新型冠状病毒核酸检测分析

付永伟

（吉林市疾病预防控制中心，吉林 吉林 132000）

0 引言

由于新型冠状病毒肺炎具备极大的传染力和感染力，自从进入我国以来，快速造成了大范围内的传播感染感染人数的增加，导致众多的居民申诉了生命安全威胁当中，为了加强对于民众生命安全保护防卫工作进行，我国在新型冠状病毒肺炎防治过程当中积极应用相关政策，通过减少人口流动速度和人口流动范围，将病毒感染控制在较小区域内，尽最大努力控制新型冠状病毒的传染。我国在新型冠状病毒肺炎呈现流行趋势的过程中及时进行政策调整，通过合理的手段和规范，良好地控制住了疫情的发展，且对于当前仍然存在的出现病例的情况进行了应对措施，由于新型冠状病毒传染发展过程当中呈现出了进化突变态势，由此衍生出了德尔塔毒株和奥密克戎变异株，具备更强的感染力和杀伤力，容易造成感染者严重的后遗症影响，甚至因此而死亡。目前国内仍然保持着对于公共卫生安全的警惕性，其中，核酸检测就是重要的环节。通过观察核酸检测不难发现，患者往往需要多次检测才能检测阳性结果，这对于效率和安全问题都产生了比较大的影响，因此，本文将进行核酸检测分析和研究对比，并主要论述假阴性、假阳性的影响因素，同时做出一些针对性的解读，提出提高核酸检测结果准确性的操作方法和管控方法，以期为当前的核酸检测中保障检测效率和效果提供参考价值。

1 新型冠状病毒核酸检测

1.1 COVID-19 病例暴露后核酸检测阳性率

传染患者在14天后才会逐渐暴发出相关的病症，并且此时可以有效检测到患者体内的核酸阳性状况，因此在进行病例核酸检测过程中需要观察病例暴露后，确诊病例和无症状感染者的情况，对他们暴露后的核酸检测阳性率进行对比可以发现，普遍情况下，随着时间的增长，阳性率相对来说都是比较明显的下降[1]。

1.2 COVID-19病例暴露后核酸检测循环阈值（Ct值）

从表格中的数据可以看出COVID-19病例暴露后核酸检测循环阈值比较，此外，在针对患者检测阳性的时间分析中，普遍发现确诊病例和无症状感染者的阳性时间没有较大差异。在无症状感染者核酸病毒监测过程中较难及时有效检测出相关的患病情况。

2 影响假阴性的主要因素分析

2.1 病原学因素

我国国内通过控制传播感染范围，尽量减少大量人群聚集，加强病毒携带者核酸检测等相关措施对病毒实现了比较良好的控制，同时通过开展全面的核酸检测、新型冠状疫苗注射工作提高了全体人民对于新冠肺炎病毒和疫情的防控能力。但是，新冠肺炎病毒的结构不断变化，变异，导致病毒的传染力和破坏力更强，对人类的生命健康造成更大的威胁。因此需要不断研究和完善相应的病毒检测方法，针对病毒进行有效的预防控制。目前核酸检测作为有效检查并了解病毒感染概率的重要方法，在使用过程中仍然存在一些问题，检测反应速度较慢、检测效率较差等问题，在核酸检测的试剂上还有待加强，提高检测的效率和质量。

表1 确诊病例组与无症状感染者组暴露后核酸检测Ct值比较（）

2.2 标本因素

采集标本的时间、类型和质量等，实际上都会影响到检测的结果。从客观结果上来看，如果采集的标本在时间和类型上有不适当之处，例如由于潜伏期原因而导致的所采集的标本并非最佳的检测时期，就很容易导致检测结果出现偏差和问题。而在目前的痰液、鼻咽拭子、口咽拭子这三种类型的标本中对比，随着时间的不同，它们的检测结果也会出现问题差异。此外是标本质量本身的问题，若标本的病毒含量能够达到核酸检测下限，能够取得良好的检测效果，但反之则很容易导致检测结果出现差异，这也是当前的主要问题之一，操作的不规范、保存问题或是由于就诊者本身具有其他疾病等因素，都会导致标本的质量比较低。因此，一方面，采集标本本身就要注意规范性，然后通过合理适当的手段来保存标本，尽快进行检测；另一方面，要注意运输问题，避免在运输的过程中由于温度等原因导致标本质量下降，影响检测结果，采集的标本应当尽快进行检测，并且注意保持一定的温度。

