高迁移率族蛋白B1在糖尿病周围神经病变患者血清中的表达及临床意义

马永宾

常州市金坛第一人民医院，江苏常州 213200

糖尿病周围神经病变（diabetic peripheral neuropathy, DPN）是糖尿病最为严重的并发症之一，影响高达60%的糖尿病患者，且经常会发生难以愈合的足部溃疡，最终导致坏疽，甚至截肢[1]。由于DPN早期发病隐匿，当出现临床症状时，周围神经病变多已经进展至晚期。因此，早期诊断对于延缓DPN的进展，进而改善其不良结局具有重要意义。目前，神经肌电图神经传导速度检查和震动感觉阈值分别被认为是临床诊断DPN的重要评估手段，但这两者不仅需要专门的医师进行繁琐的操作，且不能实现大规模的临床筛查，限制了其临床的应用[2-3]。探寻新型、高效且无创的DPN诊断生物标志物显得尤为重要。DPN被认为是一种炎症性疾病[4]。研究表明，高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1 protein, HMGB1）是一种促炎细胞因子，其不仅可以以被动形式从坏死细胞中释放，也可作为主动形式响应炎症信号。Thakur V等[5]研究表明，在糖尿病神经疼痛性大鼠和小鼠模型中，脊髓背根神经节神经元中HMGB1的表达显著升高，且在体外高糖诱导的神经元中HMEG1表达亦显著升高。这提示，HMGB1可能是DPN潜在的生物预测指标。然而，目前关于HMGB1在DPN患者血清中的水平以及对DPN临床诊断价值尚不清楚。因此，本研究拟通过检测2021年1—12月常州市金坛第一人民医院收治的50例DPN患者血清中HMGB1的含量，进而评估其对DPN临床应用的诊断价值，从而为DPN的早期诊断提供一种潜在生物预测指标，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院内分泌科收治和确诊的DPN患者50例作为DPN组和同期本院健康体检者20名为对照组。对照组男14名，女6名；平均年龄（56.75±15.31）岁。DPN组患者男31例，女19例；平均年龄（60.90±10.48）岁。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究已通过常州市金坛第一人民医院伦理委员会的批准。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：①符合糖尿病诊断标准；②符合DPN诊断标准[8]，且无糖尿病足、视网膜病变及严重肝、肾、心主要脏器病变症状。

排除标准：①妊娠期糖尿病等特殊类型的糖尿病者；②腰椎性病变、格林巴利综合征等原因诱发的非糖尿病性周围神经病变者；③目前正在使用的非甾体性药物者；④伴发其他疾病者，如肿瘤、严重的肝脏疾病、自身免疫疾病以及其他类型的感染性疾病者。

1.3 方法

①血清标本采集与处理：DPN患者和健康体检正常者空腹采集静脉血标本，其中采集的静脉全血分别放入乙二胺四乙酸盐(ethylenediamine tetraacetic acid, EDTA)抗凝紫色头真空管（2 mL）中用于分析糖化血红和含有分离胶的黄色头真空管中（5 mL）。随后将黄色头的真空管置于离心机中，3 000 rpm，离心5 min分离血清用于生化和酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测。

②血清生化项目检测：将上述离心获得的血清置于AU5800全自动生化分析仪（Becman Coulter）检测血糖相关生化指标。使用H9糖化血红蛋白检测分析仪（普门）检测。

③血清HMGB1含量检测：人HMGB1试剂盒、ELISA试剂盒购自武汉华联科生物技术有限公司（货号：HM10235），具体操作步骤参加试剂盒说明书。使用AMR-100酶标仪（杭州奥盛仪器有限公司）检测450 nm处光密度值并绘制标准曲线后计算样本中HMGB1的浓度。

1.4 观察指标

①两组空腹血糖、餐后2 h血糖水平；②两组血清中HMGB1的浓度。

1.5 统计方法

采用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析，符合正态分布的计量资料以(±s)表示，组间差异比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血糖指标比较

