莫西沙星氯化钠注射液溶液颜色控制方法研究

张 超 ，刘美平，尚丽霞，陶秀梅，廖廷秀，张 宇

（1. 沈阳药科大学 药学院，辽宁 沈阳 110016；2. 北京诺康达医药科技股份有限公司，北京 100176；3. 海南爱科制药有限公司，海南 海口 570100）

盐酸莫西沙星是具有广谱活性和杀菌作用的 8-甲氧基氟喹诺酮类药物[1-2]，由于其吸收快，体内分布广，临床上对绝大多数致病菌的综合疗效已达到或超过 β-内酰胺类。溶液颜色检查法是控制原料及制剂中有色杂质限量的方法。药品颜色的变化是药品内在质量改变最直观的表现，往往意味着降解物的产生。目前国内外药典收载的品种中，溶液颜色检查大部分仍采用目视比色法，一少部分会采用紫外—可见分光光度法，色差计法相对应用较少。《中国药品进口注册标准》（JX20120211）[3]采用目视比色法测定盐酸莫西沙星氯化钠注射液的溶液颜色，溶液的颜色应在黄绿色 6 号标准比色液和黄绿色 10 号标准比色液之间。原料药盐酸莫西沙星在 EP10.0[4]中的溶液颜色检查项也采用目视比色法。《中国药典》2020 年版二部乳酸环丙沙星注射液[5]、氧氟沙星氯化钠注射液[6]采用紫外—可见分光光度法检查溶液颜色。由于喹诺酮类类药品本身带有颜色，对其溶液颜色变化的判定带来难度，有必要对其科学的控制方法进行研究探讨，以指导产品科学的质控。

本文采用不同的方法（目视比色法、紫外—可见分光光度法、色差计法[7-10]）对盐酸莫西沙星氯化钠注射液的溶液颜色进行对比研究，同时测定有关物质，探索溶液颜色与杂质含量的相关性，讨论科学准确的溶液颜色的质控方法。

1 仪器与试剂、试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪（岛津，SPD-20A）；紫外—可见分光光度计（岛津，UV2600）；药物溶液颜色测定仪（天津市天大天发科技有限公司，SY-1）；分析天平（梅特勒—托利多国际贸易（上海）有限公司，XSE-105DU）。

1.2 试药

四丁基硫酸氢铵（分析纯）；磷酸二氢钾（分析纯）；磷酸（分析纯）；甲醇（HPLC级）；无水亚硫酸钠（分析纯）；盐酸莫西沙星氯化钠注射液（海南爱科制药有限公司），参比制剂商品名：拜复乐（Bayer Pharma AG）。

1 供试品的光照破坏处理

将参比制剂和自制制剂于光照（5 000 ± 500）lx 条件下放置 0、5、10、30、40、50 d。

2 检查方法与结果

采用目视比色法、分光光度法和色差计法检查不同光照时间样品的颜色。采用 HPLC-PDA 法检查不同光照时间样品的有关物质。

3.1 溶液颜色检查

3.1.1 目视比色法

取于光照（5 000 ± 500）lx 条件下放置不同天数（0、5、10、30、40、50 d）的参比制剂和自制制剂适量，采用目视比色法与标准比色液（黄绿色调 1 号～10 号）比较。结果表明，溶液的颜色均在黄绿色 6 号标准比色液至黄绿色 9 号标准比色液之间，符合《进口药品注册标准》JX20120211 的规定。但本品溶液颜色较深，且于光照（5 000 ± 500）lx 条件下放置不同天数的供试品间及供试品与标准比色液间的颜色较为接近，无法分辨出颜色的区别。例如，无法判断光照50 d 的自制制剂的溶液颜色浅于黄绿色 7 号标准比色液还是黄绿色 8 号标准比色液（见图 1）。

Fig. 1 Comparison of the solution color with the standard colorimetric solution after 50 d illumination conditions 图 1 自制制剂光照 50 d 后与标准比色液的溶液颜色的比较

3.1.2 紫外—可见分光光度法

取于光照（5 000 ± 500）lx 条件下放置不同天数（0、5、10、30、40、50 d）的参比制剂和自制制剂适量，用紫外—可见分光光度计于 450 nm 的波长处测定吸光度（见表 1和图 2）。结果表明，光照（5 000 ± 500）lx 条件下放置不同天数的供试品的吸光度值均无明显区别，不能准确区分溶液颜色的变化。

3.1.3 色差计法

色差计法是通过测定供试品溶液与水的色差值（ΔE*）从而对颜色进行定量表述和分析的方法。色差值（ΔE*）越大，表明颜色越深。取于光照（5 000 ± 500）lx 条件下放置不同天数（0～50 d）的参比制剂和自制制剂适量，采用药物溶液颜色测定仪测定色差（见表 1和图 3）。结果表明，光照（5 000 ± 500）lx 条件下放置不同天数的供试品的色差值（ΔE*）随放置天数的延长而变大，该方法良好的反映了溶液颜色的变化趋势，具有区分力。

Table 1 Results of color difference meter and absorbance method for different illumination time 表 1 不同光照时间色差计法与吸光度法检查结果

