比色分析法在食品中赭曲霉毒素A中的应用研究

齐冬琴

（乌鲁木齐海关技术中心，新疆乌鲁木齐 830063）

赭曲霉毒素（Ochratoxins，OT）主要是由曲霉属以及青霉属等多种不同类型的有毒真菌集合在一起产生的具有次级空间代谢性质的全新产物，这种产物主要由7种组成结构比较相近的化合物构成。其中，赭曲霉毒素A（Ochratoxin A，OTA）所具有的毒性最高，分布广泛，属于潜在致癌物质。因此，无论农产品加工与否，均会受到OTA的 污染。

1 赭曲霉毒素A的毒性及危害

OTA本身具有分布十分广泛的特征，人体摄入该物质的方式主要有两种：人体直接摄入被OTA污染的食物；人体摄入的作物本身已经蓄积一定量的OTA。其中，因为靶器官属于绝大部分动物的肾脏或肝脏，在人体摄入此类物质后，会对肾脏器官形成较为严重的负面影响，当人体直接摄入的剂量过大时，可能会造成人体发生肝脏病变问题，甚至还会提高自身巴尔干地方性肾病的发病概率，造成极为严重的后果。已有学者通过试验证明，OTA本身便具备促进人体星形胶质细胞增殖线粒体的作用，借此诱发人体出现慢性肾脏病症。

2 常规检测方法分析

2.1 国标检测方法概述

为保障人们的身体健康与生命安全，我国相关部门针对赭曲霉毒素A制定了诸多不同级别的检测标准，并对相关限量作出明确规定。《食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）第4项内容中明确规定OTA在谷物或者谷物作物碾磨加工食用产品、豆类食用产品中的限量标准，最高不得超过5.0 μg·kg-1；同时，《食品安全国家标准 食品中赭曲霉毒素A的测定》 （GB 5009.96—2016）[1]又针对市场中的各类食品和食用型农产品中含有的OTA比例作出明确规定，并分别设定5种检测方法，具体检出限信息与定量限信息如表1所示。

表1 GB 5009.96—2016中赭曲霉毒素A的检测方法

2.2 色谱法

色谱法是一种比较常见的检测方法，薄层色谱法（Thin Layer Chromatography，TLC）是最早被应用在真菌毒素类型食品检测工作中的检测方法，一般情况下会将其与其他常规技术联合使用。在具体检测环节中，能够通过利用其基本特征，确保化学显色测试结果的准确性，同时还可以保证板上光谱图检测试验与色谱科学性，以此为基础，保留试验规律，再对样品执行分离检测方式，配合定性检测方式和定量分析检测方式即可得出准确结果。

在我国食品安全检测领域中，有学者用基于免疫亲和净化特点的薄层色谱法，对样品生咖啡中含有的OTA比例进行检测，最终检测限结果为0.5 μg·kg-1，这种检测方式具有灵敏度高、检测结果准确、操作简便、检测试剂价格低廉以及食品样品易处理等优势，应用范围十分广泛。但是，这种检测方法本身所需应用的试剂种类过多，且检测周期相对较长，再加上结果重现性不足，不能达成自动化检测目标，因此目前使用频率较低。说明TLC检测法在检测真菌毒素方面的技术发展开始进入瓶颈阶段，目前还未取得重大突破。

2.3 仪器分析检测法概述

2.3.1 高效液相色谱法

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种应用十分广泛的检测方法，该方法在检测赭曲霉毒素A含量时，能够借助多种不同形式的检测手段，有针对性地选择出不同级别要求标准的萃取效果，并对净化程度信息、柱前、柱后环节检测出的化学衍生系统结果进行对比，从而提升对各种真菌毒素的分离效果。检测OTA时，一般会应用到荧光检测器设备对其毒素含量进行检测。HPLC检测法能够实现对待检测物的快速检测，尤其是在玉米和小麦检测工作中，该方法对玉米中含有的赤霉烯酮及赭曲霉毒素A的检测效果极佳，同时还具有较高的回收率，检测结果的精密度较高。梁桂娟等[3]以上述内容为基础，采用HPLC-FLD检测法对市售大米作物进行检测，检测目标为样品中OTA含量，结果表明该方法能够实现对样品的快速检测，且检测结果准确性 较高。

