杜仲叶提取物对湘黄土鸡蛋品质、营养成分及血清抗氧化能力的影响

龚卫华， 彭 欢， 贺建武，3*， 胡美忠， 胡 娟， 蓝道英

（1.吉首大学杜仲综合利用技术国家地方联合工程实验室，湖南 吉首 416000；2.湘西州农产品质量检验检测中心，湖南 吉首 416000；3.吉首大学生物资源与环境科学学院，湖南 吉首 416000；4.铜仁职业学院，贵州 铜仁 554300；5.张家界潇湘农业开发有限公司，湖南 慈利 427200）

随着生活水平和健康理念的提高，人们更加注重饮食的营养均衡，安全、天然和无公害食品需求日益旺盛。散养土鸡蛋因其营养丰富，口感好深受人们的喜爱。但散养土鸡蛋因其规模小，生产效率低，不能满足市场的要求。因此，开发新型绿色添加剂，在确保蛋鸡品质的前提下，实现规模养殖，能有效缓解市场供不应求的状况。

杜仲叶来源广泛，营养丰富，富含绿原酸、桃叶珊瑚苷、黄酮和京尼平苷等多种天然活性成分，具有抗菌、抗氧化、促进动物生长和增强机体免疫力等多种功效，已被国家列入饲料添加剂目录（毛亚芳等，2021；王娟娟，2017；刘云龙，2015；吕武兴等，2007）。刘青翠等（2018）研究发现，添加300g/t杜仲叶提取物可增加蛋壳厚度，降低蛋黄胆固醇含量，增加血清多种抗氧化酶活性。而且杜仲提取能作为饲料添加剂提高奶牛的生产性能和乳品质（孔韬，2020）。因此，杜仲叶提取物作为饲料添加剂是确实可行的。但杜仲叶提取物对湘黄土鸡的蛋品质和营养成分研究鲜见相关报道。因此，本试验研究以杜仲提取物为主添加少量其他中草药提取物复配饲料添加剂对笼养湘黄土鸡蛋品质、营养成分及血清抗氧化指标的影响，并与散养湘黄土鸡的相关指标进行比较，以期为高品质鸡蛋的生产提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1试验材料与设计 杜仲叶提取物购于张家界恒兴生物科技有限公司，复配少量的黄芪多糖和大蒜素，购于汝州济生康生物技术有限公司。试验选取体重和产蛋率接近的8月龄湘黄土鸡240只，随机等分为3组，每组设5个重复，每个重复16只。I组为对照组，饲喂基础日粮（笼养），II组为杜仲组，在基础日粮中添加0.5%复配的饲料添加剂（笼养），III组为杜仲林下散养组，饲喂基础日粮。I组和II组采用上下两层阶梯笼养。全期自由采食，自由饮水，按常规方法进行饲养管理。设预试期2周，试验期10周。

1.2样品的收集 试验结束前，禁食12 h，每个重复选取6只鸡，翅下静脉采血，静置，3000 r/min离心10 min，分离的血清于-20℃保存。试验结束当天每个重复分别取30枚鸡蛋，4℃保存备用。

1.3指标测定

1.3.1 蛋品质的检测 用上海佑科YP20001（0.1~2000 g）电子天平称量蛋重；蛋型指数测定计（Tenovo Food NFN385）测量其长短径，计算蛋形指数；用蛋壳厚度测量器（Tenovo Food TQ-1A）测量蛋壳厚度；蛋白高度测定仪（Tenovo Food EQ-1A）测量蛋白的高度，利用蛋质计算尺（Tenovo Food MQ-1A）计算哈氏单位；用蛋壳强度计（KQ-1A）计算蛋壳强度；用罗氏蛋黄比色扇测定蛋黄色泽。

1.3.2 鸡蛋中营养成分测定 全蛋中氨基酸参照《食品中氨基酸的测定（GB/T5009.124-2003）》的方法进行检测；蛋黄中胆固醇参照《食品中胆固醇的测定（GB/T 22220-2008）》方法检测；粗蛋白质测定参照《GB 5009.5-2016食品安全国家标准食品中蛋白质的测定》中的凯氏定氮法；粗脂肪测定参考《GB 5009.6-2016食品安全国家标准 食品中脂肪的测定》中的索氏抽提法；灰分测定方法参照《GB 5009.4-2016食品安全国家标准 食品中灰分的测定》；水分测定参照《GB 5009.3-2016食品安全国家标准食品中水分的测定》。

1.3.3 血清抗氧化能力测定 血清中过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量严格按照南京建成生物工程研究所试剂盒中的说明书进行操作。

1.4数据统计与分析 原始数据采用Excel 2010进行初步处理，采用SPSS 20.0统计软件进行单因素方差分析，用Duncan’s法进行多重比较，以P<0.05为差异显著判断标准，结果以“平均值±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1杜仲叶提取物对蛋品质的影响 由表1可知，添加饲料添加剂和不同饲养方式对蛋壳厚度、蛋形指数和哈夫单位无显著影响，三组鸡蛋的哈夫单位在60~72，为A级鸡蛋，蛋壳厚度在0.27~0.40 mm，说明湘黄土鸡的鸡蛋较新鲜，蛋壳质量好（刘忠伟等，2015）。但杜仲组和散养组蛋壳强度及蛋黄颜色要显著好于对照组，而杜仲组和散养组之间无明显差异。

