几种营养源的附加对圆口铜鱼(Coreius guichenoti)亲鱼生长与性腺发育的影响

吴兴兵，杨德国，杨少荣，朱永久，胡文静，朱挺兵，李学梅，孟子豪，何勇凤

(1.中国水产科学研究院长江水产研究所，农业农村部淡水生物多样性保护重点实验室，武汉 430223；2.中国三峡建工(集团)有限公司，成都 610041)

圆口铜鱼(Coreiusguichenoti)属鲤形目(Cypriniformes)鲤科(Cyprinidae)鮈亚科(Gobioninae)铜鱼属(Coreius)，俗称水密子、圆口等，是长江上游特有鱼类[1-2]。圆口铜鱼曾是长江上游江段主要优势种和重要经济鱼类，因受水电工程建设、过度捕捞等影响，野生资源急剧衰减，2016年被《中国脊椎动物红色名录》列为极危物种，2021年被《国家重点保护野生动物名录》列为二级保护动物(仅限野外种群)[3-5]。实现圆口铜鱼规模化人工繁育，进行人工增殖放流成为保护和恢复其种群资源的必然选择之一。

2010年以来，多家单位开展了圆口铜鱼人工繁殖技术研究，直至2013年才开始获得突破性进展[6-7]。圆口铜鱼人工繁殖主要技术难点是应激反应、亲鱼性腺发育和病虫害。亲鱼的营养状况对雌鱼产卵量、卵子质量有较大影响，进而影响到受精率和孵化率等，对亲鱼进行营养强化有助于提高其繁殖性能[8-9]。较高的饲料蛋白水平有利于卵黄蛋白原合成，促进鱼类性腺发育[10]。常规高蛋白配合饲料的营养物质通常是为了满足鱼类生长需要，但难以完全满足性腺正常发育需要[11]。因此，在投喂较高蛋白含量配合饲料的同时，针对性添加其他的营养物质或者辅以天然饵料是亲鱼培育的常用手段。

圆口铜鱼是以肉食性为主的杂食性鱼类，其食物种类中淡水壳菜等动物饵料占较大比例[15]。在日粮中添加脂肪酸、维生素E、卵磷脂和动物饵料可提高水产动物繁殖性能[11-14]。因此，为突破圆口铜鱼人工养殖条件下性腺发育难关，本研究以高蛋白配合饲料作为基础日粮，通过向基础日粮中添加鱼油、维生素E、卵磷脂及附加投喂动物饵料等方式，进行圆口铜鱼亲鱼培育实验，研究了饲料中不同营养源对圆口铜鱼亲鱼生长发育的影响，以期为圆口铜鱼规模化人工繁育和亲鱼饲料配制提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验鱼和实验条件

实验用圆口铜鱼收集自长江泸州江段，人工驯养3年以上，年龄≥5龄，均为成熟个体，规格整齐、无病无伤。

实验在室内循环水养殖系统中进行。循环水养殖系统水体总体积60 m3，养殖桶16个，单个养殖桶直径1.98 m、水深70～75 cm、进水口流量3.0～3.2 m3/h。

实验期间水温8～23 ℃、pH 7.43～8.73、溶氧9.15～12.97 mg/L、氨氮0.03～0.16 mg/L、亚硝酸盐氮0.003～0.026 mg/L。

1.2 实验饲料及添加物

实验基础日粮为商品膨化饲料，粗蛋白42%、粗脂肪5.2%、灰分16.4%、水分12.1%。鱼油为商品饲用鱼油，EPA+DHA含量≥20%。卵磷脂为商品改性大豆磷脂(有效物质含量95%)。黄粉虫(Tenebriomolitor)为鲜活个体。螺肉为新鲜去壳中华圆田螺肉，冷冻保存时间不超过5 d。

鱼油、卵磷脂、维生素E(VE)采用喷洒法拌于基础日粮中，干燥后投喂[16]。鱼油、卵磷脂、维生素E添加量以基础日粮日投喂量为基准进行计算(质量比)。黄粉虫、螺肉在投喂基础日粮时投喂，投喂量为基础日粮日投喂量(质量)的25%。

