毛细管气相色谱法测定常通舒颗粒中藁本内酯的含量

肖小武，周志强，付辉政，郎淑琴，吴旻昱

1.江西省药品检验检测研究院，国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西 南昌 330029；2.江西中医药大学，江西 南昌 330044

常通舒颗粒是用于习惯性便秘，老年性便秘及产后便秘的常用药，临床疗效显著，由何首乌、当归、赤芍、火麻仁、桑葚五味药组成［1-2］。方中当归为臣药，具有补血活血，润肠通便等功效，现代研究表明当归主要含有有机酸、多糖类、黄酮类、挥发油类化合物及其他成分［3-4］。当归收载于《中国药典》2020 年版一部［5］，规定其含挥发油不得少于0.4%。当归挥发油中含量最高的成分为藁本内酯，且《中国药典》2020 年版一部对当归流浸膏中的藁本内酯进行了定性鉴别［5］。现行的常通舒颗粒质量标准缺乏对当归药味质量控制项目，质量标准控制技术较低，难以保证产品质量和临床疗效。目前对常通舒颗粒的质量控制技术研究报道较少［6-8］，故本试验参考相关研究［9-10］，以当归中指标成分藁本内酯为考察指标，研究建立GC 法对常通舒颗粒中的藁本内酯进行测定，以期为常通舒颗粒的制造生产、质量控制和评价提供参考。

1 仪器与试药

美国安捷伦8890 型气相色谱仪（配置7693型自动进样器、FID 检测器），瑞士赛多利斯BT25S 型十万分之一电子天平。藁本内酯对照品购自中国食品药品检定研究院，批号为111859-201906，纯度以100% 计。试验用常通舒颗粒样品分别为长春英平药业有限公司（S1: 批号20190902）和贵州威门药业股份有限公司（S2：批号200601，S3:批号200701，S4:批号210901，S5:批号211001，S6:批号211101）。阴性样品为照常通舒颗粒生产工艺制备缺当归的阴性样品。无水乙醇为分析纯，

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取藁本内酯对照品15.12 mg，置10 mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，作为对照品母液；再精密量取上述对照品母液1 mL，置10 mL 量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2 供试品溶液的制备

取样品内容物，研细，取约10.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇25 mL，密塞，称定重量，静置过夜后超声处理15 min，放冷，用无水乙醇补足减失重量，取上清液，滤过，取续滤液，即得。

2.3 阴性样品溶液的制备

取阴性样品，照“2.2”项下供试品溶液制备方法同法制成阴性样品溶液。

2.4 色谱条件

以Agilent HP-5（30 m×0.32 mm×0.25 μm）为色谱柱；以高纯氮气为载气，柱流速为2.5 mL/min；进样体积为1 μL，进样分流比为1∶1；进样口温度为250 ℃，柱箱采取程序升温：最初温度为50 ℃（保留0.5 min），然后以6 ℃/min 的速率升至130 ℃（保留0.5 min），再以10 ℃/min 的速率升至260 ℃；检测器为FID，检测器温度为280 ℃。结果供试品溶液中藁本内酯分离度良好，且阴性无干扰。对照品、供试品和阴性对照溶液色谱图见图1。

图1 各溶液HPLC色谱图：A.对照品；B.供试品；C.阴性样品

2.5 线性关系考察

精密量取“2.1”项下制备的对照品母液1、1、1、2 mL 分别置于50、20、10、10 mL 的量瓶中，依次用无水乙醇稀释至刻度。分别取上述4 个浓度的对照品溶液以及对照品母液进样测定峰面积。以进样浓度为横坐标、以测得峰面积为纵坐标绘制标准曲线。结果藁本内酯的回归方程为Y=2.341 6X+3.102 7，r=0.999 9。表明藁本内酯在30.24～1 512.00 μg/mL 的浓度范围内呈较好的线性关系。

2.6 精密度试验

取“2.1”项下的对照品溶液，按“2.4”项下方法连续进样6 次，测定峰面积。结果藁本内酯峰面积的RSD 为1.27%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

取样品（S1），按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.4”条件下24 h 内分别于每隔4 h 进样测定峰面积，结果藁本内酯的峰面积的RSD 为0.89%，见表1，表明藁本内酯在24 h 内稳定。

表1 稳定性试验结果

2.8 重复性试验

取样品（S1），按“2.2”项下方法制备供试品溶液6 份，按上述“2.4”条件进行分析测定，藁本内酯平均含量为304.55 μg/g，RSD 为1.92%（n=6），结果表明此方法重复性较好，见表2。

表2 重复性试验结果

2.9 加样回收率试验

取样品（S1）6份，每份约5.0g，精密称定，各精密加入藁本内酯对照品溶液(浓度60.48 μg/mL)，每份25 mL，按“2.2”项下方法除不加无水乙醇外同法制备供试品溶液，按上述“2.4”条件进行分析测定，平均回收率为95.77%，RSD 为1.3%。结果表明方法准确可靠，见表3。

表3 藁本内酯回收率试验结果

2.10 样品的测定

按照拟定的方法对6 批样品进行测定，结果见表4。

表4 样品的测定结果（n=4）

3 讨论

3.1 前处理方式的选择

本试验考察了超声、回流、挥发油提取三种提取方式，但因藁本内酯在高温下不稳定，回流、挥发油提取以及超声时间过长均存在热分解而损失，因此最终采用先冷浸后超声的提取方式。此外，本试验还考察了甲醇、无水乙醇、乙酸乙酯以及石油醚四种提取溶剂，结果发现无水乙醇的提取率最高，故试验最终采用无水乙醇为提取溶剂。

3.2 分析方法的确定

本实验最初考察了液相色谱法进行测定，但常通舒颗粒处方药味较多，成分复杂且大部分为极性较强、不易挥发的组分，对测定存在较大的干扰，故本试验最终选择了干扰较小的毛细管气相色谱进行测定。

3.3 样品结果分析

从结果可知，藁本内酯的含量在不同生产企业间相差较大，且同企业不同批次间含量差异也较大。分析其原因为常通舒颗粒的生产工艺为水煎醇沉，藁本内酯受热不稳定且易挥发造成藁本内酯的损耗，提示生产企业需控制生产工艺参数，保证常舒通颗粒产品的批间一致性。