多形性腺瘤基因样因子2 在上皮性卵巢癌组织中的表达及与预后的关系研究

张青松，张阳，曹迎九，张金伟

上皮性卵巢癌是一类起源于卵巢上皮表皮或输卵管等组织的妇科恶性肿瘤，组织学类型多样且年龄区间分布广泛，近些年在妇科恶性肿瘤发病率中稳居首位，严重威胁患者的生命安全［1-2］。目前临床实践中多以手术联合术后规范化化疗方案为主要治疗方针，通过手术切除卵巢周围病变组织同时辅以化疗抑制肿瘤细胞增殖，提高患者的疾病控制率，延长生存期［3-4］。但近些年研究显示，部分上皮性卵巢癌患者治疗结局差强人意，多数患者均出现复发或不同程度的肿瘤细胞转移和侵袭，患者预后不佳［5-9］。因此，提高上皮性卵巢癌患者术后肿瘤转移或复发的早期预测水平以采取积极干预措施改善患者预后，成为学者不断探索的重点。多形性腺瘤基因样因子2（PLAGL2）是癌蛋白的一种，可通过介导胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-Ⅱ）等途径促进肿瘤细胞完成有丝分裂，在反映肿瘤细胞增殖活性领域具有积极的研究价值［10］。但目前针对PLAGL2 在上皮性卵巢癌组织中的表达及与预后的关系研究文献有限，尚无统一共识或指南。基于此研究现状，为进一步推动上皮性卵巢癌的研究进展，现选取106 例上皮性卵巢癌患者进行研究，以分析PLAGL2 在上皮性卵巢癌组织中的表达及与预后的关系，为后续临床研究提供数据参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取南京医科大学附属无锡人民医院妇科2014 年7 月至2020 年1 月收治的106 例上皮性卵巢癌患者作为研究对象，年龄29～58 岁［（47.96 ± 5.31）岁］。纳入标准：（1）均符合《2012NCCN 卵巢癌包括输卵管癌和原发腹膜癌临床实践指南（第二版）》［11］中上皮性卵巢癌的临床诊断标准，且病理活检确诊；（2）年龄＞18 岁；（3）均已接受肿瘤细胞减灭术并保留上皮性卵巢癌组织及少量癌旁正常组织；（4）临床资料完整且治疗依从性良好；（5）患者或家属签订知情同意书。排除标准：（1）合并其他妇科恶性肿瘤；（2）术前接受化疗、放疗或生物靶向等标准化治疗者；（3）有溶栓术或心脏手术既往史；（4）孕期或哺乳期女性；（5）肝、肾等重要器官功能障碍；（6）预计生存期＜6 个月。

1.2 方法 （1）人口学资料及病历资料统计：于所有受试者入组24 h 内收集并整理基础资料，包括年龄、体重指数（BMI）、孕次、基础疾病（糖尿病、高血压等）、吸烟史、饮酒史、国际妇产科联合会病理分期（FIGO）、病理类型（浆液性癌、子宫内膜样癌、黏液性癌、透明细胞癌）、病理分级（低分化、高或中分化）、术后残余病灶直径、术后化疗周期（术后均予以紫杉醇+顺铂化疗方案维持治疗）等。（2）上皮性卵巢癌组织及癌旁正常组织中PLAGL2 表达检测方法［12］：①常规免疫组化法对组织样本中PLAGL2表达检测。取标本，中性甲醛（10%）固定、石蜡包埋后切片厚度4 μm，脱蜡、石化。加入0.01 mol/L 枸橼酸钠缓冲液（pH=6.0）煮沸20 min 热修复抗原，室温放置冷却后，向切片滴加3% 过氧化氢（H2O2）适量，室温孵育10 min。磷酸缓冲液（PBS）冲洗切片3 次，5 min/次，后加入1%牛血清封闭，室温孵育25 min。将1∶100 稀释兔抗人PLAGL2 单克隆抗体一抗滴入，恒温4 ℃孵育过夜。PBS 冲洗切片3 次，5 min/次，后将1∶100 稀释二抗加入，避光室温孵育60 min。PBS 冲洗切片3 次，5 min/次，后二氨基联茜胺（DBA）染色、苏木素复染，不同浓度酒精梯度脱水。置于二甲苯中并以中性树胶封片，显微镜观察染色情况。②双盲阅片，PBS 代一抗做阴性对照。染色强度评分：强染色3 分、中度染色2 分、弱染色1 分、无染色0 分；阳性细胞比例评分（着色细胞比例评分）：4 分（＞75%）、3 分（51%～75%）、2 分（26%～50%）、1 分（5%～25%）、0 分（＜5%）。染色指数（SI=染色强度评分×阳性细胞比例评分）≤1 分为阴性、2～12 分为阳性。（3）预后评估及分组：2 组患者术后均随访12 个月，随访截止日期2022 年1 月1 日，其间患者死亡为预后较差，记为预后不佳组；生存为预后较好，记为预后良好组。

1.3 统计学处理 采用SPSS 17.0 软件进行数据分析，以百分比（%）表示计数资料，行χ2检验。COX回归分析影响上皮性卵巢癌患者预后的因素。以受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）评估PLAGL2 对上皮性卵巢癌患者预后的预测价值。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 预后结局 随访12 个月内，106 例上皮性卵巢癌患者中死亡19 例，生存率82.08%。

2.2 上皮性卵巢癌组织及癌旁正常组织中PLAGL2 表达比较 106 例上皮性卵巢癌组织中PLAGL2 阳性表达46 例，阳性表达率43.40%。106 例卵巢癌旁正常组织中PLAGL2 阳性表达25 例，阳性表达率23.58%。2 组PLAGL2 阳性表达率比较差异有统计学意义，卵巢癌组织中PLAGL2 阳性表达率高于癌旁正常组织（χ2=9.339，P＜0.05）。