3.2 有关物质测定

3.2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB Phenyl（4.6 mm × 250 mm, 5 μm）；检测波长 293 nm；柱温 45 ℃；进样量：50 μL；流速：1.0 mL/min；磷酸盐缓冲液：取 0.5 g 四丁基硫酸氢铵和 1.0 g 磷酸二氢钾，加水适量溶解后用水稀释至 1 000 mL，加磷酸 2 mL，混匀，滤过；流动相 A 为磷酸盐缓冲液甲醇（72∶28）；流动相 B 为磷酸盐缓冲液—甲醇（30∶70）；稀释剂：称取无水亚硫酸钠 20 mg，溶于 1 000 mL 缓冲盐溶液中，混匀。按表 2进行梯度洗脱。

Fig. 2 The relationship between absorbance and placement time of the sample under light condition 图 2 供试品于光照条件下吸光度与放置时间的关系

Fig. 3 The relationship between color difference (ΔE＊) and placement time under illumination 图 3 供试品于光照条件下色差值（ΔE＊）与放置时间的关系

Table 2 Gradient elution conditions 表 2 梯度洗脱条件

3.2.2 供试品溶液的制备与测定

精密量取于光照（5 000 ± 500）lx 条件下放置不同天数（0、5、10、30、40、50 d）的参比制剂和自制制剂各 5.0 mL，分别置 10 mL 量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取各供试品溶液 50 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图（见表 3～表 4，图 4～图 5）。

Table 3 Results of different light time related substances of reference preparation 表 3 参比制剂不同光照时间有关物质结果

Fig. 4 Reference preparations related to different light time 图 4 参比制剂不同光照时间有关物质

Fig. 5 Self-made preparations related to different light time 图 5 自制制剂不同光照时间有关物质

Table 4 Results of different light time related substances in self-made preparations 表 4 自制制剂不同光照时间有关物质结果

结果表明，参比制剂与自制制剂于光照（5 000 ± 500）lx 条件下放置不同天数产生的杂质基本一致，杂质的增长趋势基本一致；光照 50 d 时，最大单个杂质均低于 0.1%；光照 40 d 时，有关物质总杂质为 0.191%，与限度（0.2%）接近，50 d 时超过限度；光照条件下均未检出 USP43和 BP2020 各国药典收载的已知杂质（杂质 A、杂质 B、杂质 C、杂质 D、杂质 E、杂质 F、杂质 G、杂质 H），主要光降解杂质为 7-胺基莫西沙星（化学结构式见图 6），RRT0.6 杂质、RRT2.0 杂质，RRT0.6 杂质、RRT2.0 杂质待进一步确定其化学结构式。

Fig. 6 Chemical structure of impurity 7-amino moxifloxacin by light degradation 图 6 光照降解杂质 7-胺基莫西沙星化学结构式

3.3 颜色与光照降解杂质关系研究

上文已表明本品颜色采用色差计法具有区分力，以参比制剂为例进一步研究色差值与主要光照降解杂质的关系（见表 5和图 7）。

Table 5 Results of the study on the correlation between color difference and related substances 表 5 色差值与有关物质相关性研究结果

Fig. 7 Linear relationship between light impurity degradation and chromatic aberration 图 7 光照降解杂质与色差值线性关系

结果表明，盐酸莫西沙星氯化钠注射液光照条件下，主要光照降解杂质（7-胺基莫西沙星）、RRT0.6及RRT2.0杂质和总杂质与色差值之间呈正相关。

3 讨论

盐酸莫西沙星氯化钠注射液本身具有一定颜色，由于人眼在深色区对颜色变化的分辨能力远低于浅色区，采用此方法检查本品溶液的颜色，增加了结果判定的难度甚至无法判定。紫外-可见分光光度法是通过测定药品在某一波长处的吸光度来测定溶液颜色，测定本品溶液颜色时，吸光度值无明显变化。这是由于药品颜色往往不是单一波长所能表现的，在单一波长处的吸光度值不能完全反映药品颜色的全部特征。因此，紫外-可见分光光度法适用于特定的有色杂质导致溶液颜色发生变化的情况。此外，紫外—可见分光光度法测定的吸光度值一般均较小，准确度略差。采用色差计法测定本品的溶液颜色，对溶液颜色采用具体数值进行定量表述，准确、客观的反映了溶液颜色随放置时间的变化趋势，具有区分力，且色差计法更具科学性、准确性和客观性，可避免目视法的主观误差。

参比制剂和自制制剂分别于光照（5 000 ± 500）lx 条件下放置不同时间，随放置时间延长，溶液的色差值逐渐变大，溶液颜色逐渐加深，杂质含量逐渐增大，溶液颜色与杂质含量呈正相关趋势，说明采用经济、快速的色差计法可间接反馈有关物质的变化，在处方及工艺筛选过程中有一定的指导意义。

由于有关物质检查项仅是在一定的色谱条件下和特定的检测波长处测得杂质情况，理论上并不能包含药品中可能包含的所有杂质，而溶液颜色的检查可以简易、直观和快速的判断溶液中有色杂质的含量，且测得的结果为药品中所含的有色杂质的总和。因此，溶液颜色检查通常与有关物质检查相结合，从不同角度来控制药品的质量，两者相互补充，且不可相互替代。因此，为更好的控制药品的质量，筛选科学、准确且具有区分力的溶液颜色检查方法具有重要的意义。

本研究采用色差计法测定溶液颜色，对药品中有色杂质的质量控制具有指导意义。喹诺酮类药物研发过程中可参考本研究结果考察杂质与色差值之间的关系，采用经济、快速的色差计法考察药品的质量。