表1 杜仲提取物对蛋品质的影响

2.2杜仲叶提取物对鸡蛋常规营养成分的影响对鸡蛋常规营养成分测定的结果见表2。三组试验鸡蛋的蛋白质、脂肪、灰分和水分含量之间无显著差异。但在蛋黄胆固醇的含量上，杜仲提取物和散养试验组要显著低于对照组。

表2 杜仲提取物对鸡蛋常规营养成分的影响

2.3杜仲叶提取物对湘黄土鸡蛋氨基酸组成和含量的影响 三组湘黄土鸡蛋氨基酸组成及含量见表3。三组土鸡蛋中均含有17种氨基酸和7种人体必需氨基酸。以谷氨酸含量最高，其次是天门冬氨酸。其中对照组和杜仲组鸡蛋与散养组大多数氨基酸含量存在显著差异。而对照组和杜仲组之间只有脯氨酸、亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸和半胱氨酸含量有显著差异。散养组鸡蛋在总氨基酸和总必需氨基酸含量上最高，其次为杜仲组，最少的是对照组。除对照组必需氨基酸质量分数（38.33%）以外，杜仲组和散养组EAA/TAA（40.32%、40.60%）及对照组、杜仲组和散养组的必需氨基酸与非必需氨基酸的比值（EAA/NEAA）（62.17%、67.55%和68.35%）均高于WHO/FAO理想蛋白质标准所规定的40%和60%（王延云等，2020）。

表3 杜仲提取物对湘黄土鸡蛋氨基酸组成及含量的影响

2.4必需氨基酸与WHO/FAO氨基酸模式谱比较1973年，世界卫生组织（WHO）和联合国粮农组织（FAO）提出了氨基酸模式谱理论，并以此为指导对各类食品中的氨基酸进行评价（范佳英等，2018；Para，1979）。由表4可知，三组湘黄土鸡蛋其必需氨基酸质量分数都超过WHO/FAO模式谱中的参考值，其必需氨基酸组成模式基本符合人体理想蛋白质的要求。

表4 湘黄土鸡蛋中必需氨基酸占总氨基酸的质量分数与氨基酸模式谱比较

2.5氨基酸比值系数法评价鸡蛋营养价值 为了更好说明湘黄土鸡蛋在不同饲喂条件下蛋白质的营养价值，利用氨基酸比值系数法来综合评价。该方法通过计算氨基酸比值（RAA）、氨基酸比值系数（RC）和氨基酸比值系数分（SRC）共同综合评价鸡蛋的蛋白质营养价值（宋超等，2016）。RAA和RC值越接近1，SRC值越接近100，蛋白质中的必需氨基酸组成与氨基酸模式谱越一致，说明蛋白质的营养价值越高（王延云等，2020）。由表5可知，对照组鸡蛋中异亮氨酸的RC值最分散，对氨基酸生理平衡的负贡献最大，是对照组鸡蛋中的第一限制性氨基酸，而杜仲组和散养组鸡蛋中的第一限制氨基酸均为蛋氨酸和半胱氨酸。对照组、杜仲组和散养组湘黄土鸡蛋的SRC平均值为87.67，各组SRC值分别为86.44、87.45和89.12，其中散养组SRC值最高，说明杜仲林下散养的土鸡蛋营养价值最高，而杜仲组的SRC值也要高于对照组。

表5 湘黄土鸡蛋中各种必需氨基酸的RAA、RC及SRC

2.6杜仲叶提取对湘黄土鸡血清抗氧化能力的影响 由表6可知，对照组鸡血清中的丙二醛含量要显著高于杜仲组和散养组，其中散养组值为最低，对于谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶活性，杜仲组和散养组要显著高于对照组，杜仲组和散养组之间差异不明显。3组湘黄土鸡血清的超氧化物歧化酶活性值差异不明显。

表6 杜仲提取物对鸡血清抗氧化性能的影响

3 讨论

3.1杜仲叶提取物对蛋品质的影响 蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋形指数和哈氏单位是衡量蛋品质的重要指标。毛亚芳等（2021）研究表明，在饲料中添加杜仲叶粉对蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋形指数和哈氏单位无显著影响，与本试验中的蛋壳厚度、蛋形指数和哈氏单位的结果一致。而刘青翠等（2018）在蛋鸡饲粮中添加杜仲叶提取物饲喂28 d，能提高鸡蛋的哈氏单位，在饲喂56天时，蛋壳的厚度和强度显著增加，本试验蛋壳强度显著增加的结果与其一致，可能是因为杜仲叶提取物影响蛋鸡输卵管和子宫中钙结合蛋白（CaBP）表达量，从而影响蛋壳钙沉积，最终影响蛋壳质量（刘青翠等，2018；俞路等，2008）。蛋黄颜色的深浅主要取决饲养方法（放养）及家禽日粮中摄入的叶黄素及类胡萝卜素的种类和数量（刘静霖，2021），其影响着消费者的购买决策。本试验杜仲组和放养组蛋黄颜色在均有显著高于对照组，说明杜仲提取物添加和散养的方式能够在一定程度上增强鸡蛋中叶黄素、胡萝卜素的沉积（张琳杰等，2013）。