采用HPLC检测法对样品进行检测的过程中，要保证净化柱检测方法的实际应用效果，确保检测过程的合理性，需借助抗原抗体免疫能力与反应原理方可顺利完成检测任务，同时还需要对单克隆抗体进行选择性吸附处理，继而提取出目标液体中含有的真菌毒素，然后对其进行分离净化处理，这种检测和处理方式属于常用手段，均属于前处理环节的重要内容。与此同时，林涛等[2]建立了可以自动进样检测的新型免疫亲和在线净化处理的检测方式，该方法能够对检测物中的HPLC含量做出同步分析，并保证其最终检测结果的准确性。在这样的情况下，样品实际净化效果与最终检测结果均可得到有效保证，且实际检测效率更高[3]。王健等[4]以真菌毒素类型为核心研究对象，选择了更为合适的填料类型，并采取自制复合方式的免疫亲和柱，发现优化后的方法能够规避抗体大量出现的问题，杜绝检测过程中的浪费问题，同时还可以摒弃无关物质影响因素，确保最终检测结果的准确性，有效消除检测环节中的意外干扰，使检测结果具有代表性和针对性，最终检出限为0.02 μg·kg-1。但是，使用该方法对待检测样品进行前处理的过程中，需要消耗的时间较长、成本较高，因此这种检测方法并不适用于对大批量样品的检测。

2.3.2 液相色谱-质谱联用法

液相-质谱联用法（Liquid Chromatograph Mass Spectrometer，LC-MS/MS）是能够将液相色谱检测方式与质谱检测方式加以联合使用的新型检测手段，该检测方法可以进一步完成对检测物的定性，保证最终定量分析结果的准确性，因此广泛应用于食品中OTA的检测[4]。程杰等[5]通过对待检测物进行适度稀释处理，控制检测物的干扰成分浓度，以规避后续基质效应带来的负面影响。邹沫君等[6]建立了一种以氨基固相为基础的萃取方式，即HPLCMS/MS法，并将其应用在检测粮食中OTA含量中，这种检测方式具有操控简便、样品回收率高以及检测灵敏度高等优势。在上述内容基础上，李克等[7]对QuEChERS进行合理优化，并为此建立了一种能够对3种不同类型的赭曲霉毒素（OTA、OTB和OTC）进行分别检测的HPLC-MS/MS法，结果发现该检测方式具有操作灵敏度较高、检测速度快等 优点。

2.4 比色法适配体传感器

以比色法为基础创建的传感器是一种利用光学传感器进行检测的方式，同时也是当下最常见的一种检测手段，已被广泛应用于多个领域。学者吴昊等[8]使用适配体传感器对被测物进行检测时，专门建立了新的检测手段，他们将酶包埋脂质体设定为检测基础，制成相应的比色适体传感器。实验结果表明该设备能够在玉米等类型的农作物的检测中发挥出良好效果，且在检测农作物中OTA时，不需要使用过多的复杂仪器设备。

3 结语

综上所述，对于食品安全检测工作而言，可以利用适配体作为一种特异性识别分子标志，进而研发出一种生物传感器，此时OTA检测结果的特异性、稳定性和便捷性均得到充分保障，在面对OTA现场检测任务提出的快速检测要求时，具有非常出色的检测能力。但是，这种比色检测法的灵敏度依旧有所不足，不能满足市场发展的实际检测要求。即使现有部分食物检测技术的应用效果较好，但依旧存在各种不同形式的问题和不足，因此需要相关人员不断完善、更新相关检测技术，研发出更多OTA检测手段，以保障人们的身体健康。