巫山庙宇党参地上部分主要有效成分研究*

郑慧慧 ，徐 冲 ，祝慧凤

（1. 重庆市中医院，重庆 400021； 2. 西南大学，重庆 400716）

庙宇党参又名“单枝党”，主要产地为重庆市巫山县庙宇镇、红椿土家族乡、笃坪乡等。党参药材药用历史悠久，首载于清代《增订本草备要》［1］，为临床常用大宗中药材，味甘，性平，归脾、肺经，有健脾益肺、养血生津功效［2］。作为多年生常用中药材，党参的生长周期较长，最佳采收年限为3 年，最佳采收期为当年9 月至次年1 月［3-5］。党参多以地下根部入药。研究显示，其地上部分（包括茎、叶、花、果）具有一定的药理作用和功效，有助于根的生长［6］。党参茎、叶可促进猪和肉仔鸡的生长发育［7］；党参花可调节人体机能，增进食欲，改善睡眠［8］。但党参地上部分较少被有效利用，造成了中药资源的浪费。前期研究中，本课题组比较了巫山庙宇党参芦头、根、茎、叶化学成分的差异，发现茎、叶、根化学成分差异较小，故巫山庙宇党参被弃之为废的地上部分可能具有较好的生物活性，具备进一步开发利用的潜力［6］。本研究中比较了巫山庙宇党参地上部分和地下部分的主要有效成分党参炔苷、党参多糖、党参总皂苷的差异，为其地上部分的开发利用提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

仪器：Agilent1260型液相色谱仪（安捷伦科技<中国>有限公司）；MS205DU 型电子天平（重庆市瑞利电子仪器设备有限公司，精度为0.000 1 g）；QUINTIX65-1CN型电子天平（赛多利斯科学仪器<北京>有限公司，精度为0.01 mg）；AS系列超声波清洗机（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；QH-101-2A型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；AXLM1820-2 型实验室超纯水机（重庆阿修罗科技发展有限公司，功率为180 W，频率为50 kHz）；UV - 2450 型紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；DRHH - S6 型数显恒温水浴锅（上海双捷实验设备有限公司）；SL - 100 型和SL -1000A型高速多功能粉碎机（永康市松青五金厂）。

试药：党参炔苷标准品（批号为111732- 201607，纯度≥98%），D-无水葡萄糖标准品（批号为110833-201506，纯度为99.9%），人参皂苷Re 标准品（批号为110754 - 201827，纯度为93.4%），均购自中国食品药品检定研究院；香草醛（成都市科龙化工试剂厂，批号为201804190）；水饱和正丁醇［9］、5% 香草醛 - 冰醋酸溶液［9］、5%苯酚溶液［10］（实验室自制）；甲醇、乙腈、磷酸均为色谱纯；乙醇、苯酚、硫酸、正丁醇、石油醚、高氯酸、冰醋酸均为分析纯；党参分别采自重庆市巫山县庙宇镇、红椿土家族乡、笃坪乡，经重庆市中药研究院彭锐研究员鉴定为桔梗科川党参的地上部分和地下部分。

2 方法与结果

2.1 党参炔苷含量测定

色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为DIKMA C18柱（250 mm×4.6 mm，5µm）；流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脱（0～5 min 时5%A，5～10 min时 5%A → 10%A，10～25 min 时 10%A → 15%A，25～30 min 时 15%A → 20%A，30～51 min 时 20% A→28%A，51～70 min 时 28%A → 50%A，70～80 min 时50%A → 70%A）；流速为 0.8 mL/ min；检测波长为267 nm；柱温为30.0 ℃；进样量为10µL。在此色谱条件下的色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图Fig.1 HPLC chromatograms

溶液制备：取党参炔苷标准品4.08 mg，精密称定，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，配制成质量浓度为0.408 mg/mL 的对照品溶液。取巫山庙宇党参地上部分和地下部分，分别切段，60 ℃恒温干燥，打粉，过4号筛（65 目）。取地上部分和地下部分粉末各1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%甲醇30 mL，称定质量，超声提取（功率为180 W，频率为50 kHz，下同）30 min，放冷，再称定质量，用30%甲醇补足减失的质量。摇匀，静置，滤过，取滤液，用0.45 µm 微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

