蝌蚪生长发育有利，较低温度有利于低等动物雌性化发育，显然，二者是矛盾的。另外，林蛙及蝌蚪是变温动物，对不断变化的生活环境温度适应性较强。从本试验的结果看，林蛙蝌蚪生活环境的温度不宜低于 17.5℃。

4 结论

在本试验条件下，高温组，即温度为（17.5±0.5）℃时，东北林蛙蝌蚪的死亡率最低，雌蛙比例最高，适合在养殖中参考应用。