酵母肽和地衣芽孢杆菌对肉兔生长性能、养分表观消化率、屠宰性能、肉品质和肠道形态的影响

来宁洁 王 宏 苏双良 孔繁根 张 伟 陈赛娟 陈宝江

(1.河北农业大学动物科技学院，保定 071001；2.河北农业大学山区研究所，保定 071001；3.北京英惠尔生物技术有限公司，北京 101109；4.山东和美集团有限公司，滨州 251700；5.河北省山区农业技术创新中心，保定 071001)

中国是世界第一养兔大国，肉兔产业的发展一直呈上升趋势[1]。由于家兔特殊的消化道结构和消化规律，以及高发的仔兔断奶应激综合征，腹泻病成为制约兔业发展的最主要疾病之一。抗生素在防治腹泻病和促进家兔生长的过程中起着重要的作用，但抗生素的过量使用导致了药物残留和细菌耐药性，严重危害人类和动物的健康。2020年我国饲料端全面禁止使用抗生素，开发新型绿色饲料添加剂已成为畜牧行业研发的热点。抗菌肽具有促生长和提高免疫力的作用，已广泛应用于仔猪和肉鸡生产中，但将抗菌肽应用于肉兔中的研究相对较少，且大多应用的是动物源抗菌肽[2-3]，提取和生产成本较高。酵母肽是一种由酿酒酵母发酵产生的微生物源抗菌肽，具有繁殖快、培养周期短和成本低等优点，且抗菌能力强、无耐药、不残留，耐热、耐酸碱、耐酶解，能有效抑制革兰氏阴性菌的生长，提高动物的抗病力。研究表明，将酵母肽替代抗生素应用到仔猪饲粮中，能够提高仔猪的生长性能[4]。地衣芽孢杆菌是一种革兰氏阳性菌，可以在肠道内定植成优势菌群，维持肠道微生态平衡，在改善动物肠道健康、提高生长性能等方面有较好的效果[5-6]。在肉兔饲粮中添加地衣芽孢杆菌具有促生长的作用，并能提高饲料转化率，增强免疫力，改善肉品质[7-8]。目前尚未见酵母肽在家兔生产上应用的研究报道，酵母肽与地衣芽孢杆菌在畜禽生产上联合应用的研究报道也较少，应用效果有待探索。因此，本试验拟通过在肉兔饲粮中添加酵母肽和地衣芽孢杆菌，研究其对肉兔生长性能、养分表观消化率、屠宰性能、肉品质和肠道形态的影响，探索其替代抗生素添加于肉兔饲粮中的应用效果，旨在为肉兔无抗饲料的研发和绿色养殖提供新途径和理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

本试验所用酵母肽由北京某生物技术有限公司提供，酵母肽含量≥5 000 mg/kg；所用地衣芽孢杆菌产品中有效菌数量为1 000 CFU/g。基础饲粮参照《肉兔营养需要量》(NY/T 4049—2021)[9]进行配制，其组成及营养水平见表1。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) %

续表1项目Items含量Content花生壳Peanuthulls12.50艾叶粉Artemsiaargyipowder8.00石粉Limestone1.05食盐NaCl0.50碳酸氢钙Ca(HCO3)20.50L-赖氨酸硫酸盐L-Lyshydrochloride0.30DL-蛋氨酸DL-Met0.15预混料Premix1)1.00合计Total100.00营养水平Nutrientlevels2)消化能DE/(MJ/kg)9.33粗蛋白质CP16.37粗脂肪EE3.40粗纤维CF14.91中性洗涤纤维NDF42.08酸性洗涤纤维ADF23.97酸性洗涤木质素ADL5.62钙Ca1.60总磷TP0.80粗灰分Ash12.35

1.2 试验设计与饲养管理

饲养试验和消化代谢试验均在河北农业大学畜牧教学基地兔场进行。选取180只健康的35日龄断奶伊拉肉兔，体重为(1.20±0.04) kg，公母各占1/2，随机分为5组，分别为空白对照组(饲喂基础饲粮)、抗生素组(饲喂基础饲粮+20 mg/kg恩拉霉素+150 mg/kg金霉素)、试验Ⅰ组(饲喂基础饲粮+250 mg/kg酵母肽)、试验Ⅱ组(饲喂基础饲粮+500 mg/kg酵母肽)、试验Ⅲ组(饲喂基础饲粮+500 mg/kg酵母肽+200 mg/kg地衣芽孢杆菌)，每组6个重复，每个重复6只。试验兔单笼饲养，自由采食与饮水。饲养试验持续35 d，其中预试期7 d，正试期28 d。

1.3 检测指标与方法

1.3.1 生长性能

试验正式开始和结束时称量各组试验兔空腹体重，分别作为初始体重(IBW)和终末体重(FBW)；记录每日肉兔的腹泻和死亡情况，称量记录试验动物采食量，根据试验天数计算肉兔的平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)，并计算腹泻频率和死亡率。

