水浴温度对广藿香中百秋李醇含量测定的影响

黄兰珍，廖倩榕，梅世伟，谭周飞

（1.广东省妇幼保健院，广东 广州 510000；2.珠海市妇幼保健院，广东 珠海 519000；3.东莞市国药质量检测中心，广东 东莞 523010）

广藿香为唇形科植物广藿香Pogostemon cablin（Blanco）Benth.的干燥地上部分。百秋李醇为广藿香总挥发油的主要有效成分之一，别称“白秋李醇、虎尾草醇、广藿香醇”。2020年版《中华人民共和国药典》[1]一部广藿香药材含量测定项下检测的物质成分为百秋李醇，其中测定法描述为：“取本品粗粉约3 g，精密称定，置锥形瓶中，加三氯甲烷50 mL，超声处理3次，每次20 min，滤过，合并滤液，回收溶剂至干，残渣加正己烷使溶解”。“回收溶剂至干”实验室常用方法为水浴回收溶剂。笔者查阅广藿香中百秋李醇含量测定相关的文献[2-5]，发现国内未见具体相关内容报道。日常检验中发现不同的水浴温度对百秋李醇的含量测定有一定的影响，当温度过高时，甚至会使百秋李醇测得含量为0。溶剂三氯甲烷性质为质重，易挥发，沸点61～62℃。百秋李醇[6-9]为广藿香挥发油中的成分，其沸点为287.4℃，熔点为56℃，百秋李醇在溶剂回收温度下处于液体状态。本研究采用5种水浴温度6种不同处理方法研究不同水浴温度对广藿香中百秋李醇含量测定的影响，旨在为广藿香中百秋李醇含量测定提供科学的依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器Agilent GC7890B型气相色谱仪（美国Agilent公司）；CPA225D型十万分之一电子分析天平（德国赛多利斯公司）；CP224S型万分之一电子分析天平（德国赛多利斯公司）；HH-ZK4型双孔四列智能水浴锅（上海一凯仪器设备有限公司）；KQ5200型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 材料广藿香饮片（批号：20190325）购于东莞国药集团中药饮片有限公司，经东莞市食品药品检验所中药室朱寿光主任鉴定为唇形科植物广蕾香Pogostemon cablin(Blanco)Benth的干燥地上部分；百秋李醇对照品（批号：110112-201602，纯度：99.8%）购于中国食品药品检定研究院；三氯甲烷、正己烷均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件HP-5毛细管柱（0.32 mm×30 m，0.25 μm）；程序升温：初始温度为150℃，保持23 min，以每分钟8℃的速率升温至230℃，保持2 min；进样口温度为280℃，检测器温度为280℃；分流比为20∶1。

2.2 对照品溶液的制备取百秋李醇对照品15 mg，精密称定，置10 mL容量瓶中，用正己烷稀释至刻度，摇匀，即得百秋李醇对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备取广藿香粗粉45 g，精密称定，置锥形瓶中，加三氯甲烷200 mL，超声处理3次，每次20 min，滤过，合并滤液。将滤液转移至500 mL容量瓶，加入三氯甲烷定容。分别取适量样品溶液，在不同水浴温度下回收溶剂至干，回收方法见表1。

表1 试验用样品溶剂的回收至干方法

以上样品加入正己烷至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。

2.4 系统适用性试验精密吸取“2.2”项下的百秋李醇对照品溶液、“2.3”项下的供试品溶液和空白溶剂各1 μL，按“2.1”项下色谱条件进样分析。结果显示百秋里醇峰与其他组分峰能基线分离，分离度＞1.5；理论板数按百秋里醇峰计不低于50 000。（见图1～3）

图1 百秋李醇对照品溶液气相色谱图

图2 空白溶剂气相色谱图

图3 供试品溶液气相色谱图

2.5 样品的含量测定6份样品在不同水浴温度重复性处理样品的RSD值均小于5%，表明并无明显操作失误，本方法重复性良好。不同水浴温度处理的各样品间进行比较，发现60℃水浴回收溶剂后，立即将残渣进行溶解和定容的样品中百秋李醇含量测定结果最高，为0.629 4 mg/mL；100℃水浴回收溶剂后，继续蒸1 h将残渣进行溶解、定容，测得的百秋李醇含量最低，为0。在60℃～100℃的水浴温度梯度条件下，随着温度的升高测得百秋李醇含量值依次降低，6个样品含量测定结果的排序为①＞②＞③＞④＞⑤＞⑥。（见表2、图4）

