浅析牛结核病诊断方法及在疫病净化中的应用

刘志勇，李春芳，董长兴，李旭颖

（1.唐山市动物疫病预防控制中心，河北 唐山 063000；2.唐山市丰南区动物疫病预防控制中心，河北 唐山 063300）

牛分支杆菌是引起牛结核病的主要细菌，结核病也是我国二类动物疫病之一，是人畜共患的疾病，大面积发生会给养殖户带来严重的经济损失，河北省唐山市牛结核病的发生率虽然不高，但仍然不能忽视牛结核病的防控[1]。

1 病原及流行病学特点

1.1 病原特点

牛结核病主要由牛分枝杆菌引起，牛分枝杆菌的结构为细长弯曲杆菌，没有鞭毛，不喜运动，生长需要大量的营养，在生长的各个周期会产生不同的蛋白质，对热量的抵抗性较差，高温即可灭活，但对一般消毒剂的抗性较好，对酒精格外敏感。

1.2 流行病学特点

牛结核病是一种人畜共患疾病，一年四季均可发生，大部分的哺乳动物都容易感染，在牛种类中，奶牛易感染牛结核病，黄牛和水牛次之，病变的动物为主要的传染源，通过飞沫、唾液、水源、饲料等途径对其他牛进行感染，而且大量的数据表明，牛养殖户比其他人更容易患有结核病，不活动的牛比经常活动的牛更容易患有结核病。结核病种类多样，其中包括肺结核、肠结核、脑结核、淋巴结核等，一旦结核病入侵牛体，就容易在牛群中扩散，所以一旦发现阳性结核病，就要及时进行疫病净化[2]。

2 牛结核病临床病状

2.1 肺结核

患上肺结核的牛，在初期容易表现出疲惫的状态，伴随着干咳现象，肺结核的潜伏周期根据牛的体质长短不一，病情会随着天气寒冷而加重，牛呼吸时伴有严重的气喘现象，且呼吸困难，心肺部有摩擦的声音，患病牛体逐渐消瘦。

2.2 肠结核

患有肠结核的病牛，肠壁细胞遭到破坏，肠道功能受损，食欲下降，消化系统也受到一定程度的影响，日渐消瘦。

2.3 乳房结核

乳房结核一般发生在母牛身上，患病牛体乳房出现炎症，乳房肿大或者凹凸不平，乳房不对称，乳房变形，母牛产奶会受到影响，病情严重时甚至无法产奶。

2.4 脑结核

患有脑结核的牛，脑细胞会受到一定程度的损坏，过于兴奋，容易受到惊吓，严重时牛四肢无法控制，不能站立，后期会出现呼吸急促、昏迷、痉挛等现象。

2.5 淋巴结核

患有淋巴结核的病牛，牛体内各个淋巴均有结核病变，患病现象随着感染的淋巴不同，患病现象也有所差别[3]。

3 诊断方法

3.1 临床诊断

牛结核病的初期特征并不明显，仅通过肉眼观察牛的日常生活状态难以判断牛是否患病，但牛结核病中期至后期，患病牛会食欲不振、呼吸不畅、身体逐渐消瘦并伴有咳嗽的症状，可判定牛患有结核病。

3.2 细菌学诊断方法

细菌学的检测方法主要包括涂片染色法、细菌培养法等，涂片染色法一般采用荧光抗酸染色法检查抗酸性杆菌，需要在无菌的环境下，解剖明显的病变器官并进行涂片，此种检测方法只能检测出抗酸杆菌，不能准确地对结核分支杆菌进行检测，无法准确判断牛是否患有结核病；细菌培养法可以有效地判断牛是否患有结核病，通过利用牛分支杆菌的特点，来对细菌进行培养，在6周左右即可获取判断信息，但标本采集和样品处理都有相应的要求，培养基的选择也会影响结核病的判断时间，传统的固体培养基制作简单、价格低廉，但培养时间过长，而液体培养基中还有复杂的营养成分，由于添加了细菌抑制剂，在培养的过程中，污染率要比固体培养基更加的优秀，但检测的成本较高，牛分枝杆菌在培养过程中耗时长、阳性率低，所以细菌学检测牛是否患有结核病的方法不适合推广，效率低下，且容易造成牛结核病的扩散。

