结直肠癌错配修复蛋白与临床病理特征的关系

崔珂珂

（襄城县人民医院病理科，河南 许昌 461700）

结直肠癌（Colorectal cancer，CRC）多发于40岁以上中老年人群，其病理类型以腺癌最为常见，发病原因多与家族遗传、消化道疾病、长期低纤维饮食等有关。现如今，我国CRC发病率呈逐年上升趋势，对人类生命安全造成了极大威胁。据报道，早期CRC患者在经过手术、放化疗等综合治疗后，其5年生存率可达到90%，但仅有39%的患者可在早期确诊[1]。

相关研究指出，CRC发生的分子途径包括微卫星不稳定性、染色体不稳定性和CpG岛甲基化3种，其中微卫星不稳定主要由错配修复（Mismatch Repair，MMR）蛋白失活、造成基因突变产生。MMR系统能够精准识别DNA复制过程中出现的碱基错配，维持人类基因库完整与稳定。MMR功能缺陷，将导致细胞自发突变率增加，加速CRC发生、发展过程[5]。

因此，分析MMR蛋白在CRC患者中的表达情况，探讨MMR蛋白与病理特征的关系，对临床评估CRC患者病情进展，制定针对性诊疗措施具有至关重要的意义。因此，本研究欲通过检测CRC患者MutL同源物1（MutL homolog 1，MLH1）、减数分裂后分离蛋白2（Post-meiotic segregation 2，PMS2）、MutL同源物2（MutS protein homolog 2，MSH2）、MutL同源物6（MutS homolog 6，MSH6）4种MMR蛋白缺失情况，探讨其与临床病理特征的关系，从而为提高临床CRC的诊断效率提供一定指导。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究经医院伦理委员会批准。选取2018年10月~2021年10月于本院接受根治术治疗的116例CRC患者作为研究对象。纳入标准：符合中CRC的诊断标准[3]；术前未接受放化疗治疗；精神正常；患者家属签订知情同意书。排除标准：非原发性CRC者；复发性CRC者；合并林奇综合征者；存在家族性腺瘤性息肉病史者。所有患者中男74例，女42例；年龄46~75岁，平均62.74±5.66岁；肿瘤TNM分期[4]：Ⅰ期12例，Ⅱ期28例，Ⅲ期32例，Ⅳ期44例；分化程度：高分化48例，中分化36例，低分化32例。

1.2 方法

于CRC根治术中获取患者肿瘤组织和癌旁组织标本，检测MMR蛋白表达情况和CRC组织的临床病理特征后，分析MMR蛋白表达与临床病理特征的关系。

1.3 观察指标

1.3.1 MMR蛋白表达情况

选取肿瘤与正常组织同时存在的蜡块制成4 μm厚度切片，采用Evision法行免疫组化，一抗为MLH1、PMS2、MSH2、MSH6，抗体及免疫组化试剂均由上海科敏生物科技有限公司提供。检测结果判读：MMR蛋白在细胞核明确着色为阳性表达，不着色为缺失。 将4种蛋白全部阳性判断为错配修复修复完整（Proficient mismatch repair，pMMR），4种MMR蛋白中任意一种及1种以上蛋白表达阴性判定为错配修复缺陷（Deficient mismatch repair，dMMR）。

1.3.2 CRC临床病理特征

用4%甲醛溶液固定肿瘤组织标本，石蜡包埋，苏木精-伊红（Hematoxylin-eosin，HE）染色，光镜观察病理特征。磷酸缓冲液代替一抗作为阴性对照，阳性对照为已知阳性片；每例均有HE切片做对照观察。

1.3.3 MMR蛋白表达与CRC临床病理特征的相关性分析

应用χ2检验Phi和Cramer's ν系数分析MMR蛋白表达与临床病理特征的关系。

1.4 统计学方法

数据采用SPSS 25.0软件进行统计学分析。计量资料经Shapiro-Wilk正态性检验后以均数±标准差（±SD）表示，采用t检验；计数资料以例数（%）表示，采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 MMR蛋白表达情况

所有患者中，MMR蛋白表达阳性者94例（81.03%），MMR蛋白表达缺失者22例（18.97%）；其中MLH1、PMS2、MSH2、MSH6蛋白表达缺失者分别为9例、11例、6例、6例，MLH1和PMS2蛋白共同缺失者4例，MSH2和MSH6蛋白共同缺失者6例，未见4种蛋白共同缺失患者。

