老年前期脑白质高信号患者髓过氧化物酶的表达

冯彩霞 王增帅 高丽芝 杨利清

1.内蒙古科技大学包头医学院第二附属医院神经内科，内蒙古 包头 014030；

2.内蒙古科技大学包头医学院第二附属医院心血管内科，内蒙古 包头 014030

脑白质高信号（white matter hyperintensities，WMH）的患者早期常无临床症状，后期可出现认知障碍、步态障碍等。WMH 发生的具体机制尚不明确，慢性低灌注、血脑屏障通透性增加、血管内皮功能障碍、炎症反应可能是其发病机制[1]。WMH 与大脑的退行性改变、年龄、脑血管的狭窄及脑灌注下降相关[2]。年龄每增加10 岁，WMH 的发生率可升高2 ～3 倍，80 岁以上的老年人90%存在WMH[2]。髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）可通过氧化应激修饰脂蛋白、降低一氧化氮生物利用度、诱导内皮功能障碍、损伤血管反应性以及增加斑块易损性，参与动脉粥样硬化的病理生理过程[3]，是卒中的炎症标志物[4]。但关于MPO 与脑白质高信号的相关性尚未阐明。本研究旨在探讨MPO与老年前期、无大动脉狭窄的脑白质高信号患者的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019 年9 月到2021 年1 月包头医学院第二附属医院神经内科门诊及住院部的108 例老年前期WMH 患者作为WMH 组，男52 例，女56 例，年龄43 ～59 岁，平均（51.09±4.26）岁。51 例健康体检者为对照组，男27 例，女24 例，年龄42 ～59 岁，平均（50.26±4.13）岁。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P＞ 0.05），具有可比性。WMH严重程度采用Fazekas 评分标准[5]，脑室周围和深层白质两个部分总分0 ～6 分，1 ～2 分轻度，3 ～4 分中度，5 ～6 分重度。轻度组38 例、中度组36 例、重度组34 例。WMH 组入选标准：符合2015 年中国脑小血管病诊治共识中脑白质高信号的影像诊断标准[5-6]的40 ～59 岁患者。排除标准：①3 个月内新发脑梗死者；②影像学检查提示颅内血管狭窄、颈部血管狭窄≥50%者；③感染、免疫、代谢、中毒、脑积水等其他病因导致的脑白质病变者；④有肝肾严重器质性疾病者。本研究获得包头医学院第二附属医院医学伦理委员会批准（2019 年科伦审第LW-004）。

1.2 方法

MPO 蛋白检测：按ELISA 试剂盒步骤严格操作，测定血清中MPO 蛋白表达量。MPO mRNA检测：按白细胞分离液（天津市灏洋生物制品科技有限公司）说明书步骤提取白细胞，-80 ℃保存。用TRIzol 试 剂 盒（日 本TaKaRa 公 司）提 取总RNA，反转录试剂盒按总RNA 1μg 为模板将RNA 反转录为cDNA，以cDNA 为模板进行PCR 扩增（试剂盒由美国Promega 北京分公司生产），检测MPO 基因的相对表达量。上游引物序列：5’-TACACTTCCTGCATTGAACCTGGCT-3’，下游引物序列：5’-CCCAGATATACCCCTCACTGCTGC-3’。

1.3 统计学方法

采用SPSS 21.0 统计学软件分析，符合正态分布的计量资料用均数±标准差（±s）表示，两组间比较行t检验，三组间比较采用方差分析，三组均数间的多重比较采用最小显著差异t检验，计数资料用[n（%）]表示，行χ2检验，相关性分析采用Pearson分析，采用ROC 曲线分析MPO 诊断WMH 的临床效能，特异度=真阴性例数/（真阴性+假阳性）例数×100%；敏感度=真阳性例数/（真阳性+假阴性）例数×100%，P＜ 0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者MPOmRNA、MPO蛋白水平比较

