血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4检测对分化型甲状腺癌的诊断价值

王晔龙，于海文

上海市嘉定区南翔医院普外科，上海 201802

分化型甲状腺癌占甲状腺癌的90%以上，由甲状腺滤泡状上皮细胞恶化而来，多数患者预后较好，恶性程度低。但由于分化型甲状腺癌起病较为隐匿，临床表现不典型，影像学特征与甲状腺良性病变常常具有交叉性，导致存在一定的漏诊和误诊[1]。近年来，甲状腺相关的实验室指标在诊断甲状腺癌方面已经成了研究热点。β-Klotho为编码单程跨膜蛋白，主要在肝脏、胰腺和脂肪组织中表达，近些年发现在甲状腺癌的组织和细胞中表达，是成纤维生长因子(FGFs)及其受体(FGFRs)的重要辅助因子，在肿瘤细胞增殖、血管形成和组织分化中具有重要作用，FGF/FGFRs信号通路几乎参与了所有恶性肿瘤的发生发展[2-3]。本组研究通过检测甲状腺癌患者血清β-Klotho、成纤维生长因子19(FGF-19)和成纤维生长因子受体4(FGFR-4)水平，观察其在分化型甲状腺癌的辅助诊断价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2019年1月至2021年12月在本院确诊为分化型甲状腺癌患者98例纳入甲状腺癌组。其中男39例，女59例；年龄22～59岁，平均(41.82±8.27)岁；病程1～24个月，平均(3.23±1.03)个月；分化类型：低分化27例，中高分化71例；组织类型：乳头状癌65例，滤泡状癌33例；肿瘤分期：Ⅰ期28例，Ⅱ期27例，Ⅲ期32例和Ⅳ期11例。选择同期本院收治的甲状腺良性肿瘤患者36例纳入良性病变组，其中男13例，女23例；年龄23～59岁，平均(41.18±7.38)岁；病程2～24个月，平均(3.51±1.13)个月；病理类型：局灶性亚急性甲状腺炎6例，甲状腺腺瘤17例，局灶性桥本甲状腺炎8例，结节性甲状腺肿5例。两组年龄、性别和病程等基线资料比较，差异有统计学意义(P<0.05)，具有可比性。纳入标准：入组资料完整；经病理确诊；依从性好。排除标准：合并其他部位的肿瘤；术前行放疗、化疗和免疫治疗；合并肺部结核、肝炎、肺炎等急慢性感染性疾病；合并高血压、冠心病和糖尿病等慢性疾病；孕妇和哺乳期女性；智力障碍和精神性疾病。所有患者或家属签署知情同意书，本研究经医院伦理委员会审核通过。

1.2方法

1.2.1血液标本保存和指标检测 两组受试者入组后和手术后1周抽取肘静脉空腹血液标本5 mL，放置于抗凝管中，采用3 000 r/min速度进行离心，时间约10 min，取上清液放置于-70 ℃的冰箱中备用。采用酶联免疫吸附试验测定血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平，试剂盒购自上海联迈生物工程有限公司。

1.2.2观察指标 观察两组治疗前后血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平，探讨血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平与临床指标的关系，以及其对甲状腺癌的诊断效能和各指标间的相关性。

2 结 果

2.1两组治疗前后血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平比较 入院时，甲状腺癌组血清β-Klotho水平明显低于良性病变组，而血清FGF-19和FGFR-4水平明显高于良性病变组(P<0.05)。术后，两组血清β-Klotho水平较入院时明显升高，而血清FGF-19和FGFR-4水平较入院时明显降低(P<0.05)。术后两组血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组治疗前后血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平比较

2.2临床指标与血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平的关系 血清β-Klotho水平在有淋巴结转移、浸润深度T3+T4和Ⅲ+Ⅳ期患者中明显低于无淋巴转移、浸润深度T1+T2和Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0.05)，而血清FGF-19和FGFR-4水平在有淋巴结转移、浸润深度T3+T4和Ⅲ+Ⅳ期患者中明显高于无淋巴转移、浸润深度T1+T2和Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0.05)。血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平在年龄、性别、分化程度、组织类型和肿瘤最大径方面比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 临床指标与血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平的关系

2.3血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4检测对甲状腺癌的诊断效能 以甲状腺良性病变为对照，血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4对甲状腺癌具有较高的辅助诊断效能，甲状腺疾病根据是否为甲状腺癌进行二元Logistic回归分析，得方程Y=-1.43×Xβ-Klotho+0.05×XFGF-19+0.17×XFGFR-4-1.54，联合检测的灵敏度为80.6%，特异度为97.2%，曲线下面积(AUC)为0.944，明显高于β-Klotho、FGF-19和FGFR-4单独检测(Z=3.307、3.953、4.477，P<0.05)；而3个指标单独检测诊断甲状腺癌的AUC比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表3、图1。

表3 血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4检测对甲状腺癌的诊断效能

图1 血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4检测诊断甲状腺癌的ROC曲线

2.4甲状腺癌患者血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4水平之间的相关性分析 甲状腺癌患者血清β-Klotho水平与FGF-19和FGFR-4水平呈负相关(r=-0.732、-0.648，P<0.05)，而血清FGF-19水平与FGFR-4水平呈正相关(r=0.816，P<0.05)。

3 讨 论

分化型甲状腺癌早期由于缺乏特异性的症状，尤其与甲状腺良性疾病难以鉴别，主要行辅助检查，如B超、CT和活体组织检查等。B超和CT缺乏特异性，活体组织检查具有创伤，患者的依从性较差。对血液标本进行检测具有微创、可以重复、价格低廉和依从性好等优势，并且血清学指标在出现轻度症状前3～6个月开始已经出现异常，故血清学指标成为肿瘤早期诊断的重要方法之一。