2.2 MMR蛋白表达与CRC临床病理特征的关系

不同肿瘤部位、肿瘤TNM分期、分化程度、肿瘤直径患者的MMR蛋白表达缺失具有明显差异（P＜0.05）；不同CRC家族史、远处转移、淋巴结转移、组织学类型、肉眼分型患者的MMR蛋白表达缺失无明显差异（P＞0.05）。见表1。

表1 MMR蛋白表达与CRC临床病理特征的关系 （例（%））

2.3 MMR蛋白表达与CRC临床病理特征的关系分析

经χ2检验Phi和Cramer's ν系数分析显示，MM蛋白表达与肿瘤部位、肿瘤TNM分期、分化程度、肿瘤直径呈正相关（P＜0.05）。见表2。

表2 MMR蛋白表达与CRC临床病理特征的关系分析

3 讨论

MMR系统能够精准识别DNA复制过程中出现的碱基错配，维持人类基因库完整与稳定；MMR系统由一系列修复DNA碱基错配的酶分子组成，其中包括MLH1、PMS2、MSH2、MSH6，但MLH1、PMS2、MSH2、MSH6中任意一种蛋白缺失均会引起MMR功能缺陷，导致细胞自发突变率增加，加速CRC发生、发展过程[2]。因此，分析MMR蛋白在CRC患者中的表达情况，探讨MMR蛋白与病理特征的关系，对临床评估CRC患者病情进展具有至关重要的意义。

本研究发现，不同肿瘤部位、肿瘤TNM分期、分化程度、肿瘤直径患者MMR蛋白表达缺失比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；且进一步经χ2检验Phi和Cramer's ν系数分析显示，CRC患者MM蛋白表达与肿瘤部位、肿瘤TNM分期、分化程度、肿瘤呈正相关。

其原因可能是：①肿瘤部位：MMR蛋白失活是引起微卫星不稳定的重要原因，而右半结肠CRC主要由微卫星路径引起肿瘤相关基因突变，左半结肠CRC则是通过染色体不稳定路径引起抑癌基因突变引起，因此肿瘤部位与MMR蛋白表达缺失有关[5]。晋龙[6]等研究结果指出，CRC患者MMR蛋白缺失与肿瘤部位相关，位于右半结肠的CRC患者MMR蛋白缺失率明显高于左半结肠患者。本研究结果与之相似。②肿瘤TNM分期：MMR蛋白表达缺失，可引起肿瘤细胞过度增长，肿瘤往往浸润程度深，淋巴结转移率及远端转移率高[7]。因此，CRC患者MMR蛋白表达与TNM分期密切相关。③分化程度：MMR蛋白缺失可引起MMR系统功能缺陷，诱发细胞基因突变，且MMR蛋白缺失越多，肿瘤恶性程度越高，分化越差[8]。李宇阳[9]等研究结果指出，肿瘤分化程度影响CRC中MLH1、PMS2、MSH2蛋白的表达，且分化程度低的肿瘤，MLH1、PMS2蛋白表达缺失更为常见。本研究与上述结论相一致。④肿瘤直径：MMR蛋白表达缺失可引起肿瘤细胞恶性增长，诱发肿瘤直径增大，侵犯其他脏器或穿破脏层腹膜，向远端转移，与宋蒨[10]等研究结论一致。

此外，本研究还存在以下几点局限：①本研究纳入CRC患者样本量偏小，可能会与其他研究存在一定偏差；②样本人群不同环境因素可对会对研究结果产生一定影响；③本研究以4种MMR蛋白中任意1种及1种以上蛋白阴性定义为dMMR，但并未对每种蛋白缺失情况与病理特征间的关系进行分析；④目前研究为观察性研究，只能证明CRC患者MMR蛋白表达与病理特征相关，但关于MMR蛋白缺失与肿瘤TNM分期、分化程度等特征之间的具体机制尚未明确。

综上所述，CRC患者MMR蛋白缺失与肿瘤部位、分化程度、肿瘤直径、肿瘤TNM分期呈正相关，检测MMR蛋白缺失情况能够为临床选择治疗方案提供方向。