皮肤基底细胞癌和鳞状细胞癌中CD34与CK15蛋白表达的对比研究

袁燕平 汪亮亮 胡佳莉

非黑色素瘤是人类最常见的皮肤恶性肿瘤，主要包括基底细胞癌（BCC）和鳞状细胞癌（SCC）两个类型，在美国SCC约占非黑色素瘤性皮肤肿瘤的20%[1，2]。而国内的研究则发现，SCC约占所有皮肤恶性肿瘤的29.4%，几乎与BCC的28.0%相当[3]。BCC和SCC的病因及发病机制尚未完全清楚，但大量研究表明可能与以下几种因素有关，包括紫外线照射、电离辐射、人乳头瘤病毒、化学致癌物、器官移植和免疫抑制等。过去的研究表明二者发生与皮肤干细胞关系密切，而CD34和CK15则是公认的皮肤干细胞标志物[4]，因此，本研究借助于免疫组化染色法，观察二者在非黑色素瘤中的表达情况，阐明二者在肿瘤发生发展和鉴别诊断中的作用。

1 材料与方法

1.1 一般资料收集2021年1～12月于我院病理科检验的35例BCC标本作为实验组Ⅰ，并选取同期39例SCC标本作为实验组Ⅱ。实验组Ⅰ样本来源为男16例，女19例，年龄39～84岁，平均71岁；实验组Ⅱ样本来源为男14例，女25例，年龄35～71岁，平均61岁。本研究经我院医学伦理委员会批准，所获得的样本均经过患者及家属知情同意并签署知情同意书。

1.2 实验方法使用SP法进行检测，操作流程为：所有标本均经10%福尔马林固定，常规脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋，以4μm厚连续切片，微波修复，3%双氧水封闭内源性过氧化物酶，之后进行血清封闭。依次加入一抗、二抗及链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶，DAB显色，苏木精对比染色，常规脱水、透明、中性树胶封固。磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。免疫组化染色所用抗体与试剂均购自福州迈新公司，包括CD34（MAB-0034，克隆号QBEnd/10），CK15（MAB-0325，克隆号LHK15），Ultra SensitiveTM SP（鼠/兔）IHC Kit（KIT-9720）和DAB显色剂。

1.3 结果判定所有切片均随机选取5个高倍视野（×40），所有视野均计数100个病变细胞，计5个视野阳性病变细胞所占百分比和平均值，阳性信号表现为细胞核、细胞质或细胞膜呈现为棕黄色或棕褐色；依据显色强度与阳性细胞数评判阳性等级，阳性病变细胞数＜10%为-，10%～50%为+，50%～75%为++，＞75%为+++；阳性率=阳性表达例数/总例数×100%。

1.4 统计学分析采用SPSS 24.0统计软件，计数资料用百分比（%）表示，采用χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CD34在BCC和 SCC中的表达CD34在BCC和SCC中的阳性率分别为54.29%、100.00%。病理表现为肿瘤细胞核出现棕黄色颗粒，CD34在SCC肿瘤细胞核和细胞浆中均有表达。见表1、图1。

表1 CD34在BCC和SCC中的表达

图1 CD34在BCC和SCC中的表达

2.2 CK15在BCC和SCC 中的表达CK15在BCC和SCC的阳性率分别为62.86%、17.95%，主要表达在胞浆，部分伴胞核表达，强度不同。见表2、图2。

表2 CK15在BCC和SCC中的表达

图2 CK15在BCC和SCC中的表达

3 讨论

毛囊隆突部区域细胞有极高的增殖潜能，此处细胞具有再生为毛囊和皮脂腺组织中所有细胞系的能力，包括毛球部、毛发纤维、皮脂腺以及毛囊表皮，同时它们还能够促进损伤皮肤组织的修复和再生，因此人们普遍认为毛囊隆突部就是毛囊干细胞所在地。通过免疫组织化学染色发现，毛囊隆突区域处可见CD34+细胞与CK15+细胞，由此CD34和CK15开始被公认为是毛囊干细胞或者皮肤干细胞的主要标志物[4，5]。

对于非黑色素瘤来说最重要的致病因素是紫外线照射，Parisi等[6]选取了澳大利亚昆士兰地区部分人群进行了紫外线暴露量的研究，他们选择教师和其他学校职员作为第一组代表性样本，让其颈部接受（64±22）×10J/m2剂量的紫外线照射，另一组室内工作者（包括银行职员和律师等）接受比第一组少2%剂量的紫外线照射，而最后一组户外工作者（包括木匠、砖工等）则接受比第一组多10%剂量的紫外线照射，结果发现户外工作者组的BCC和SCC的发病率明显高于其他两组，说明紫外线与皮肤肿瘤发生密切相关。