DPN组空腹血糖以及糖化血红蛋白显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组血糖指标对比(±s)

表1 两组血糖指标对比(±s)

血糖指标空腹血糖（mmol/L）糖化血红蛋白（%）对照组（n=20）4.92±0.31 3.53±0.85 DPN组（n=50）9.41±3.40 9.05±2.66 t值5.880 9.030 P值＜0.05＜0.05

2.2 两组血清中HMGB1含量分析

对照组和DPN组患者血清中HMGB1的含量分别为（28.70±7.46）ng/mL、（112.64±27.69）ng/mL，DPN组的HMGB1含量显著高于对照组，差异有统计学意义（t=13.311，P＜0.001）。见图1。

图1 两组患者血清中HMGB1含量

3 讨论

DPN是糖尿病最为常见和早期发展的并发症，约占糖尿病患者的60%，其经常会导致反复性的足部溃疡，最终进展为足部坏疽而截肢，这也是全球截肢的第二大原因[6]。由于DPN早期发病隐匿，多数罹患DPN的患者临床确诊时神经病变程度已进展至晚期，从而错过最佳的治疗时机，且预后较差。目前，对DPN早期诊断仍然缺乏有效的检测手段。神经肌电图神经传导速度检查等为DPN的诊断提供了有价值的参考，但其操作繁琐，价格昂贵，且不利于临床开展大规模的筛查应用。在本研究中，通过检测DPN患者血清中的HMGB1含量，在一定程度上为早期筛查和诊断DPN提供了可参考的生物预测指标。

HMGB1是一种存在于哺乳动物细胞内的高度保守的核蛋白。在病理条件下，HMGB1可以通过坏死或受损的体细胞被动释放到细胞质和细胞外环境，从而参与炎症地发生和发展，且已被证实其是炎症发生的“触发因素”[7-9]。近年来，研究表明HMGB1在神经炎症和神经病态地发展中起着至关重要的作用。Thakur V等[5]研究显示，HMGB1在糖尿病疼痛性神经病变大鼠和小鼠模型的脊髓背根神经节神经元中的表达水平显著升高，且在体外高糖诱导的神经元中HMGB1表达也显著升高。在尿链霉素诱导的糖尿病神经病变性疼痛模型中，腰椎背角神经元中HMGB1表达显著上调[10]。这些研究主要在动物模型及细胞水平进行探究，而在人DPN血清中未见报道。基于临床前转化研究考虑，本研究探索人DPN患者血清中HMGB1的表达情况，结果显示DPN患者血清中的HMGB1含量显著高于健康体检的对照组（P＜0.05）。这提示HMGB1可能在DPN的进展过程中发挥了一定的作用。Zhao H等[11]报道，靶向HMGB1地表达能抑制炎症反应促进视网膜神经节细胞存活，进而改善了糖尿病视网膜病变。本研究也进一步为DPN，尤其是下肢神经病变提供了潜在的治疗靶点。

最近报道显示，脓毒血症患者血清中HMGB1含量显著升高，且认为测量脓毒血症患者血清中的HMGB1对于临床判断脓毒血症长期预后以及初始治疗决策具有相当重要的价值[12-14]。这提示，HMGB1可能作为脓毒血症患者的预后生物预测指标。在研究中，DPN患者血清中的HMGB1含量显著高于健康体检的对照组（P＜0.05）。提示HMGB1可能是潜在DPN生物预测指标[15-17]。然而，值得注意的是，本研究样本量较小，接下来仍需要临床多中心联合研究以验证其有效性。此外，本研究仍存在局限性，没有评估初次发现的糖尿病患者血清中HMGB1的含量，在接下来的研究中也将对此进行进一步的对比研究，从而为HMGB1成为DPN诊断生物预测指标成为可能。

综上所述，DPN患者血清中HMGB1显著升高，检测HMGB1对于临床早期诊断和筛查DPN具有一定的参考价值，也为DPN的治疗提供了潜在的靶点。