表2 各样品中百秋李醇含量（mg/mL）

图4 不同水浴温度各样品气相色谱图

3 讨 论

3.1 广藿香中百秋里醇含量测定方法探讨2020年版《中华人民共和国药典》一部中广藿香含量测定方法项下的描述为：“取本品粗粉约3 g，精密称定，置锥形瓶中，加三氯甲烷50 mL，超声处理3次，每次20 min，滤过，合并滤液，回收溶剂至干，残渣加正己烷使溶解，转移至5 mL量瓶中，精密加入内标溶液0.5 mL，加正己烷至刻度，摇匀，吸取1 μL，注入气相色谱仪，测定，即得。”[1]“回收溶剂至干”的具体方法并无详细说明。常用方法之一为水浴加热回收溶剂，水浴温度的具体设置，尚未见国内文献报道。气相色谱法适用于具有挥发性的物质成分，笔者查阅和对比《中华人民共和国药典》中所有使用气相色谱法测定含量的药材，仅发现广藿香是溶剂提取后回收溶剂再转溶的，常规药材都是溶剂提取定容后直接进行测定。该提取方式可避免回收溶剂和转溶时挥发性成分的损失，是否广藿香的提取也可以采用此种方式有待后续进一步研究验证。

3.2 方法学未考察和内标物未选择依据《中华人民共和国药典》中百秋里醇的气相色谱法是采用正己烷作为内标溶液。内标法[10-12]是一种相对的校准方法。在分析测定样品某组分的含量时，加入一种内标物质以校准和消除由于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。该法是基于气相色谱精密度较低，样品的峰面积可能受到进样技术或仪器或外界温度的干扰，而引起峰面积变化，引用内标的做法以消除这些影响。本试验所用的气相色谱仪精密度更高，采用自动进样装置，消除仪器和操作产生的波动。本研究主要是考察溶剂回收时水浴温度对百秋里醇含量的影响，侧重样品的均一性和试验操作条件的平行性，因此没有采用正己烷作为内标物质，也没有进行方法学中的加样回收率等含量测定方法学的考察研究[13-16]。

3.3 水浴温度设置和样品制备本试验根据三氯甲烷的沸点为61～62℃，分别设置了60、70、80、90、100℃水浴温度和100℃水浴回收溶剂后继续蒸1 h的条件。为了保证各试验样品的一致性和均匀性，本试验按《中华人民共和国药典》中样品溶液的制备方法，制备一份大体积的样品溶液，在60～100℃的水浴温度梯度条件下，每个温度取相同体积的6份样品，每份样品按规定的要求进行处理。根据样品检测经验，100℃回收溶剂之后继续蒸1 h会使百秋李醇继续蒸发损失，同时受样品的总体积的限制，因此100℃回收溶剂后继续蒸1 h样品制备3份（共制备6份33个样品）。同时三氯甲烷在室温条件下会自然蒸发，但时间较长，并不符合实际操作，因此未考虑此项操作条件。

3.4 温度对广藿香中百秋里醇含量测定的影响本试验利用气相色谱法，测定不同水浴温度条件对广藿香中百秋李醇含量测定的影响。“表2各样品百秋李醇含量”的数据显示，样品中百秋李醇的含量随水浴温度的升高而降低，100℃水浴样品含量与60℃样品比较，含量降低50%左右，100℃回收溶剂后继续蒸1 h处理的样品，广藿香中百秋李醇含量测定的结果为0，同样表明百秋李醇在高温条件下易挥发。有研究[17-20]探讨了不同干燥方法和不同光照强度对广藿香中百秋李醇含量的影响，结果发现阴干法样品含量最高，烘干法样品含量较阴干法低，传统干燥法样品含量最低，阴干法在广藿香的产地加工时为首选；光照强度越低，百秋李醇的含量越高，也同样证明了温度对广藿香中百秋李醇的含量有较大的影响，与本试验研究取得较为一致的结果。百秋李醇熔点56℃，在水浴温度条件下为液体状态。随着温度升高，百秋李醇蒸发越多。本研究结果表明，广藿香含量测定法中“回收溶剂至干”水浴温度设置为60℃，回收溶剂后应立即取出，可以减少百秋李醇的损失。