方法学考察：1）线性关系考察。精密量取对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，用0.45µm 微孔滤膜滤过，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积，以峰面积（Y）为纵坐标、进样量（X，µg）为横坐标进行线性回归，得回归方程Y=1 036.3X-6.169 5（R2=0.999 5，n=7）。结果表明，党参炔苷进样量在0.040 8～0.816 0 µg 范围内与峰面积线性关系良好。2）精密度试验。相对保留时间的RSD为0.02%，相对峰面积的RSD为0.87%，表明仪器精密度良好。3）稳定性试验。相对保留时间的RSD为0.05%，相对峰面积的RSD为0.71%，表明党参炔苷供试品溶液在24 h 内稳定性良好。4）重复性试验。相对保留时间的RSD为0.14%，相对峰面积的RSD为0.38%，表明方法重复性良好。5）准确度试验。平均加样回收率为99.76%，RSD为0.76%，表明方法准确性良好。

2.2 党参多糖含量测定

测定方法：采用苯酚- 硫酸比色法测定党参多糖的含量，采用紫外可见分光光度计扫描D-无水葡萄糖标准品溶液在440～540 nm 波长间的吸光度，最终确定最佳吸收波长为490 nm［10-12］。

溶液制备：将D-无水葡萄糖标准品置电热恒温鼓风干燥箱（温度为105 ℃）中干燥至恒定质量，取11.60 mg，精密称定，加超纯水溶解，定容至100 mL，摇匀，配制成质量浓度为0.116 mg/mL 的对照品溶液。取巫山庙宇党参地上部分和地下部分，分别切段，60 ℃恒温干燥，打粉，过4 号筛（65 目）。取地下部分粉末0.1 g、地上部分粉末0.2 g，精密称定，各3 份，分别置250 mL具塞锥形瓶中，加80%乙醇50 mL，超声提取30 min，滤过；滤渣和滤纸置锥形瓶中，加超纯水80 mL，超声提取30 min，滤过，重复1 次，洗涤滤渣和滤纸2 次，合并水提液和洗液，置250 mL 容量瓶中定容，即得供试品溶液。

方法学考察：1）线性关系考察。精密量取对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4 mL，分别置具塞试管中，加超纯水至2.0 mL，同时以2.0 mL超纯水为空白溶液。精密加入5%苯酚溶液1 mL，摇匀，迅速精密加入浓硫酸5 mL，摇匀，室温放置10 min，置40 ℃恒温水浴锅中保温15 min，取出，迅速冷却至室温。采用紫外可见分光光度计于490 nm 波长处测定吸光度［13］，以最大吸光度（Y）为纵坐标、质量浓度（X，µg）为横坐标进行线性回归，得回归方程Y= 0.013 5X- 0.058（R2= 0.999 3，n= 7）。结果表明，对照品溶液的质量浓度在11.600～81.200µg/mL 范围内与吸光度线性关系良好。2）精密度试验。结果的RSD为0.06%，表明仪器精密度良好。3）稳定性试验。结果的RSD为1.49%，表明供试品溶液在6 h 内稳定性良。4）重复性试验。结果的RSD为1.56%，表明方法重复性良好。5）准确度试验。平均加样回收率为99.91%，RSD为1.77%，表明方法准确性良好。

2.3 党参总皂苷含量测定

测定方法：选择香草醛-高氯酸作为显色剂，采用紫外可见分光光度计测定党参总皂苷的含量，参考文献［9，14］，以人参皂苷Re作为对照品，确定最佳吸收波长为560 nm。

溶液制备：取人参皂苷Re对照品9.410 mg，精密称定，置5 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀，配制成质量浓度为1.882 mg/mL 的对照品溶液。取巫山庙宇党参地上部分和地下部分，分别切段，60 ℃恒温干燥，打粉，过4 号筛（65 目）。取地上部分粉末1.0 g、地下部分粉末0.2 g，精密称定，各加入甲醇30 mL，超声提取30 min，滤过；滤液挥干溶剂，加10 mL 超纯水溶解，加入相同体积石油醚，萃取3次，弃去石油醚液，下层液用等量水饱和正丁醇萃取3次，合并萃取液，挥干正丁醇，加入甲醇，置10 mL容量瓶中并定容，即得供试品溶液。