WMH 组MPO mRNA、MPO 蛋白水平高于对照组，差异有统计学意义（P＜ 0.05），见表1。

表1 两组患者MPO mRNA、MPO蛋白水平比较（x ± s）

2.2 WMH严重程度影响因素分析

轻度、中度、重度组之间MPO mRNA、MPO 蛋白表达量的差异有统计学意义（P＜ 0.05）。重度组MPO mRNA 表达量分别高于中度组（t=4.622，P=0.000）和 轻 度 组（t=6.816，P=0.000）；重 度组MPO 蛋白表达量分别高于中度组（t=3.093，P=0.003）和 轻 度 组（t=8.007，P=0.000），中 度 组MPO 蛋白表达量高于轻度组（t=4.946，P=0.000），差异有统计学意义（P＜ 0.05），见表2。

表2 WMH严重程度影响因素分析（x ± s）

2.3 MPOmRNA和MPO蛋白表达量的相关性分析及MPO蛋白的ROC曲线

Pearson 分析显示MPO mRNA 和MPO 蛋白表达量呈正相关（r=0.637，P=0.000）。血清MPO 蛋白诊断WMH 的曲线下面积为0.680，最佳截断值为72.29 pg/ml 时，对WMH 诊断的敏感度和特异度分别为60.20%和70.60%，见图1。

图1 MPO 的ROC 曲线

3 讨论

WMH 的病理改变包括髓鞘脱失、少突胶质细胞受损、星形胶质细胞增殖以及血管周围间隙扩大等[7-8]。WMH 的传统危险因素（包括年龄、常见的血管危险因素包括原发性高血压、糖尿病、高同型半胱氨酸、高纤维蛋白原、动脉粥样硬化、遗传易感性等）[2]。非传统危险因素可能有偏头痛、阻塞性睡眠呼吸暂停、晕厥等[9]。WMH 可以是脑小血管病的典型影像学表现之一，也可以单独存在，单纯的轻度WMH 不会出现临床症状[1]。MPO 与动脉粥样硬化及大动脉粥样硬化型脑梗死关系紧密[4]。随着年龄的增长，颅内大血管、小血管、穿支动脉病变往往伴随发生，且动脉粥样硬化的发生率亦逐年升高。为减少大动脉粥样硬化及年龄对研究的干扰，本研究选择了老年前期、无大动脉狭窄的WMH 患者作为研究对象，发现WMH 患者MPO mRNA 及蛋白表达水平均较正常对照组增高，且WMH 重度组MPO mRNA 及蛋白表达量均高于轻度组。血清MPO 蛋白的ROC 曲线发现，当MPO 蛋白最佳截断值为72.29 pg/ml 时，对WMH 诊断的敏感度和特异度分别为60.20% 和70.60%。MPO 为WMH 的发生及治疗提供了新的靶点。

WMH 发生的关键环节之一是作为中枢神经系统免疫活性细胞的小胶质细胞的激活[8]，氧化应激[1]、炎症[1]均参与了WMH 的发生。MPO 是由两条重链（55 ～64 kD）和两条轻链（10 ～15 kD）组成，主要存在于单核细胞及中性粒细胞中，部分见于小胶质细胞和巨噬细胞中[10]。MPO 是连接炎症反应与氧化应激的酶[11]，可催化氧化反应，产生大量具有细胞毒性的活性氧，降低一氧化氮生物利用度[12]、损害血管内皮功能[13]，造成组织氧化损伤，进而引起髓鞘破坏和神经传导受损。Etwehi 等[12]提出，MPO 可以通过上调蛋白磷酸酶2A 的表达降低内皮细胞一氧化氮合酶的磷酸化，减少一氧化氮的生成，一氧化氮有引起邻近血管平滑肌细胞舒张、扩血管的作用[14-15]。推测MPO 通过氧化应激、炎症参与了WMH 的发生。

本研究发现，老年前期无大动脉狭窄的WMH患者，MPO mRNA 及蛋白表达量均增加，MPO 参与了WMH 的发生，且与WMH 严重程度相关。本研究不足之处，研究对象存在选择偏倚，需设计严谨的大样本的临床研究加以验证。