2例犬脾脏淋巴组织结节性增生组织病理学诊断

陈舒怀，吴晓星，吴 波，孟 雪，康 桦*

（ 1.浙江省食品药品检验研究院药品安全评价研究中心，浙江 杭州 310052 ； 2.浙江大学医学院附属第二医院 临床研究中心，浙江 杭州 310009 ）

犬的脾脏肿大病理性变化主要为血肿、血管瘤、血管肉瘤和脾脏淋巴组织结节性增生（FHN）[1]。FHN临床表现为腹部出血、腹胀、嗜睡和厌食[2]。临床中直接诊断FHN较困难，通常肉眼可见脾脏呈结节性肿大，诊断时应优先考虑肿瘤和血肿两种情况，再区分良性疾病（血肿、结节性增生或良性纤维组织细胞结节、血管瘤）和恶性肿瘤（血管肉瘤、恶性纤维组织细胞结节、其他肉瘤）。有研究表明，小型犬（体重小于15 kg）中，雪纳瑞犬、达克斯犬和比格犬更易出现恶性肿瘤；大型犬中，金毛猎犬、德国牧羊犬、拉布拉多猎犬、拳击手和标准贵宾犬易出现恶性肿瘤[1]。

FHN的组织病理学变化较复杂，只有对适当取样的标本进行仔细的组织病理学检查后才能够做出准确诊断[3]。FHN是由淋巴组织和纤维组织、细胞组织共同增生而成的结节，增生中的梭形细胞和组织细胞有时会取代结节中的滤泡结构，最终形成真正的纤维组织细胞肿瘤[4]。FHN分为Ⅰ级FHN（淋巴结增生）、Ⅱ级FHN（增生性淋巴结，含有相似数量的纤维组织细胞和淋巴组织或良性纤维组织细胞瘤）和Ⅲ级FHN（恶性纤维组织细胞瘤或伴有少量淋巴细胞的多形性肉瘤）[5]，根据其增生的细胞类型、形态学等类型可进行更细致的分类。为阐明细胞和基质增生的性质，对FHN进行准确分级还需要进行IHC染色加以鉴别。本文对2例犬脾脏淋巴组织结节性增生病例采用H.E.和IHC染色，进行较为系统的鉴别诊断，以期为临床、实验室诊断提供更为全面的参考。

1 病例资料

1.1 病例1

老年田园犬，雄性，年龄不详，因食欲差就诊，超声发现脾脏肿大，临床肉眼观察可见脾脏结节性肿大。脾脏切除后，取肿大处脾脏约3 cm×2 cm×2 cm，肿块表面呈葡萄状结节，部分结节与正常脾脏颜色接近，部分结节呈灰白色，老年田园犬肿瘤外观见图1。

图1 老年田园犬肿瘤外观Fig.1 Appearance of tumor in elderly pastoral dogs

1.2 病例2

拳师犬，10岁，雌性，超声检查发现脾脏巨大。临床肉眼观察可见脾脏头部肿大，边缘顿圆，脾尾处巨大纤维样肿物，拳师犬脾脏肿物见图2。

图2 拳师犬脾脏肿物外观Fig.2 Appearance of spleen tumor in boxer dogs

取脾尾处肿块约3 cm×1.5 cm×1.5 cm，切面呈乳白色，质地较硬，拳师犬肿瘤切面见图3。

图3 拳师犬肿瘤切面Fig.3 Tumor appearance in Boxer canine

2 检查结果

肿瘤使用10%中性福尔马林固定，经常规脱水、透明后包埋，切片后进行H.E.和IHC染色。使用Leica Aperio GT450数位载玻片扫描仪扫描切片，观察数字切片。

