臧合英
(河南省兽药饲料监察所,河南 郑州 450008)
兽药在调节动物生理机能,治疗、预防动物疫病,促进动物生长发育方面起着重要作用。但是在兽药使用过程中,如果无视休药期规定、不遵守食品安全法规,肆意售卖屠宰动物,极易导致动物体内残留兽药成分,而这势必会对畜牧产品质量及消费者健康造成不利影响。因此,为了保障畜牧产品质量及消费者健康安全,必须针对饲料中常见兽药做好检测工作,熟练掌握兽药检测技术。
1.1 大环内酯类药物大环内酯类药物是一种弱碱性抗菌素,红霉素是其中最具典型的代表。将其运用到动物养殖当中,不仅可以用作治疗药物,而且可以用作预防药物,促进生长药物,而这对动物养殖效益的提高是极为有利的。如果长期使用这类药物,在动物器官和组织中积累到一定的浓度,会对动物肾脏器官造成严重危害。消费者如果食用这类药物的高残留动物产品,会出现毒性、致敏性反应,导致体内菌群失调。
1.2 磺胺类药物磺胺类药物主要用于治疗、预防细菌性传染病。在动物养殖过程中,常被用于饲料添加剂的磺胺类药物主要包括磺胺二甲基嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶等。但是据相关研究显示,消费者如果长期食用含有磺胺类药物残留的动物产品,极易出现过敏反应。
1.3 四环素类药物四环素类药物属于光谱抗生素的范畴,主要包括四环素、土霉素、金霉素等。在动物养殖过程中,四环素类药物可以用作消毒剂、兽药等,用于促进动物生长、防治动物肠道感染等。但是这类药物极易造成食品残留,导致病株出现耐药性,而且积累到一定浓度,会导致消费者肠道菌群微生态平衡失调,出现再生性贫血症状。
1.4 氯霉素类抗生素氯霉素类抗生素是一种光谱类抗生素,主要包括氟甲砜霉素、甲砜霉素、氯霉素等,常被应用于动物传染病的预防及治疗中。但是由于氯霉素类抗生素极易蓄积于人体及动物体内,导致人体或动物体出现严重的毒副作用,严重时甚至会导致人体或动物体造血功能受到抑制,所以包括我国在内的诸多国家都将其列入禁用药范畴。
1.5 头孢菌素类药物头孢菌素类药物属于β-内酰胺类抗生素,具有广谱抗菌、过敏率低等优势。当前头孢菌素类药物有很多,按照其抗菌性能及发明顺序,主要可以分为头孢噻呋、头孢克洛、头孢拉定等。但是由于头孢菌素类药物具有较强的耐药性,所以为了保障人类及动物安全,包括美国在内的诸多国家都禁止在动物饲料中添加头孢菌素类药物。
1.6 硝基呋喃类药物硝基呋喃类药物是一种光谱抗菌类药物,对大多数原虫、真菌、革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌都能起到良好的杀灭作用。当前市面上比较常见的硝基呋喃类药物主要有呋喃西林、呋喃妥因、呋喃它酮、呋喃唑酮四种。硝基呋喃类药物由于具有良好的抗菌作用,并且价格低廉,所以广泛的应用于蜂、水产、家畜、家禽等动物传染病的治疗及预防当中。但是由于此类药物及其代谢产物可加大人体出现畸胎、癌症等风险,所以许多国家都将其列入水产动物及畜禽动物饲料中禁止添加的兽药。2005年我国农业部颁布了560号令,正式将硝基呋喃类药物纳入动物饲料禁用药范畴。
