金丝皇菊离体培养技术

梁小敏，夏慧敏，龚福保，刘隆学

(1.江西农业工程职业学院，江西 樟树 331200；2.江西省致远农业发展有限公司，江西 高安 330800)

金丝皇菊(Chrysanthemummorifolium‘Huangju’)简称皇菊，也叫九月菊、大黄菊，花大、色艳，富含黄酮、氨基酸和微量元素，具有较高的观赏和药用价值。《神农本草经》记载菊花“久服利血气，轻身耐老延年”，药典记载其性凉，味甘、苦，微寒，有散风清热、平肝明目、清热解毒、延缓衰老等作用[1-2]。

由于金丝皇菊市场一路走高，随着引种和种植面积的扩大，种苗繁育出现了一些问题。金丝皇菊种苗繁殖分为扦插繁殖和分株繁殖2种，但这2种繁殖方式的繁殖系数低，且容易传染母株病毒、导致产量降低、花型变小，严重影响其品质和商业价值。植物组织培养技术在大量的种苗繁殖中均可有效地解决这方面的难题，但在金丝皇菊上的应用报道还不多见[3-5]。为探索植物组织培养技术在金丝皇菊种苗上的应用，对其进行了系统试验研究。

1 材料与方法

1.1 试验材料

采用江西省致远农业发展有限公司提供的金丝皇菊嫩茎段作为试验材料。

1.2 材料处理

选取生长健壮的当年生金丝皇菊嫩茎段(带1～2个芽)，去除多余的叶片及茎段，置于流水中用软毛刷刷去表面的灰尘和泥土，将幼茎剪成带腋芽的1.5～2 cm长的茎段，于1%洗衣粉溶液浸泡1 min，然后流水冲洗0.5 h，置于超净工作台中，用75%乙醇溶液浸泡30 s，无菌水漂洗2～3次，转入已加入2～3滴吐温的0.1%升汞溶液中浸泡6 min灭菌，取出用无菌水漂洗5～6次，备用[6]。

1.3 培养基及配方

以基本培养基(MS)为培养基，蔗糖20 g·L-1，琼脂5 g·L-1，以不同浓度的6-苄氨基嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)配制芽诱导培养基。以MS为基本培养基，蔗糖20 g·L-1，琼脂5 g·L-1，以不同浓度的6-BA和不同浓度的NAA配制增殖培养基。pH均调节为5.8～6.0[7]，经高压灭菌处理后备用[8]。

1.4 试验方法

经灭菌处理后的外植体，接入芽诱导培养基，在适宜条件下诱导出芽。当芽生长至0.5 cm后，即转入增殖培养基进行增殖培养。

1.5 培养条件

光照强度3 000 lx，光照时问12 h，培养温度(22±1)℃[9]。

2 结果与分析

2.1 不同浓度植物生长调节剂对金丝皇菊诱导芽的影响

将外植体茎段接入芽诱导培养基中，进行培养5～10 d[10]，可见茎节上潜伏的腋芽开始萌动生长。20 d左右可逐渐形成主芽及芽丛，记录诱导数并计算诱导率(表1)。使用SPSS 25对其进行单变量双因素主效的方差分析和LSD多重比较，结果见表2。

表1 不同浓度激素下金丝皇菊芽诱导情况

表2 不同6-BA和NAA浓度下金丝皇菊的诱导率

从分析结果来看，6-BA浓度在0.1～0.5 mg·L-1，金丝皇菊芽诱导率差异显著，其中6-BA为0.10 mg·L-1时诱导率较高，生长良好，且随着6-BA浓度的升高，其诱导率有下降的趋势，生长状况也较差。NAA浓度在0.05～0.25 mg·L-1，金丝皇菊芽诱导率差异显著，其中NAA浓度为0.10和0.15 mg·L-1时金丝皇菊芽诱导率较高，低于或高于此浓度，其诱导率均下降。

试验表明，培养基MS+6-BA 0.1 mg·L-1+NAA 0.10～0.15 mg·L-1对腋芽的诱导率较高，且芽生长健壮，是较理想的芽诱导培养基配方。

2.2 不同激素浓度组合对金丝皇菊增殖的影响

当腋芽长至0.5 cm左右，将其从基部切下(均分割为单株)，接入不同浓度的6-BA、NAA激素配制的增殖培养基中，5～10 d可见幼苗基部萌发出新芽[11]。约30 d后，记录丛生芽情况(表3)。使用SPSS 25对其进行单变量双因素主效的方差分析和LSD多重比较，结果见表4。

表3 不同浓度激素下金丝皇菊增殖情况表

表4 不同6-BA和NAA浓度下金丝皇菊的增殖系数

从结果分析来看，6-BA浓度在0～0.4 mg·L-1，金丝皇菊试管苗的增殖系数差异显著。其中，6-BA浓度为0.3 mg·L-1增殖系数最高，生长良好。NAA浓度在0.05～0.25 mg·L-1，金丝皇菊试管苗的增殖系数差异显著，其中，NAA浓度为0.05～0.10 mg·L-1增殖系数最高，且随着NAA浓度的升高，增殖系数有下降的趋势。

试验表明，培养基MS+6-BA 0.3 mg·L-1+NAA 0.05～0.10 mg·L-1，分化增殖的新生芽数多，幼苗生长健壮，植株高大，是比较适宜的增殖培养基。

3 小结

本试验以金丝皇菊带腋芽茎段为试验材料，进行组培快繁。通过组织培养进行快速繁殖金丝皇菊种苗，是一项可行的技术。通过不同激素浓度对芽诱导以及增殖的影响试验，说明较低浓度6-BA和NAA有利于腋芽的诱导和增殖。MS+6-BA 0.1 mg·L-1+NAA 0.10～0.15 mg·L-1是适宜的芽诱导培养基，MS+6-BA 0.3 mg·L-1+NAA 0.05～0.10 mg·L-1是适宜的增殖培养基。至于6-BA与NAA两因素之间的互作，则需要进一步试验研究。金丝皇菊的生根和驯化移栽比较简单。适宜浓度的NAA可诱导生根，正常情况下进行驯化即可成活，且成活率很高。