SCC起源于表皮或附属器的角质形成细胞，是一种侵袭性癌，通常比BCC发展更加迅速，且更容易发生远处转移，镜下可见癌组织向下生长，突破基底膜并侵入真皮，呈不规则团块状或条索状，癌巢通常由正常鳞状细胞和非典型鳞状细胞组成。BCC通常生长缓慢，对局部组织具备较强的侵袭性，但是远处转移现象少见，好发于头、面、颈及手背等处，尤其是面部较突出的部位。

BCC和SCC的形态通常很容易区分，但在一些特殊情况下，如切片显示形态相对模糊时，则会导致无法依据HE染色来区分BCC和SCC[7]。使用免疫组织化学染色有助于鉴别皮肤肿瘤，Shafaei等[8]检测了CD10在两种肿瘤中的表达，发现在20例SCC肿瘤细胞中均未见CD10表达，而有18例（90%）标本的基质细胞存在CD10表达。有报道称在BCC标本中，有25个（59.5%）样本的肿瘤细胞可见CD10表达，32个（76.2%）样本的基质细胞中可见CD10表达，结果提示CD10是鉴别BCC和SCC有效的免疫组化标志物[9]，该研究还认为当肿瘤细胞出现CD10阳性表达时，将倾向于BCC的诊断。Abbas等[10]发现30%的BCC病例中存在CK15表达，而只有1例（5%）SCC病例CK15表达呈阳性，与此同时有60%的BCC和30%的SCC病例存在CK19表达。

BCC和SCC均为皮肤好发肿瘤，都属于非黑色素瘤，但是对于二者的细胞起源似乎没有统一的结论，Jih等[11]发现毛发上皮瘤（TE）和BCC均会表达CK15，毛囊隆突部细胞均表达CK15，而SCC则全部为阴性，Abbas等则发现CK15在30%BCC中表达，而在SCC中的表达率则低至5%，这些研究似乎都说明BCC和毛囊干细胞的关系密切，而SCC则可能起源于其他部位。有报道观察7种细胞角蛋白（Cytokeratin，CK）在皮肤SCC和BCC中的表达[12]，结果发现SCC中CK8、10、14、17、18表达阳性，CK7、19阴性，BCC中CK7、10、18阴性，CK8、14、17、19阳性，两者不同的CK蛋白表型也表明他们的细胞起源不同，在临床病理的鉴别诊断时可以联合检测多种CK蛋白来准确鉴别肿瘤。本次实验中发现CK15在BCC中表达更加广泛，在肿瘤细胞区域均有广泛表达，而在SCC中CK15的表达阳性率则较低，仅有个别呈现弱阳性，这一结果与之前的研究报道一致。大量的研究均证实，BCC和SCC的发生可能起源于皮肤或毛囊的干细胞的异常突变，只是二者各自最初的细胞系来源不同，所以会呈现出不同的免疫表型[13，14]，综合来看CK15可以作为鉴别SCC和BCC的良好标志物。

CD34于1984年被美国科学家Civin发现[15]，分子量为110kDa，是高度糖基化的Ⅰ型跨膜糖蛋白，其结构包括胞外区、跨膜区、胞浆区3部分，CD34选择性地表达于人类及其他哺乳动物造血干/祖细胞（Hemopoietic stem/Progenitor cell，HSC/HPC）表面，并随细胞的成熟逐渐减弱至消失，因此CD34抗原常作为筛选HSC/HPC的独特标志物。Trempus等[16]使用CD34特异性抗体对毛囊隆突部角质细胞进行检测，发现小鼠毛囊隆突区角质细胞呈现强烈的胞膜染色，同时发现CD34和CK15在该区存在共表达现象。沈宏等[17]研究检测了CD34在BCC和毛发上皮瘤（TE）中的表达情况，发现在所有BCC中几乎未见CD34表达，而TE中存在阳性表达，说明大部分BCC不是来源于CD34+细胞，或者说不是来源于毛囊隆突部CD34+细胞。以往研究未见报道CD34在SCC中的表达情况[18]，本研究显示CD34在SCC中呈广泛性强表达，且胞浆胞核均可呈现阳性，不过阳性表达还是限于肿瘤癌巢区，并未扩散到癌巢外面，由此我们推测SCC是起源于毛囊隆突部的CD34+细胞，其细胞起源不同于BCC，利用CD34将有助于对两种肿瘤进行鉴别诊断。

综上，CD34和CK15在BCC与SCC中表达存在极大差异，通过免疫组化同时检测CD34与CK15，可作为鉴别BCC及SCC的重要手段。