1.7 喹诺酮类药物喹诺酮类药物是一种人工合成的抗菌药,也被称为吡啶酮酸类药物或吡酮酸类药物。当前市面上常见的喹诺酮类药物主要包括氟罗沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星等。此类药物主要用于皮肤组织、呼吸道的革兰氏阴菌感染,以及胃肠疾病、泌尿系统疾病的治疗当中。喹诺酮类药物属于人畜通用药物,不仅可以应用于动物疾病的治疗,而且可以应用于人体治疗,但是这种药物在人体内蓄积、残留,会使人体产生较强的抗药性,进而影响疫病后续治疗。2005年美国将恩诺沙星列入禁用兽药范畴。
1.8 β-兴奋剂类药物β-兴奋剂类药物也就是我们常说的“瘦肉精”,此类药物具有减慢蛋白质代谢分解、加速脂肪代谢分解的功效,进而可以起到降低动物机体脂肪含量,促进动物机体肌肉组织生长的目的。在动物饲料中适量添加β-兴奋剂类药物,可以提高动物增重量、瘦肉量以及饲料利用转化率。当前市面上较为常见的β-兴奋剂主要包括沙丁胺醇、莱克多巴胺、盐酸克伦特罗药。β-兴奋剂类药物对动物及人体的肾脏、肝脏等内脏器官会产生较强的毒副作用。随着β-兴奋剂类药物残留事件的日益高发,我国已经β-兴奋剂类药物纳入禁用兽药范畴。
1.9 硝基咪唑类药物硝基咪唑类药物对原虫及厌氧菌具有良好的杀灭作用,所以被广泛添加在动物饲料当中用来抗菌、抗原虫感染。除了抗菌和抗原虫感染外,硝基咪唑类药物还具有一定的促进动物机体生长的作用。当前市面上常见的硝基咪唑类药物主要包括奥硝唑、替硝唑、地美硝唑等。此类药物及其代谢物会导致包括人体在内的诸多步入动物出现突变、畸形、癌症等后果,并且具有一定的遗传性,因此国际诸多国家都将硝基咪唑类药物纳入禁用药的范畴。
2.1 分光光度法牛纯青等曾采用分光光度法对饲料中泰乐菌素的含量进行鉴定,发现其浓度在5.0~50μg/mL时,其吸光度与浓度存在良好的线性关系。分光光度法虽然对实验仪器要求较低,但是实验操作较为繁琐,检测范围较为有限,只能应用于青霉素、环丙沙星等少数几种兽药的检测当中,并且检测的精准度有限,极易出现检测误差。
2.2 微生物学法微生物学法也被称管碟法,主要用于发酵抗生素含量检测,这种检测方法具有灵敏度高、用量少、检测与原理一致等优势。顾欣等曾采用微生物学法对恩拉霉素在饲料中的含量进行了检测,检测发现这种检测方法的最低检测限度为0.5mg/kg。除了恩拉霉素可以用这种检测方法检测外,泰乐菌素、金霉素、林可霉素等都可以运用这种检测方法检测。这种检测方法虽然应有诸多有限,但是由于对操作过程具有严苛的要求,一旦出现一个操作失误或操作不当,会导致整组实验失败,从而导致其推广应用仍较为局限。
2.3 免疫分析法免疫分析法是基于抗体抗原特异性结合而建立的一种检测方法,可以广泛应用于抗体、半抗、抗原的检测当中。在饲料兽药检测中应用较广的免疫分析法主要包括胶体胶体金免疫层析法和酶联免疫吸附法。胶体金免疫层析法比较适用于少数样品或单个样品检测;酶联免疫吸附法比较适用于大规模样品检测。免疫分析法具有准确、灵活、快速、操作简单、对仪器要求低等优点,可以广泛应用于饲料兽药检测当中。
2.4 薄层色谱法薄层色谱法操作简单、对仪器要求较低、检测成本较低,但是只能进行粗略检测,无法定量检测。韩凤丽等采用薄膜色谱法对饲料中磺胺的含量进行了测定,检测发现最低检出率为0.05μg/mL。
2.5 气相色谱法气象色谱法属于分离分析方法的范畴,虽然检测成本高、检测步骤繁琐、需要运用的试剂较多,但是由于其检测准确度高、检出限低、精密度高、检测较为灵敏,所以在我国具有较为广泛的应用。当前我国主要运用气相色谱法进行氯霉素类抗生素药物的检测,最低检出限度为0.005mg/kg,能很好地满足日常兽药添加检测需求。