本组研究显示甲状腺癌组血清β-Klotho水平明显低于良性病变组，术后血清β-Klotho水平较入院时明显升高，说明血清β-Klotho来源可能与甲状腺癌有关。β-Klotho为FGFR-4与FGF-19高亲和力结合和活性所必需的共同受体[4]，尽管α-Klotho 被认为是一种通用的肿瘤抑制因子[5]，但β-Klotho的致癌作用仍不清楚。有研究表明，α-Klotho 在多种恶性肿瘤(包括乳腺癌、胰腺癌、肺癌、结直肠癌和胃癌等)中表现为抑制因子，并认为可以作为肿瘤预后的指标[5]。关于β-Klotho在癌症发展中的作用知之甚少，在不同肿瘤中的表达具有一定差异：在前列腺癌细胞中β-Klotho表达水平明显高于正常细胞，并且沉默β-Klotho基因能够抑制细胞增殖[6]；而在肝癌的研究中与正常肝细胞比较β-Klotho表达水平明显降低，发现诱导肝癌细胞β-Klotho高表达能够明显抑制细胞增殖[7]。同时发现血清β-Klotho水平在有淋巴结转移、浸润深度T3+T4和Ⅲ+Ⅳ期患者中明显低于无淋巴转移、浸润深度T1+T2和Ⅰ+Ⅱ期患者，说明血清β-Klotho水平与甲状腺癌的预后有一定的联系。有研究显示头颈部鳞状细胞癌患者Klotho基因表达水平与患者的中位生存期呈正相关，认为Klotho基因低表达和DNA高甲基化是患者预后不良的潜在标志物[8]。本组研究显示，血清β-Klotho为5.5 pg/L时，其诊断甲状腺癌的灵敏度为82.7%，特异度为75.0%，AUC为0.808，说明血清β-Klotho检测在诊断甲状腺癌时具有较高的辅助诊断效能。

本组研究发现，血清FGF-19水平在甲状腺癌组明显高于良性病变组，术后血清FGF-19水平较治疗前明显降低，说明血清FGF-19水平与甲状腺癌具有一定的联系。FGF-19不仅在正常生理条件下对代谢具有重要作用，而且在癌症的发生、发展中具有明显促进作用，在体外实验中转染FGF-19能够促进肝癌细胞的增殖和迁移能力，并且抑制肝癌细胞的凋亡[9]；在另一项实验中阻断FGF-19的表达可以抑制结肠癌细胞的生长[10]。本组研究显示血清FGF-19水平在有淋巴结转移、浸润深度T3+T4和Ⅲ+Ⅳ期患者中明显高于无淋巴转移、浸润深度T1+T2和Ⅰ+Ⅱ期患者，说明血清FGF-19与甲状腺癌的预后相关，与文献[11]报道的结果类似：FGF-19在分化型甲状腺癌组织中的表达水平明显高正常组织，并发现FGF-19过表达与TNM高分期、甲状腺外浸润、淋巴结转移和远处转移具有明显的关系，并且通过敲除FGF-19的表达可以抑制甲状腺癌细胞的侵袭和转移。本组研究还显示，当血清FGF-19为152.41 pg/mL时对诊断分化型甲状腺癌具有较高的诊断效能，其灵敏度为59.2%，特异度为94.4%，AUC为0.823，说明血清FGF-19检测在诊断甲状腺癌时具有较高的辅助诊断效能。

本组研究发现甲状腺癌患者血清FGFR-4水平明显高于甲状腺良性病变组，术后血清FGFR-4水平较入院时明显降低，说明FGFR-4的表达水平与甲状腺癌具有关联。FGFR-4是FGF-19的主要同源性受体，FGFR-4在多种肿瘤(结肠癌、前列腺癌、鳞状细胞癌和肺癌等)中出现过表达[12]，通过激活细胞外调节蛋白激酶导致肿瘤细胞的增殖。在甲状腺癌中关于FGFR-4的研究仍较少。在甲状腺正常组织和肿瘤组织中均有FGFR-4的表达，在侵袭性甲状腺癌中表达最为明显，其表达水平与甲状腺癌的恶性程度呈正相关，转染FGFR-4的肿瘤细胞能够促进其的增殖和侵袭能力，采用FGFR-4抑制剂能够抑制内源性受体的表达，明显抑制肿瘤细胞的增殖[13]。本组研究还发现血清FGFR-4高表达与淋巴结转移、肿瘤浸润深度和肿瘤分期具有有关，说明血清FGFR-4高表达与甲状腺癌的预后有一定的关系。本组研究显示，血清FGFR-4为25.54 ng/mL时，其诊断甲状腺癌的灵敏度为72.4%，特异度为77.8%，AUC为0.764，说明血清FGF-19检测对甲状腺癌具有较高的辅助诊断效能。本组研究还发现血清β-Klotho、FGF-19和FGFR-4联合检测对甲状腺癌具有更高的诊断效能，明显高于单个指标的检测，其灵敏度为80.6%，特异度为97.2%，说明3个指标在诊断甲状腺癌时具有一定的互补性。进一步相关性分析发现，甲状腺癌患者血清β-Klotho水平与FGF-19和FGFR-4呈负相关，而血清FGF-19水平与FGFR-4呈正相关。现已知FGF-19-FGFR-4信号通路在恶性肿瘤细胞分化、迁移和增殖中具有重要作用[14]，而β-Klotho对这个信号系统具有明显的调节作用。

总之，β-Klotho、FGF-19和FGFR-4参与了甲状腺癌的发病过程，联合检测有助于提高对甲状腺癌的辅助诊断效能。