基础日粮、拌有卵磷脂等物质的饲料每天采用表观饱食法投喂2次(8:30-9:30，21:00-22:00)，日投喂量根据鱼体重计算，每次投喂量为日投喂量的1/2，并根据摄食情况和水温变化及时调整，以实验鱼饱食且无剩饵为准。黄粉虫、螺肉每天8:30投喂。

1.3 实验设计

实验分A、B、C三组进行。A组添加鱼油、卵磷脂、黄粉虫，设置4个实验组(A1、A2、A3、A4)和1个对照组(A0)，实验时间为2015年7月31日-2016年5月24日。B组添加维生素E，设置2个实验组(B1、B2)和1个对照(B0)，实验时间为2015年7月31日-2016年5月24日。C组添加卵磷脂、维生素E和螺肉，设置2个实验组(C1、C2)和1个对照(C0)，实验时间为2016年9月28日-2017年5月23日。具体设置详见表1。

表1 实验分组情况Tab.1 The experimental grouping

1.4 亲鱼成熟度判断标准

雄鱼成熟度采用精子活力观察法判断。取精子于显微镜下观察精子活力，当精子快速运动时间≥10 s时认定为成熟精子，其个体为成熟雄鱼。

雌鱼成熟度采用亲鱼外部特征和挖卵相结合的方法判断。腹部膨大，卵巢轮廓明显，生殖孔变红；卵粒大小整齐、饱满，经鱼卵透明液处理后，全部或大部分卵核出现偏位的认定为成熟卵，其个体为成熟雌鱼。

1.5 数据分析

实验结束后，测定实验鱼体长、体重，统计各组实验鱼数量、成熟雌鱼数量、成熟雄鱼数量，计算肥满度(CF)、特定生长率(SCR)、成熟率(MR)、成活率(SR)。相关计算公式如下：

肥满度(CF)=W/L3×100

特定生长率(SCR)=(lnW1-lnW0)/D×100%

成熟率(MR)=N1/N2×100%

成活率(SR)=N3/N0×100%

式中：W、L分别为实验鱼体重(g)和体长(cm)；W0、W1分别为实验鱼起始、结束时的体重(g)；D为实验时间(d)；N1、N2分别为实验结束时成熟雌(雄)鱼的数量(尾)和成活雌(雄)鱼的数量(尾)。N3为实验鱼终末数量(尾)，N0为实验鱼初始数量(尾)。

实验数据采用SPSS 20.0和Microsoft Excel 2010进行统计处理，采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)检验各组之间的差异显著性。实验数据为平均值±标准差，显著性水平定义为0.05。

2 结果

2.1 添加鱼油、卵磷脂和黄粉虫对圆口铜鱼亲鱼生长与性腺发育的影响

经过300 d养殖，各组实验鱼成活率为100%。从生长指标看，卵磷脂组和组合组特定生长率最低，鱼油组最高。卵磷脂组肥满度最低，黄粉虫组最高，鱼油组和对照组次之(表1)。各组雄鱼成熟率为100%，组合组(基础日粮+5%鱼油+2%卵磷脂+黄粉虫)和卵磷脂组雌鱼成熟率高于对照组(表2)。

表2 添加鱼油、卵磷脂和黄粉虫对圆口铜鱼亲鱼生长与成熟率的影响Tab.2 Growth，survival rate and gonadal development of C.guichenoti fed diets adding fish oil，lecithin or T.molitor(L.)

2.2 添加维生素E对圆口铜鱼亲鱼生长与性腺发育的影响

经过300 d养殖，各组实验鱼成活率均在90%以上。添加0.1%维生素E组、添加0.2%维生素E组和基础日粮组实验鱼末体质量、肥满度均无较大的差异。各实验组特定生长率随着维生素E添加量呈现升高趋势(表2)。各组雄鱼成熟率为100%，添加0.1%维生素E组、添加0.2%维生素E组雌鱼成熟率均高于基础日粮组(表3)。

表3 添加维生素E对圆口铜鱼亲鱼生长与成熟率的影响Tab.3 Growth，survival rate and gonadal development of C.guichenoti fed diets adding vitamin E

2.3 添加卵磷脂、维生素E和螺肉对圆口铜鱼生长与性腺发育的影响

经过240 d养殖，C0组(对照组)和C1组(基础日粮+0.2%维生素E+2%卵磷脂)实验鱼成活率分别为(92.80±4.59)%、(92.93±9.74)%，C2组(基础日粮+0.2%维生素E+2%卵磷脂+螺肉)因2个养殖桶(平行组)实验鱼实验期间患病，成活率为(78.79±10.93)%，不过3个实验组成活率无显著差异。各组肥满度、增重率和特定生长率均无显著差异(表4)。