2.6 高效毛细管电泳法高效毛细管电泳法是一种新兴的检测技术,该技术主要以毛细管为分离通道,以高压电场为动力来源,根据样品中各成分分配行为及淌度方面的差异,达成成分分离,并以此开展分析的方法。这种检测技术具有选择性强、适用范围广、分离效率高、分离速度快、试样和溶剂消耗少等优点。陈红青曾运用此种检测技术对饲料中的沙丁胺醇和盐酸克伦特罗的含量进行检测,最低检测限度为0.03μg/kg和0.02μg/kg。
2.7 电化学分析法电化学分析法是在以被测物质某些量与电量、电流、电导、电位之间的剂量关系为基础,对被测物质的成分进行定量、定性分析的方法。这种检测方法具有检测便捷、灵敏度高、选择性强等优势,所以在生物活性成分,微量化合物检测方面具有较为广泛的应用。张寅艳等曾运用这种检测技术对6种磺胺类药物开展了检测,最低检测限度为0.08μg/mL。王伟宇等也曾运用这种检测技术对β-兴奋剂开展了检测,最低检出限度为2.06×107g/mL。
2.8 液相色谱-串联质谱法液相色谱-串联质谱法具有分辨率高、选择性分析等优势,比较适合应用于稳定性相对较差的化学药物检测,并且在检测过程中还能进行蛋白质序列测定及化学结构剖析。近年来有许多文献记载了运用液相色谱-串联质谱法检测磺胺类药物、苯丙咪唑类药物、β-兴奋剂类药物、氟喹诺酮类药物的报道。这种检测技术具有检出限度地、灵敏度高、定性效果好等优点,但是由于其检测步骤繁琐、检测成本高、检测设备昂贵,导致这种检测技术当前在国内应用仍较为有限。
2.9 生物传感器法生物传感器是一种有转换器和生物敏感部件构成,能够对生物活性物质或特定化学物质具有可逆性和选择性响应的装置,具体而言主要包括微生物传感器、组织传感器、酶传感器等。相较于传统检测技术,这种检测技术具有适合现场检测、高通量、易于操作、灵敏度高、选择性好等优势。但是这种检测技术当前在国内尚处于探索阶段,所以应用极为有限,但是英国食品环境研究院曾运用这种检测技术对多种兽药进行了有效检测。
2.10 高效液相色谱法高效液相色谱法具有容易回收、进样量少、灵敏度高、检测速度快等优势,所以在兽医检测方面得到了广泛应用。近来来相关行业标准及国家标准在制定时,也会运用高效液相色谱法。当前高效液相色谱法比较常用的检测器主要包括荧光检测器、二极管阵列检测器、紫外光度检测器等。这三种检测器各有优点,(1)荧光检测器。荧光检测器具有灵敏度高,选择性强等优势。张素霞等曾运用荧光检测器对莱克多巴胺药物进行检测,最低检出限度为0.48μg/g;(2)紫外光度检测器。紫外光度检测器具有对不会对样品造成损坏、灵敏度高、线性范围快等优势。邸万山等曾采用紫外光度检测器对盐酸克伦特罗药物进行检测,测定标准的偏差为0.13%;(3)二极管阵列检测器。二极管阵列检测器具有线性范围宽、噪音低、灵敏度高、温度和流速对其影响小等优势。曹鹏曾运用二极管阵列检测器对4种硝基呋喃类药物进行了检测,最低检出限度为0.5mg/kg。
为了促进动物生长,预防、治疗动物疫病,饲料中会添加大量兽药,这些兽药如果消化不完全,会残留在动物体内,对动物产品质量乃至消费者健康造成不利影响。因此,为了降低兽药对动物产品质量乃至消费者健康的影响,必须对兽药在饲料中添加的种类及剂量严格加以要求,并做好相应的检测工作。