3.2杜仲叶提取物对鸡蛋常规营养成分的影响鸡蛋中胆固醇含量直接限制了鸡蛋食用量，所以鸡蛋胆固醇的含量是衡量鸡蛋品质的一个重要指标（段明房等，2017）。刘青翠等（2018）研究表明，在蛋鸡饲料中添加杜仲叶提取物能显著降低蛋黄中胆固醇含量，段明房等（2017）发现，添加发酵杜仲叶粉也能显著降低胆固醇含量，本试验结果与上述结果一致。可能是因为杜仲叶提取物中绿原酸可降低血清3-羟基-3甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMGR）活性，该酶为胆固醇合成代谢的关键限速酶，其活性高低与胆固醇合成成正相关，抑制其活性可减少体内胆固醇合成，使胆固醇分解为胆汁酸，进而降低蛋黄中胆固醇的含量（李文娜等，2012；张瑞仙，2012）。

3.3杜仲叶提取物对湘黄土鸡蛋氨基酸组成和含量的影响 氨基酸的组成和含量是评价鸡蛋营养价值的重要指标。本试验结果表明，3组湘黄土鸡蛋中均含有17种氨基酸和7种人体必需的氨基酸。对照组和杜仲组之间只有脯氨酸、亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸和半胱氨酸含量有显著差异，其他氨基酸含量差异不显著。徐峰（2010）在罗曼蛋鸡中添加杜仲叶粉，研究发现丝氨酸和酪氨酸显著高于对照组，而张瑞仙（2012）试验中丙氨酸、缬氨酸和脯氨酸显著提高，其结果不同可能是由试验蛋鸡品种和添加杜仲物形式不一样所致。而散养组氨基酸总量和必需氨基酸总量均高于对照组和杜仲组，与胡小芳等（2019）研究结果一致，说明不同饲养方式会对鸡蛋氨基酸组成和含量造成影响。杜仲组和散养组的EAA/TAA（40.32%、40.60%）高于WHO/FAO理想蛋白质标准所规定的40%，而对照组为38.34%低于40%，而在必需氨基酸和鲜味氨基酸总量上，杜仲组均高于对照组，说明饲粮中添加杜仲提取物在一定程度上提高了鸡蛋营养价值和鲜味。

3.4氨基酸模式谱及比值系数法评价鸡蛋营养价值 氨基酸组成比例不合适会影响蛋白质的营养价值，甚至影响人类的身体健康，因此WHO/FAO提出氨基酸平衡理论，采用氨基酸比值系数法综合评价蛋白质营养价值。对照组、杜仲组和散养组3组湘黄土鸡蛋其必需氨基酸质量分数都超过WHO/FAO模式谱中的参考值，其必需氨基酸组成模式基本符合人体理想蛋白质的要求。3组湘黄土鸡蛋的SRC平均值为87.67，高于胡小芳等（2019）旧院黑鸡SRC值（85.94）和王延云等（2020）七彩山鸡SRC值（85.56），说明湘黄土鸡全蛋必需氨基酸组成合理，鸡蛋的营养价值高。散养组的SRC值最高，其次为杜仲组，进一步说明通过添加杜仲提取物，提高了鸡蛋的营养价值。

3.5杜仲叶提取对湘黄土鸡血清抗氧化能力的影响 杜仲叶提取物中富含绿原酸、黄酮类化合物，使其具有抗氧化活性。而血清中的超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶是机体细胞内清除自由基的抗氧化酶，丙二醛是脂质过氧化的产物，其含量越低说明机体清除活性氧的能力越强（丁浩轩等，2020）。本研究表明，杜仲组血清中谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶显著高于对照组，而丙二醛的含量显著低于对照组，表明提高了机体抗氧化活性，与刘青翠等（2018）研究结果一致。研究发现杜仲叶提取物能显著提高黄羽肉鸡的血清和肝脏中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性，显著降低丙二醛的含量，提高机体的抗氧化能力（丁浩轩等，2020）。这在小鼠和断奶仔猪中进一步得到证实（王鑫等，2019；Choi等，2008）。杜仲叶提取物能提高机体抗氧化能力可能是因为提取物中绿原酸和黄酮类物质对活性氧自由基的抵御清除能力，可阻止其对正常细胞的侵害，提高机体自身多种抗氧化物酶的活性，从而提高机体的抗氧化能力。

4 结论

饲粮中添加0.5%杜仲叶提取物为主复配的饲料添加剂，可改善鸡蛋的蛋壳强度和蛋黄色泽，降低蛋黄中胆固醇含量，提高湘黄土鸡蛋蛋白质的营养价值，显著提高血清谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶活性，降低丙二醛的含量，提高机体抗氧化活性。