2.3 人员因素

目前主要采用的核酸检测样本采集方法。有偶像呼吸道样本，血液样本，粪便样本等等吸收下呼吸道样本是开展核酸检测的首要选择，早期新型冠状病毒感染者症状为无痰、干咳、少痰等等反应，通过检查下呼吸道样本可以较为准确检测到患者核酸样本当中的相关病毒数据。在采集过程当中，医护人员需要采集同一患者不同部位的多个样本，从而提高样本检测的精准性。注意在样本采集过程中，如果采集部位不当、采集深度不足、采集力度不佳，都有可能造成样本材料不合格。在核酸检测的过程中需要大量的检测人员负责对广大民众进行检测样本收集，将检测完毕的样本进行分类保管，快速送至检验场所进行检查，由于我国人口众多，在人员的作业收集检测过程中需要花费大量的人力，人力是开展病毒检测和分析活动的重要力量，但是人力有限，在人力使用活动过程当中容易受到个人操作方法和操作水平的影响，从而导致最终检测结果不准确，比如在鼻咽拭子样本采集过程当中，受到样本采集部位选择样本采集深度和力度样本是指停留时间的因素影响，最终检测结果的准确性将会发生相应变化，在样本采集过程当中由于样本采集部位较为敏感，容易引发患者出现咳嗽和喷嚏现象，从而导致局部出现较高浓度的飞沫，造成病毒感染隐患。为保证检测结果的准确性，在检测过程当中积极对于检测人员来说，需要进行专业的科学的培训过程，个人基础能力达标，具备基本的知识储备和经验等，通过加强对于检测人员的培训教育，引导检测人员了解规范合理的检测方法，能够胜任检测中的操作要求，且规范自身的操作行为。在整个提取过程中需要注意多个事项，检测人员应当留意这些问题，积极根据检测中标本出现的问题规范自己的操作，避免由于人员能力等原因导致提取、检测过程中的误差。

2.4 设备因素

在检测过程中会使用到相关的设备仪器，如冰箱、离心机等，检测设备使用操作和日常维护都会影响到最终检测结果，如果在检测设备使用过程当中不注意消毒和清洁，会使细菌侵入检测设备当中，污染检测样本，不利于检测结果精准测验。另外，设备、仪器的功能对于标本保存、提取和检测过程都有着直接的影响，如冰箱就会对标本的质量产生影响，温度升高会导致病毒的繁殖性增强，病毒会出现大量繁殖现象，污染影响内部环境；温度过低会导致病毒活性增强，无法快速有效检测相关病毒含量。因此，就要做好新冠疫情检测设备的维护，整套检测设备以及具体的仪器都需要非常细致和科学的维护，定期对设备的功能进行检查，避免设备出现问题。

2.5 试剂因素

COVID-19新型冠状病毒疫情属于全球范围内的突发性公共卫生事件，在一出现后迅速造成了大范围的感染，未有效预防相关病毒，并快速针对病毒感染者进行治疗，各国学者纷纷开始加强对于新型冠状病毒肺炎核酸检测的研究。目前各国学者在第一时间内对病毒核酸检测进行研究，提出了能够有效检测病毒的核酸检测试剂，但是由于时间有限，核酸检测试剂并未能进行大范围内的临床试验和长期的研究评估，在检测过程中可能出现部分个体由于扩增区而导致假阳性或假阴性的可能。目前我国拥有7种以上的核酸检测试剂进行广泛使用，不同的核酸检测试剂在灵敏性和稳定性方面具备一定的差异，核酸检测试剂的检测结果也存在一定的差异。另外，在提取方面，由于提取的方法实际上在当前还是有多种不同的，而试剂的品牌也有了不同，则就需要选择适当的提取试剂，并且保证提取的过程中规范科学操作，如果这些方面中出现问题，自然会影响核酸检测的结果[2-3]；在扩增方面，则由于不同厂商所研发的试剂盒问题，需要注意当出现异常结果的时候，要及时重新采集样本并检测，根据说明书进行规范性的检测。