腹泻频率(%)=[(腹泻试验兔日只数/试验兔总只数)×试验天数]×100；死亡率(%)=(死亡试验兔只数/试验兔总只数)×100。

1.3.2 养分表观消化率

在饲养试验结束前试验兔达到62日龄时，每组选择6只体重基本一致的健康试验兔(公母各占1/2)，转移至消化代谢笼中单笼饲养，采用全收粪法进行为期7 d的消化代谢试验，期间记录每只肉兔每天的实际采食量，每天于固定时间收集全部粪便。参照《饲料分析及饲料质量检测技术》[10]的方法对饲粮和粪样中各养分含量进行测定，计算养分表观消化率。

1.3.3 屠宰性能

饲养试验结束前1天晚上禁食12 h，试验结束当天称量并记录试验兔活体重，每个重复挑选1只体重接近该组平均体重的试验兔进行屠宰，屠宰后称量胴体重、半净膛重和全净膛重，计算屠宰率、半净膛率和全净膛率。胴体重为肉兔屠宰后去除胃肠道和泌尿生殖道的体重；半净膛重为去除头、内脏，保留心脏、肝脏、肾脏和腹脂的胴体重；全净膛重为在半净膛的基础上去除心脏、肝脏、肾脏和腹脂的胴体重。

屠宰率(%)=(胴体重/宰前活重)×100；半净膛率(%)=(半净膛重/宰前活重)×100；全净膛率(%)=(全净膛重/宰前活重)×100。

1.3.4 肉品质

从屠宰后的试验兔第3～6腰椎处取背最长肌肉样测定兔肉品质指标。pH：分别在宰后45 min和24 h采用Testo-205型pH测量仪进行测定。肉色：采用Iwave W R-18型精密色差仪测定。剪切力：采用CLM-3B型肌肉嫩度仪测定。蒸煮损失：将肉样称重，记为m1(g)，然后装入塑料袋内真空包装，放置于80 ℃水浴锅内蒸煮1 h后用流水冷却20～30 min，取出肉样擦去表面水分称重，记为m2(g)，计算蒸煮损失。

蒸煮损失(%)=[(m1-m2)/m1]×100。

1.3.5 胃肠道内环境测定

屠宰后取胃、十二指肠、空肠、回肠和盲肠，用pH SJ-3F型pH计插入肠道内测定pH，每个部位测定3次，取平均值。

1.3.6 肠道形态测定

从屠宰后的试验兔上各取1 cm空肠和回肠肠段固定备测。采用BA210 Digital数码三目摄像显微摄像系统对肠段切片进行图像采集，测量肠道绒毛高度、隐窝深度以及肠壁厚度，每张切片测量10次，取平均值，并计算绒隐比(V/C，即绒毛高度与隐窝深度的比值)。

1.4 数据统计与分析

试验数据采用SPSS 22.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，并采用Duncan氏法进行组间多重比较，结果采用“平均值±标准误”表示，以P<0.05表示差异显著，0.05≤P<0.10表示有趋势。

2 结果与分析

2.1 酵母肽和地衣芽孢杆菌对肉兔生长性能的影响

由表2可知，抗生素组的ADG显著高于空白对照组和试验Ⅲ组(P<0.05)，试验Ⅲ组的ADG显著低于其他各组(P<0.05)；试验Ⅰ组的F/G和腹泻频率均与抗生素组最接近，显著低于空白对照组和试验Ⅲ组(P<0.05)；试验Ⅰ组和抗生素组的死亡率最低，但与其他各组的差异未达到显著水平(P>0.05)。

表2 酵母肽和地衣芽孢杆菌对肉兔生长性能的影响Table 2 Effects of yeast peptides and Bacillus licheniformis on growth performance of meat rabbits

2.2 酵母肽和地衣芽孢杆菌对肉兔养分表观消化率的影响

由表3可知，试验Ⅰ组与抗生素组的粗蛋白质(CP)表观消化率均显著高于空白对照组及其他试验组(P<0.05)，但试验Ⅰ组与抗生素组之间差异不显著(P>0.05)；试验Ⅰ组的粗脂肪(EE)表观消化率显著高于其他各组(P<0.05)，较空白对照组提高了7.50%；试验Ⅰ组和试验Ⅲ组的酸性洗涤纤维(ADF)表观消化率显著高于空白对照组(P<0.05)，但各试验组与抗生素组均无显著差异(P>0.05)；各组之间的干物质(DM)、总能(GE)、粗灰分(Ash)、粗纤维(CF)、中性洗涤纤维(NDF)、钙(Ca)、磷(P)表观消化率均无显著差异(P>0.05)。