3.3 迟发型过敏反应

过敏反应试验是全世界通用的检测方法，且该方法已经使用了100余年，至今仍是牛结核病的主要检测方法。初期牛结核病的诊断采用结核菌素点眼的方法，根据牛眼充血程度进行结核病阴阳性判断，但是结核菌素点眼的办法对于牛体刺激较大，逐渐被皮试的方法取代。皮试的方法更加高效，且对牛的刺激较小，在感染初期，细胞免疫水平更容易被检测到。皮试方法可分为尾褶结核菌素皮内检测、颈部单一结核菌素皮内试验以及比较结核菌素皮内试验，此3种方法中尾褶结核菌素皮内检测最为高效。在结核分支杆菌污染严重的区域，皮试方法最合适，此方法便于基层推广、成本低、操作简单，但缺点也很明显，特异性差，牛感染后4周左右容易出现假阴性结果，且需要间隔72 h后才能再次进行提示，容易增加工作量，不适用于所有易感动物的检测。

3.4 干扰素诊断

干扰素检测是牛结核病检测的补充试验，需要先采集抗凝全血，然后利用结核菌素平行刺激外周血淋巴细胞，由于牛体内的免疫系统受到刺激，会释放大量的生物物质，通过对释放的生物物质含量来进行判断牛是否患有结核病，干扰素检测一般应用在牛结核病的初期检测，但是干扰素检测与结核菌素皮内变态反应试验结果不一致，高速检测过于客观，但缺点是检测成本高、操作复杂、基层人员无法使用，通常被应用在实验室检测[4]。

3.5 抗体检测

ELISA抗体检测方法是唯一的一种血清检验方法，可以用来辅助迟发型过敏反应试验的检测。牛分枝杆菌生长缓慢，在生长过程中需要大量的营养，各个阶段也会分泌不同的蛋白质，根据蛋白质不同用于血清反应，合理地利用ELISA抗体检测方法，可以更高效地判断牛是否患有结核病，进一步发现并淘汰结核牛，保障牛群安全。

3.6 分子生物学检测

分子生物学技术的发展，也为牛结核病的探测提供了技术支持，利用PCR、荧光定量以及核酸探针等方法，对牛分枝杆菌进行拷贝，以该序列设计引物扩增序列，可以高效迅速地检测牛类是否患病，同样，分子生物学技术可作为牛分支杆菌和结核分支杆菌的快速检测调查工具，进一步提高检测效率。

4 结核病预防措施

4.1 定期检查

对牛群定期进行检查，每年至少开展2次检疫活动，制定科学合理的检测方案，加大检测力度，按照养殖场的实际情况来制定发展和应对措施。一旦在牛群中发现了患有结核病的牛，要立即对牛群进行消毒，将病牛进行隔离或者扑杀，对尸体进行无害化处理，并将所有区域进行二次消毒，避免其他健康的牛接触到牛分枝杆菌，消毒和检疫的方法要符合唐山市相关部门的要求。

4.2 接种疫苗

提前接种结核病疫苗，可以极大地降低牛群患病的概率，近年来，我国的养殖户对牛群的预防工作越来越重视，注射疫苗已经成为了普遍现象，通过在牛体内注射疫苗，使其产生抗体，可以更好地对抗外界的病毒侵扰，减少发生牛结核病的概率。

4.3 保持养殖场卫生

保持通风并定期对栏舍进行清理，栏舍清理应该包括粪便清理、水池清理、饲料清理等，要将每一处细节全部打扫干净，避免环境受到污染，也避免恶劣的环境为细菌提供营养，导致牛的品质受到影响。

4.4 对污染牛群进行疫病净化

除了每年定期对牛群进行检疫，对检测反应呈阳性的牛群要进行疫病净化，将可疑的阳性牛进行隔离，每隔15 d对牛群进行一次检查，经过连续3次检测，牛群中没有任何阳性和可疑病例，则疫病净化完成。