2.1 老年田园犬组织病理学检查结果（见图4~图7）

图4 淋巴组织结节性增生Fig.4 Nodular hyperplasia of lymphoid tissue

图5 淋巴组织结节性增生导致血肿Fig.5 Nodular hyperplasia of lymphoid tissue causing hematoma

图6 CD3 IHC染色Fig.6 CD3 IHC staining

图7 CD19 IHC染色Fig.7 CD19 IHC staining

由图4可知，老年田园犬脾脏形成淋巴小结样的结构，中心部淡染，有外套层结构。

由图5可知，红髓结构中含有大量的红细胞、含铁血黄素沉着；髓窦扩张、被膜下血肿，可见形成高内皮微静脉，淋巴组织结节性增生导致血肿。

由图6、图7可知，IHC染色CD3为部分阳性，CD19为部分阳性。综上所述，SMA为阴性，诊断为Ⅰ级FHN。

2.2 拳师犬脾脏组织病理学检查结果（见图8~图11）

图8 Ⅱ级FHN脾脏形态Fig.8 Spleen morphology of grade Ⅱ FHN

图9 肿瘤细胞多样Fig.9 Composed variety type of tumor cell

图10 CD3 IHC染色Fig.10 CD IHC staining

图11 Vimentin IHC染色Fig.11 Vimentin IHC staining

由图8可知，拳师犬脾可见脏红髓、白髓结构消失，未形成淋巴小结样的结构，可见多个坏死区，坏死区可见血管。

由图9可知，大量细胞核深染的淋巴细胞样肿瘤细胞、细胞核淡染的纤维样肿瘤细胞增生，可见核分裂象。

由图10、图11可知，IHC染色CD3部分为阳性，Vimentin部分为阳性。综上，诊断为Ⅱ级FHN。

3 讨论

脾脏的组织学结构在不同物种间存在差异。犬脾脏的包膜和小梁含有更多的平滑肌，能够进行扩张以储存大量的红细胞[6]。在诊断犬脾脏病理变化时，应注意与人、大鼠、小鼠脾脏的区别。

2021年的一项回顾性研究发现，脾脏淋巴增生是犬脾切除术中最常见的疾病（15/44，34%）；血管肉瘤是犬脾切除术中最常见的恶性肿瘤（5/44，11%）；而淋巴瘤在犬脾切除术的发病率较低（1/44，2.3%）[7]。通过对165例被诊断为犬FHN的病例进行研究发现，该病平均发病年龄为10.1岁（老年犬）[8]。犬脾脏结节性肿大通常为肿瘤性，原发性脾脏结节性肿大可由多种组织产生，血管、纤维、平滑肌和淋巴组织[4]。本研究中，2例FHN的临床表现为脾脏结节样肿大，切面均可见灰白色区域，表面极可能是纤维组织增生，与组织病理学检查结果一致。

据统计，犬最常见的脾脏肿大为淋巴和纤维组织细胞联合增生结节[4,9]，其中结节性淋巴增生是犬中最常见的良性病变，也有报道于人、牛、羊中的情况[7,9]。结节性淋巴增生有多种分类方法，Bettini等[4]根据结节中的细胞类型，将其分为淋巴型、浆细胞型、混合型等；Valli等[10-11]根据B淋巴细胞的特点，将其分为边缘区淋巴瘤（MZL）和套细胞淋巴瘤（MCL）；Moore等[12]根据肿瘤细胞的特征将其分为淋巴结增生（LNH）和复杂结节增生（CNH）。也有研究提出，参考原有分类特征，应将该疾病分类为淋巴增生、复合增生、间质肉瘤和组织细胞肉瘤[13]，并且不同的结节分类与犬的年龄、品种、性别和存活时间有关，8~10岁的犬多诊断为组织细胞肉瘤或间质肉瘤[8]。

综上所述，本研究中病例均为IHC染色CD3（T细胞）阳性，老年田园犬病例的分类为淋巴增生，良性；拳师犬病例的分类为复合增生，具有向肿瘤性疾病发展的趋势，应结合更多临床信息进行综合诊断。老年田园犬H.E.染色切片可见被膜下血肿。犬脾脏中常与血肿有关的病理性组织改变即铁质结节（siderotic nodules）和淋巴增生（lymphoid hyperplasia）[14]。病例中的血肿可能是由淋巴细胞组成的“白髓”体积增大和数量增加，又因淋巴组织的变化导致了血液流动改变，出现了血肿[15]。

无论处于何种时期，手术切除均是犬脾脏结节性肿大的最佳治疗方案[16]。对于FHN的诊断，通过中低倍镜观察H.E.染色切片的形态学结构最重要，但对于判断FHN处于哪种病变时期，则需要对免疫表型进行检测，可采用IHC染色或通过PCR技术进行抗原受体基因重排（PARR）[17-19]。但目前国内尚无较为准确的免疫组化染色的标准。本文采用H.E.和IHC染色方法诊断两例处于不同时期的FHN，以期为制定规范的犬FHN免疫学诊断方法提供参考。

4 结论

与人脾脏功能相比，犬脾脏参与更少的免疫系统的调节过程，更多是具有储血的功能。因此，临床中对犬采用脾脏切除的治疗方法具有非常好的疗效。本文采用H.E.染色和IHC染色方法鉴别诊断两例分级不同的FHN病例，对临床诊断犬脾脏FHN具有一定参考价值。