各组雄鱼成熟率为100%，雌鱼成熟情况呈现组间差异。C1组和C2组雌鱼成熟率均显著高于对照组，C1、C2组之间无显著差异(表4)。

表4 添维生素E、卵磷脂和螺肉对圆口铜鱼亲鱼生长与成熟率的影响Tab.4 Growth，survival rate and gonadal development of C.guichenoti fed diets adding lecithin，vitamin E or C.cathayensis meat

3 讨论

卵磷脂为甘油磷脂混合物，在卵巢发育过程中对脂类物质从肝胰腺经血淋巴转运到卵巢起着重要作用[17]。有研究表明，维生素E能有效去除体内各种有害自由基，保证卵膜结构完整性和卵中DNA不被氧化破坏，从而改善亲鱼繁殖性能[18]；在施氏鲟饲料中添加2%的卵磷脂，可提高施氏鲟后备亲鱼血清E2和Vg浓度，从而改善施氏鲟亲鱼的繁殖性能[19]；在真鲷(Pagrusmajor)饲料中维生素E的添加量达到2 000 mg/kg时，亲鱼的浮卵率、孵化率和正常仔鱼的比例显著提高[20]。本研究发现，在基础日粮中单独添加2%卵磷脂、0.1%VE、0.2%VE，雌性圆口铜鱼成熟率均高于仅投喂基础日粮。组合添加2%卵磷脂与0.2%VE时，圆口铜鱼雌鱼成熟率显著高于基础日粮组(P<0.05)。这说明在基础日粮中单独或组合添加卵磷脂和VE均对圆口铜鱼性腺发育有促进作用。

圆口铜鱼是一种应激性极强的鱼类，其应激反应严重影响了其人工驯养和繁殖等工作的开展[7]。应激会影响水产动物内分泌与繁殖行为[21]。卵磷脂和VE都有缓解鱼类应激反应，增强适应能力的作用[22-23]。这也是在基础日粮中添加卵磷脂和VE可促进圆口铜鱼亲鱼性腺发育的原因之一。

鱼油富含DHA和EDA，对鱼类性腺发育有促进作用[24]。本研究中单独添加鱼油并未能获得成熟雌鱼，在添加卵磷脂、黄粉虫的同时添加鱼油相对单独添加卵磷脂也未能获得显著效果，这可能与鱼油的添加量有关。张燕萍等[25]发现在黄鳝亲本培育过程中，鱼油在饲料中添加量过高(4%和6%)会降低蛋白质利用效率，造成雌鳝性腺发育变缓，绝对怀卵量减少。李仰真等[11]用沙蚕等鲜活饵料对半滑舌鳎亲鱼进行强化培育，获得良好产卵效果。本研究显示在圆口铜鱼亲鱼培育过程中，每天增加投喂25%的动物饵料(黄粉虫、螺肉)，相对其它实验组并未明显促进亲鱼性腺发育，甚至单独在基础日粮中添加黄粉虫并未获得成熟雌鱼。这可能与圆口铜鱼食性有关。圆口铜鱼天然饵料中，螺类出现频率为3.33%，且只出现在春季，而黄粉虫并不是圆口铜鱼天然饵料[15]。由此，有关鱼油、黄粉虫对圆口铜鱼性腺发育是否有影响还需进一步探究。

卵磷脂、VE以及动物饵料对鱼类生长具有促进作用[17-18,24]。本研究中，除VE单独添加组特定生长率随添加量增多而升高外，其他各实验组圆口铜鱼相对基础日粮组并没有出现显著生长效果。这可能与本研究所用实验鱼均为成熟个体，且年龄都在5龄及以上有关。鱼类快速生长期一般是在性成熟之前和性成熟1～2年，且在性成熟之后所消耗饵料大部分用于性腺发育及越冬物质积累[26]。

本研究表明，在进行圆口铜鱼亲鱼培育时，在基础日粮中单独或组合添加卵磷脂与维生素E投喂圆口铜鱼亲鱼可显著提高雌鱼成熟率。