方法学考察：1）线性关系考察。精密量取对照品溶液40，80，120，160，200 µL，置干燥具塞试管中，分别补足甲醇至200µL，同时以200µL甲醇为空白溶液。置冰水浴中，滴加新配的5%香草醛-冰醋酸溶液200µL和高氯酸溶液800 µL，混匀，置60 ℃水浴中保温15 min，取出，立即置冰水浴中冷却5 min，取出，加冰醋酸5 mL。采用紫外可见分光光度计于560 nm 波长处测定吸光度［13］，以最大吸光度（Y）为纵坐标、含量（X，µg）为横坐进行线性回归，得回归方程Y=0.001 8X-0.050 9（R2= 0.997 7，n= 5）。结果表明，人参皂苷Re 含量在75.28～376.40 µg 范围内与吸光度线性关系良好。2）精密度试验。结果的RSD为0，表明仪器精密度良好。3）稳定性试验。结果的RSD为1.68%，表明人参皂苷Re供试品溶液在6 h 内稳定性良好。4）重复性试验。结果的RSD为2.06%，表明方法重复性良好。5）准确度试验。平均加样回收率为99.16%，RSD为1.29%，表明方法准确性良好。

2.4 地上部分与地下部分含量比较

巫山庙宇党参地上部分和地下部分均含有主要有效成分党参炔苷、党参多糖及党参皂苷。其中，地上部分党参炔苷的含量约占地下部分的42.95%；党参多糖的含量约占地下部分的9.65%；党参总皂苷的含量约占地下部分的29.00%。详见表1。

表1 巫山庙宇党参地上部分和地下部分主要有效成分含量比较（，mg/g，n=3）Tab.1 Comparison of the contents of main active ingredients in the aboveground and underground parts of Miaoyu Codonopsis Radix in Wushan（，mg/g，n=3）

表1 巫山庙宇党参地上部分和地下部分主要有效成分含量比较（，mg/g，n=3）Tab.1 Comparison of the contents of main active ingredients in the aboveground and underground parts of Miaoyu Codonopsis Radix in Wushan（，mg/g，n=3）

注：a为红椿土家族乡，b为庙宇镇，c为笃坪乡。Note：a refers to Hongchun Tujia Township，b refers to Miaoyu Town，and c refers to Duping Township.

成分党参炔苷产地X X a b c a b c a b c地上部分0.315±0.254 1.056±0.621 0.491±0.220 31.573±2.180 31.838±1.145 33.601±1.393 14.408±0.436 13.103±0.522 13.240±0.365 0.621±0.2221.446±0.073党参多糖32.337±0.541334.998±4.465党参皂苷13.584±0.717地下部分1.265±0.183 1.807±0.314 1.267±0.195 299.480±11.562 332.763±15.878 372.752±6.950 39.982±3.173 58.294±1.657 42.237±4.479 46.838±9.985

3 讨论

党参药理作用有效且广泛，对机体的神经系统、内分泌系统、免疫系统、消化系统等均有影响［15-16］。党参多糖具有提高抵抗力、增强造血功能、降低血糖、抗辐射损伤的功效；对动物常压缺氧、组织细胞缺氧、循环障碍缺氧及增加耗氧所致缺氧均有良好的对抗或耐受作用，对心、脑等重要器官缺氧有保护作用；还可消除细胞自由基、延迟细胞凋亡［17-18］。党参炔苷是党参质量评价的指标性成分之一，除具有抗癌、抗菌、抗炎等作用外，还能有效保护机体胃黏膜损伤［19］。党参皂苷不仅具有较好的抗氧化作用［20］，还能调节细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫［21-24］。本研究结果显示，巫山庙宇党参地上部分和地下部分均含有党参多糖、党参炔苷及党参皂苷，仅含量有差异，故巫山庙宇党参地上部分可能具有地下部分相似的药理作用。

党参地下部分药理作用丰富而突出，市场和临床使用量较大；地上部分尽管产出量大，研究却严重滞后，未能得到充分利用。若进一步对巫山庙宇党参地上部分进行综合开发与利用，作为地下部分的替代品或应用于其他方面，如制成兽用饲料、添加剂等，有望促进动物的生长发育，改善肉质，提高动物抗病能力等，具有重要的开发价值和广阔的应用前景。