2.3 影响上皮性卵巢癌患者预后的单因素分析 分析结果显示，预后不佳组年龄46～58 岁、FIGO 分期Ⅱ～Ⅳ期、病理分级低分化、术后残余病灶直径＞1 cm 及PLAGL2 阳性表达所占比例均高于预后良好组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 影响上皮性卵巢癌患者预后的单因素分析（例）

2.4 影响上皮性卵巢癌患者预后的多因素分析 变量赋值见表2。COX 多因素回归分析结果显示，年龄46～58 岁、FIGO 分期Ⅲ～Ⅳ期、病理分级低分化、术后残余病灶直径＞1 cm 及PLAGL2 阳性表达均为上皮性卵巢癌患者预后的影响因素（P＜0.05）。见表3。

表2 自变量赋值情况

表3 影响上皮性卵巢癌患者预后的COX 回归分析

2.5 上皮性卵巢癌组织中PLAGL2 表达对上皮性卵巢癌患者预后的ROC 预测价值 ROC 分析显示，上皮性卵巢癌组织中PLAGL2 表达对上皮性卵巢癌患者预后的ROC 的灵敏度、特异度和AUC 分别为89.47%、66.67%、0.781（P＜0.05）。

3 讨论

上皮性卵巢癌作为临床中常见的妇科恶性肿瘤，发病率高且致病机制复发，既往研究将其发病机制归于2 类学说，有学者认为卵巢表面上皮内陷形成皮质包涵囊肿，并伴随周围微环境变化诱导表面上皮发生“化生性改变”，转化为具有苗勒表型的上皮，继而诱发恶性病变。另有学者认为输卵管及卵巢旁的第二苗勒系统上皮优先形成小囊肿，逐渐推挤占据卵巢组织，诱发组织学类型的病变［13-14］。目前临床治疗中通过手术、化疗等治疗方案虽可在一定程度上抑制患者病情进展，但由于缺乏特效治愈方案，复发率、转移率及死亡率均较高，长期预后不佳。因此分析影响上皮性卵巢癌患者预后的危险因素，同时寻找高敏性或特异性肿瘤标志物，有助于积极制定早期干预措施以改善患者预后，一直是近些年临床学者亟需突破的瓶颈。

PLAGL2 癌蛋白由496 个氨基酸残基、氨基末端区域的6 个C2H2型锌指结构域和富含脯氨酸和丝氨酸的羧基末端组成，且在几乎所有成人和胎儿人体组织中普遍表达，其致癌能力可能是通过激活IGF-Ⅱ促有丝分裂途径来介导的，且与低氧诱导因子-1（HIF-1）相关联的PLAGL2 也可能具有诱导凋亡的作用，因为它可以激活Nip3 启动子并在成纤维细胞和神经母细胞瘤细胞中诱导转录，导致正常细胞凋亡。因此本研究分析认为，上皮性卵巢癌组织中PLAGL2 表达与患者预后关系密切［15-17］。本研究结果显示，卵巢癌组织中PLAGL2 阳性表达率高于癌旁正常组织，提示上皮性卵巢癌患者癌组织中PLAGL2 阳性表达率更高。本研究COX 多因素回归分析结果显示，PLAGL2 阳性表达均为上皮性卵巢癌患者预后的影响因素，表明上皮性卵巢癌组织中PLAGL2 表达可用于反映上皮性卵巢癌患者的预后情况。此外，COX 多因素回归分析结果显示年龄46～58 岁、FIGO 分期Ⅲ～Ⅳ期、病理分级低分化、术后残余病灶直径＞1 cm 同样是上皮性卵巢癌患者预后的影响因素。年龄作为反映机体组织及器官活性的重要参考指标，正常情况下伴随患者年龄的增长，机体抵抗力逐渐降低，且治疗耐受性较差，不利于患者预后。FIGO 分期Ⅲ～Ⅳ期提示患者病情进展较为迅速，且可能存在转移风险，患者预后不佳［18-19］。刘传忠等［20］研究同样发现，FIGO 分期Ⅲ～Ⅳ期的上皮性卵巢癌患者生存期明显缩短。病理分级低分化提示病灶组织与未分化癌肿瘤组织与正常组织相差很大，成熟度差，恶性度高，不利于患者预后［21-22］。此外术后残余病灶直径作为上皮性卵巢癌复发的高风险因素之一，伴随病灶残留直径的增大复发风险随之升高，从而影响患者预后［23-24］。本研究ROC 分析结果显示，上皮性卵巢癌组织中PLAGL2 表达对上皮性卵巢癌患者预后的灵敏度、特异度和AUC 分别为89.47%、66.67%、0.781，进一步证实了上皮性卵巢癌组织中PLAGL2 表达对患者预后的预测效能较高。因此笔者认为临床中针对上皮性卵巢癌患者治疗，在不断完善手术及化疗等治疗方案的同时，进一步提高PLAGL2 等肿瘤相关因子表达的监测，更有助于改善患者长期预后，延长患者生存期。但本次研究纳入样本量有限，不同预后结局组间数据差异较为明显，后续研究中仍需完善多中心大样本研究试验，进一步证实研究结论，完善上皮性卵巢癌患者预后的研究。

综上所述，PLAGL2 在预后不佳的上皮性卵巢癌患者中阳性表达率较高，且上皮性卵巢癌组织中PLAGL2 表达对患者预后具有较高的预测效能。