焦防风炮制工艺优化研究

李余先 张俊国

（1.吉林农业科技学院中药学学院 吉林 132101 2.吉林省白山本苜药业有限公司 长春 130600）

1 实验仪器及材料

1.1 试验材料

防风（河北福君堂药业有限公司）、芦丁标准品、5-O-甲基维斯阿米醇苷标准品、升麻素苷标准品、升麻素标准品、补骨脂素标准品、（标准品均为上海源叶生物科技有限公司）。

1.2 试验仪器

炒药机（南京海善制药设备有限公司）、2H-200A型手提式粉碎机（西安宝正实业有限公司）、SB-5200DT型超声波清洗机（宁波新艺超声设备有限公司）、J-HH-6A型精密数显恒温水浴锅（上海皓庄仪器有限公司）、AUW120D分析天平（日本岛津）、高效液相仪器（日本岛津）、SHB-IV型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）、N-1100型旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）、OSB-2100型水浴锅（上海爱朗仪器有限公司）、SB-5200DT型超声波清洗机、（宁波新艺超声设备有限公司）、TS100恒温振动仪（杭州瑞诚仪器有限公司）

2 方法与结果

2.1 焦防风炮制工艺优化研究

2.1.1 焦防风的制备

将净选或切制后的防风饮片，置炒制容器中，用中火或武火加热，炒至药物表面呈焦黄色或焦褐色，内部颜色加深，并伴有焦香气味。

2.1.2 HPLC法测定防风样品中麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷）、补骨脂素的含量

2.1.2.1 色谱条件确立：色谱柱为Diamonsil C18柱（4.6mm×250 mm，5μm），流动相为乙腈-水（15∶85），检测波长为254nm，流速为1.0mL/mim。

2.1.2.2 对照品溶液制备：用微量分析天平精密称定0.99mg升麻素、0.72mg5-O-甲基维斯阿米醇苷、0.91mg升麻素苷、0.90mg补骨脂素，混合加入1mL的色谱甲醇制成每1mL含有3.52mg物质的标准品溶液。

2.1.2.3 样品溶液处理：用分析天平分别精密称定0.2500g生品防风、焦防风的细粉，各自放置在25mL具塞锥形瓶中，用移液管精密吸取10.00mL甲醇加入其中，称定重量，水浴回流2h，静置放凉，再称定其重量。缺失的重量用甲醇补足，摇匀静置，样品图谱见图。

图1 对照品（A）、生防风（B）、焦防风（C）分别在245NM波长下的色谱图

2.1.2.4 方法学考察：线性关系考察：取2.1.2.2下的对照品溶液，按2.1.2.1的色谱条件进行测定，进样体积分别为1、2、5、10和20 uL，进行标准曲线的绘制，升麻素苷：Y=7.063787e-007X+7.451957e-003，R2=0.9996，浓度范围（mg/uL）0.091-0.91；升麻素：Y=5.016273e-007X+4.634783e-003，R2=0.9996，浓度范围（mg/uL）0.099-0.99；5-O-甲基维斯阿米醇苷：Y=1.352315e-006X+7.793854e-003，R2=0.9995。

精密度实验：精密吸取混合对照品溶液10μl，按上述色谱条件测定，选择重复进样6次，计算各目标化合物峰面积的RSD值，结果表明升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、补骨脂素RSD分别为1.321%、1.019%、0.984%、1.523%。

重现性实验：取同一条件炮制的苦参样品6份，按上述样品处理方法将其制成供试品溶液，按上述色谱条件，分别进行进样检测，测得各色谱峰峰面积的RSD值，结果表明升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、补骨脂素RSD分别为0.978%、1.562%、1.041%、1.324%。

稳定性实验：取上述样品溶液，分别在0h、4h、8h、12h、24h，按上述液相色谱条件，分别进行进样测定，测得各指标性成分色谱峰峰面积RSD值，结果表明升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、补骨脂素RSD分别为1.011%、1.232%、1.541%、1.421%。

加样回收率试验：分别精密称取焦防风样品3份，分别加入已精密称定的升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、补骨脂素，按2.1.2.3方法将其制成供试品溶液，按2.1.2.1液相色谱条件测定测定含量，分别计算加样回收率和RSD值，结果表明升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、补骨脂素RSD分别为2.011%、2.056%、1.968%、1.894%，平均加样回收率分别100.5%、99.8%、98.7%、100.2%。

2.1.3 焦防风炮制工艺两因素试验

取大小均匀，色泽均一的焦防风9份，每份100g，以炒制温度，炒制时间为考察因素，每个因素3个水平，通过两因素方差分析试验，筛选焦防风的最佳炮制工艺。将升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、补骨脂素的总含量作为主要评价指标，筛选优化炮制工艺。

实验因素水平：炒制温度分别为160℃、180℃、200℃；炒制时间分别为7、9、11min。焦防风两因素试验结果见表1。

表1 焦防风两因素试验结果

利用SPSS22.0对其进行方差分析。结果显示，影响防风炒焦工艺因素因素A（炒制温度），B（炒制时间），A温度×B时间（交互作用）存在显著性差异P＜0.05，对试验结果具有一定的影响。各因素对试验结果的影响，优选出防风炒焦的最佳工艺为A2B1，温度180℃，炒制7min。

2.1.4 验证试验

按2.1.3优选的工艺制备3份样品，测定升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、补骨脂素总含量，结果显示升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、补骨脂素总含量（%）分别为1.369、1351、1.378。结果表明焦防风炮制工艺稳定可行。

3 结论与讨论

本实验对焦防风炮制工艺开展研究，利用两因素实验设计优选两种炮制品最佳炮制工艺，优选出防风炒焦的最佳工艺为A2B1，温度180℃，炒制7min。比较炮制前后升麻素苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、补骨脂素总含量变化，为防风炮制工艺和质量标准规范化奠定基础。