3 影响假阳性的主要因素

3.1 污染因素

核酸污染的问题，实际上将会涉及到提取、上级扩增全程中的污染问题，并非某个特定环节的，而这一问题所引起的检测结果问题相对也比较集中，所需要规范的行为也比较统一，因此应当单独列为一项影响因素。提取前以及提取中的污染，例如交叉污染，会对样本等本身产生比较大的影响，导致样本的质量出现问题，进而影响后续的一系列操作过程，是根本性的，同时也是相对容易解决的，因此针对各个环节阶段中的污染问题要进行合理的防控，将污染因素控制好。首先，实验室必须将各个区域独立开，并且保障检测、操作人员之间没有互相进入区域，即避免由于人员等问题导致区域之间产生流通而出现的最后的污染问题[4]；其次，则是要合理使用设备仪器，尤其注意清洁等问题，根据操作的方法和注意事项等及时对设备进行管理，避免出现交叉污染的问题[5]；最后，还要注意在操作过程中如果发现了已存在的污染现象，应当及时进行应对措施，对针对性的环节进行合理的检查。

3.2 非特异性扩增因素

由于引物设计不够特异，也容易在整个检测过程中导致问题，进而导致最后的假阳性。这一问题的关键点在于会对S型扩增曲线产生影响，导致最后的检测结果和数据出现偏差，进而导致更多的检测质量问题和判断问题。因此在进行核酸检测试剂应用过程当中，需要选择适当的剂型病期，要根据相应检测需求设置扩增条件，最好采用密闭性上架的8连管上机，有效避免而在。扩增过程中造成大量样本污染，在实验结束以后需要应用75%含量的酒精清洗核酸检测盒，保障检测器具的安全性和卫生性。

3.3 判断失误因素

由于需要对结果进行判断和解读，就导致了在判断上也可能会出现失误，进而影响最终的结果确定，这一问题是主观上的因素，因此也是容易解决的，在检测结果上，需要提高判断能力，对结果进行合理的调整和对比，从而更准确地对结果曲线进行合理判断，避免由于人为的判读失误原因而导致结果问题[6-7]。另外在检测结束以后需要开展复查工作，对检测人员进行重新采样或者更换不同品牌的试剂盒进行检测，通过复查检测得出明确的检查样本，有效排除因为江阴新因素存在而出现的检测结果误差。

4 结论

综上分析，从整个新型冠状病毒核酸检测以及假阴性、假阳性的影响因素来看，在当前的核酸检测中，仍然由于主观以及客观的许多因素而存在着对于检测结果的影响，包括人员自身的操作、判断等，以及对于客观环境的控制和检测，因此，要做出针对性的提高和管控，尽最大努力来保障核酸检测的结果[8-10]。核酸检测技术对于新型冠状病毒的防控具备巨大的意义，本文初步探讨分析了在病毒核酸检测过程中的关键要点和影响因素，通过不断完善新型冠状病毒的检测，科学监督和检测合理程度，提高新型冠状病毒核酸检测准确性，有助于疫情的防控监测。在整个检测过程中，需要更加注重对每个环节的规范性，正确采集标本，避免采集、运输过程中的问题影响检测结果，同时还要提高检测本身的能力，规范实验室人员的操作，保证检测结果的准确性，以此来保障在当前社会中的核酸检测能够普遍产生作用，为保障公共卫生安全提供帮助。