表3 酵母肽和地衣芽孢杆菌对肉兔养分表观消化率的影响Table 3 Effects of yeast peptides and Bacillus licheniformis on nutrient apparent digestibility of meat rabbits %

2.3 酵母肽和地衣芽孢杆菌对肉兔屠宰性能的影响

由表4可知，试验Ⅰ组的宰前活重显著高于空白对照组和其他试验组(P<0.05)；各组试验兔的屠宰率、半净膛率和全净膛率均无显著差异(P>0.05)，但与空白对照组相比，抗生素组和所有试验组的屠宰率均有升高的趋势(0.05≤P<0.10)。

表4 酵母肽和地衣芽孢杆菌对肉兔屠宰性能的影响Table 4 Effects of yeast peptides and Bacillus licheniformis on slaughter performance of meat rabbits

2.4 酵母肽和地衣芽孢杆菌对肉兔肉品质的影响

由表5可知，试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组兔肉的pH24 h均显著高于空白对照组和抗生素组(P<0.05)；试验Ⅱ组兔肉的剪切力显著低于试验Ⅲ组(P<0.05)；兔肉的的亮度、红度、黄度值以及pH45 min和蒸煮损失各组之间均无显著差异(P>0.05)，但只添加酵母肽的试验Ⅰ组和试验Ⅱ组兔肉的亮度值有降低的趋势(0.05≤P<0.10)。

表5 酵母肽和地衣芽孢杆菌对肉兔肉品质的影响Table 5 Effects of yeast peptides and Bacillus licheniformis on meat quality of meat rabbits

2.5 酵母肽和地衣芽孢杆菌对肉兔胃肠道pH的影响

由表6可知，与空白对照组相比，抗生素组和试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组的胃pH均显著降低(P<0.05)；各组间十二指肠、空肠、回肠和盲肠的pH无显著差异(P>0.05)。

表6 酵母肽和地衣芽孢杆菌对肉兔胃肠道pH的影响Table 6 Effects of yeast peptides and Bacillus licheniformis on pH of gastrointestinal tract of meat rabbits

2.6 酵母肽和地衣芽孢杆菌对肉兔肠道形态的影响

由表7可知，与空白对照组相比，抗生素组和试验Ⅲ组空肠的绒毛高度显著升高(P<0.05)，抗生素组和所有试验组空肠的隐窝深度均显著降低(P<0.05)，同时绒隐比均显著升高(P<0.05)。试验Ⅱ组回肠的绒毛高度显著高于空白对照组(P<0.05)，试验Ⅰ组和试验Ⅲ组回肠的隐窝深度显著低于空白对照组(P<0.05)；与空白对照组相比，抗生素组和所有试验组回肠的绒隐比均有升高的趋势，但只有试验Ⅰ组和试验Ⅱ组与空白对照组的差异达到了显著水平(P<0.05)。各组之间空肠和回肠的肠壁厚度均无显著差异(P>0.05)。

表7 酵母肽和地衣芽孢杆菌对肉兔肠道形态的影响Table 7 Effects of yeast peptides and Bacillus licheniformis on intestinal morphology of meat rabbits

3 讨 论

3.1 酵母肽和地衣芽孢杆菌对肉兔生长性能的影响

抗菌肽和地衣芽孢杆菌作为绿色添加剂，均能改善肠道环境，提高机体免疫能力，从而提高动物的生长性能和健康水平[11-13]，但是酵母肽与地衣芽孢杆菌在肉兔生产上应用的报道较少。郭森等[14]研究表明，在肉仔鸡饲粮中添加200 mg/kg的抗菌肽和100 mg/kg的地衣芽孢杆菌能够提高ADG、ADFI和降低F/G。Zhang等[15]研究发现，抗菌肽可提高黄羽肉鸡的ADG，降低F/G，通过上调三叶因子-2(TFF-2)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、封闭蛋白-3(Claudin-3)的表达来维持肠道物理屏障的完整性，提高免疫力。本研究发现，单独添加酵母肽可以改善肉兔的ADG和F/G，降低肉兔的腹泻率和死亡率，这可能是因为酵母肽具有广谱抗菌活性，能够有效抑制肠道内的有害菌。但酵母肽与地衣芽孢杆菌联合应用降低了肉兔的ADG和ADFI，提高了F/G和腹泻频率，可能是由于本试验中地衣芽孢杆菌的添加量过低，不足以抑制致病菌的生长繁殖，同时地衣芽孢杆菌是一种革兰氏阳性菌，革兰氏阳性菌胞外多糖大多附着于肽聚糖层，其可以与抗菌肽结合，阻碍其进一步发挥作用，破坏肠道微生态平衡，促进炎症因子的分泌，降低肠道微生物的多样性，引起腹泻[16-17]，进而影响生长性能。