4.5 培养健康的牛犊

健康优质的牛犊是隔离疾病的重要措施，对刚分娩的牛犊进行呵护和培育，还要对其进行消毒，将其全身擦干之后，送入预防室，用健康的母乳进行喂养，在培养的过程当中要连续3次进行检疫，检测结果都为阴性，才可以将牛犊放入健康的牛群中饲养。

5 疫病净化技术分析

5.1 疫病净化概念

疫病净化是在特定区域针对某种动物疫情有计划地消灭过程，达到该区域内无任何病例。疫病净化要消灭传染源，消灭病原体。

5.2 疫病净化过程

疫病净化通常包括以下几个步骤：首先，疫病普查，对感染牛群进行普查，是疫病净化的最基本部分，也是调查工作的重要内容，要对所有牛群进行直接调查，并对结果和数据进行检测，对检测的数据进行详细记录，如果记录的数量并不是特别大，可以对该群体进行实验室诊断，检查疾病在该群体中的传染情况，对患病个体及时进行隔离或捕杀；其次，目标群检测，一次感染群清理并不能做到疫病净化，在该区域内还有可能存在其他病原，处于感染初期的动物也并没有发病现象，所以第一次普查可能会出现疏漏，因此要进行疫病净化的目标群要多次的监测，主要的监测方法是血清监测，对目标群中一定数量的动物进行抽样检查，将患病的个体排除，然后多次进行同样的操作，将疑似病例进行隔离，改善目标群体居住环境的卫生条件，接着进行持续监测，为避免疫情反复，还要对目标群体进行长时间的监测，我国的监测标准一般长达2年，主要的监测方法也是以实验室监测为主，但在此过程中，要符合国家制定的相关标准；最后才算疫病净化整个过程完成，才能真正地做到清除疫病[5]。

5.3 疫病净化的标准

疫病净化的标准是目标群体全部检测合格，没有任何疑似或者患病病例，目标群体的养殖环境也没有任何病原体，则此次疫病进化符合标准。

5.4 疫病净化的步骤

疫病进化的方法步骤主要分为以下几个：第一，确定净化区域和范围，净化区域的确定原则要根据疫病的影响、资金的支持能力、动物的养殖情况来进行确定，可以是一个地区、一个养殖场，也可以是一片草原或者几个养殖场；第二，净化动物和病种确定，净化的动物根据患病情况来确定，净化的病种也要根据当地对牛群危害较大的动物疫病进行净化；第三，筛选检测方法，检测方法要根据动物的种类、动物的数量、检测的区域来确定，尽量选择检测时间短，检测效果好的检测方法；第四，检测频率，根据不同动物疫情和不同地区感染状况不一样，所进行的检测频率也不同，对于严重的区域进行多次检测，对于其他症状较轻的区域可以减少检测次数；第五，阳性动物的处理，一般对患有传染病的动物进行灭杀，对于疑似的动物进行隔离，尸体要进行无害化处理；第六，进化结果评价，上述全部步骤完成之后，没有疑似病例，也没有阳性病例，则此次净化工作完成。

5.5 疫病净化的辅助工作

为了更好地进行疫病净化工作，还应做到以下几点：第一，样品的采集，检测样品的采集是净化工作的重要内容，样品的采集时机、运送是否及时和样品的检验数据是否准确与疫病净化工作息息相关；第二，动物检疫法，疫病净化要符合《中华人民共和国动物检疫法》，只有通过监督机构确保本次活动可以进行，才可以进行疫病净化；第三，净化动物疫病免疫，对实施检测进化的动物群体，在开展进化的过程中，要制定动物免疫程序，确保净化效果达到预期目标；第四，对净化动物的管理，对净化后的动物还要持续进行监测，为防止疫病反复，应该积极做好各项安全防护措施，有效防止动物疫病扩散。

6 结语

综上所述，牛结核病是威胁牛类的主要疾病，唐山市大部分地区对牛结核病的检疫重视程度不高，方法过于传统，容易导致牛结核病的扩散，在今后的牛类养殖业中，要注重科学养殖，对牛结核病进行预防和治疗，建立科学的管理制度，构建合理的管理模式，采用先进的技术手段，提高牛结核病的净化支持，保障牛肉绿色无害，高品质，也保障养殖户的经济不受损失。