3.2 酵母肽和地衣芽孢杆菌对肉兔养分表观消化率的影响

酵母肽对高温、消化酶和酸碱环境具有一定的耐受性，到达肠道时仍能保持活性，能抑制有害菌的生长，改善肠道结构。地衣芽孢杆菌是一种有益菌，可提高菌群中有益菌的比例，并刺激消化酶的分泌。研究表明，在饲粮中添加适量的抗菌肽或者地衣芽孢杆菌能提高畜禽消化酶的活性并改善肠道发育状况，从而促进其对营养物质的消化吸收[5,18-20]。与前人研究结果基本一致，本试验研究表明，酵母肽与地衣芽孢杆菌能够提高肉兔的养分表观消化率，低剂量酵母肽显著提高了CP、EE、ADF的表观消化率，酵母肽与地衣芽孢杆菌联合应用显著提高了ADF的表观消化率。

3.3 酵母肽和地衣芽孢杆菌对肉兔肉品质的影响

肉品质主要指肉的色泽、酸度、嫩度和保水性等，这些指标的变化在肉的加工贮藏中直接影响肉品的质量[21]。Meng等[22]研究发现，抗菌肽可以延缓猪肉pH的下降速度，提高系水力，延长肉品的保质期。Zhou等[23]研究发现，地衣芽孢杆菌能够改善肉仔鸡胸肌颜色和嫩度，提高肉品质。本研究结果表明，单独添加酵母肽及与地衣芽孢杆菌联合使用均能使兔肉pH24 h显著高于空白对照组和抗生素组，且抗生素的添加会加速降低兔肉pH和嫩度，从而降低肉品质，这表明酵母肽和地衣芽孢杆菌代替抗生素后，会显著提高肉兔的肉品质。这可能是添加酵母肽能够抑制肉品中微生物的生长，从而延缓肉品pH的下降速度。本研究发现，酵母肽与地衣芽孢杆菌联合使用显著降低了兔肉的嫩度，这可能是由于地衣芽孢杆菌可以提高兔肉的肌球蛋白或结缔组织的含量，从而影响肉品嫩度，但具体机理还有待探究。

3.4 酵母肽和地衣芽孢杆菌对肉兔胃肠道pH的影响

胃肠道pH在一定的范围内才能够保证胃肠道内的各种消化酶存活，从而促进养分的消化吸收，而胃肠道的pH升高，会降低消化酶的活性，也会抑制有益菌的生长[24-25]。Merchant等[26]研究表明，家兔的胃pH范围在1.6左右，小肠的pH范围在6.4～7.4，盲肠和结肠的pH范围在6.0～6.6。肖发沂等[27]研究表明，添加1 g/kg抗菌肽具有降低断奶仔猪胃肠道pH的趋势。本试验结果显示，单独添加酵母肽及与地衣芽孢杆菌联合使用均能显著降低肉兔胃的pH，这可能因为酵母肽和地衣芽孢杆菌进入肉兔胃肠道之后，能够抑制大肠杆菌等有害菌的定植，促进乳酸杆菌等有益菌的增殖，进而降低了胃的pH。

3.5 酵母肽和地衣芽孢杆菌对肉兔肠道形态的影响

肠道的绒毛高度越高，隐窝深度越低，绒隐比越高，代表着肠道与营养物质的接触面越大，吸收营养物质的能力越强[28]。Tang等[29]研究表明，在体重相近的肉鸡中，肠壁厚度较厚的肉鸡的肠道形态参数有所改善，有益菌如短双歧杆菌数量增加，增强了上皮细胞的吸收和免疫功能。Shuai等[30]研究表明，添加200 mg/kg抗菌肽能够显著提高黑鲈幼鱼肠道的绒毛高度和肠壁厚度，提高肠道免疫功能和抗氧化能力，改善肠道形态。本研究发现，单独添加酵母肽及与地衣芽孢杆菌联合使用均能提高肉兔的绒毛高度和绒隐比，并降低隐窝深度。这表明酵母肽与地衣芽孢杆菌均能改善肉兔的肠道形态结构，增加肠道与营养物质的接触面积，促进营养物质的消化吸收。这可能是因为抗菌肽具有广谱抗菌活性，能够通过改善肉兔肠道菌群的结构影响肠道形态；而地衣芽孢杆菌能刺激隐窝细胞的分化和成熟，降低隐窝深度，促进消化液的分泌，从而改善肠道形态。

4 结 论

综上所述，在肉兔饲粮中单独添加酵母肽及与地衣芽孢杆菌联合使用均能延缓兔肉pH的下降速度，改善肠道形态，促进胃肠道健康，而单独添加250 mg/kg酵母肽能提高肉兔的生长性能，降低腹泻频率和死亡率，提高CP、EE、ADF的表观消化率，具有替代抗生素的潜力。在本试验条件下，酵母肽单独使用的效果要优于与地衣芽孢杆菌联合使用。