尹卫卫,元娜,袁万哲
(1.中国农业大学 北京 100094;2.廊坊职业技术学院 河北廊坊 065000;3.北京大伟嘉生物技术股份有限公司 北京10085;4.河北农业大学 河北保定 071000)
鸡心包积液-肝炎综合征(hydropericardium syndrome,HPS),又称鸡安卡拉病,是由Ⅰ群禽腺病毒血清4 型感染引起的一种以心包积液与包涵体肝炎为主要病理变化的禽类传染病。主要发生于3~5 周龄的肉鸡、麻黄鸡、蛋鸡,有的禽腺病毒还可以感染鸭,死亡率可达到20%~80%。1987 年,巴基斯坦卡拉奇附近的安卡拉地区首次暴发HPS,接着印度、日本、朝鲜、韩国等国家发生了该病的流行。2015 年,我国山东、江苏、河南等地区发生HPS的流行,随后向辽宁、山西、吉林、黑龙江等地区蔓延,给我国养禽业带来了巨大的经济损失。本研究对近6 年来全国各地区不同养鸡场中HPS 的流行情况进行了调查分析,以期为HPS 的流行病学及综合防控提供实验数据。
自2015 年12 月—2020 年7 月临床疑似HPS 患病鸡来源于山东德州、山东济宁、江苏句容、山西长治、江苏淮北、辽宁丹东、黑龙江东港、湖北襄阳、陕西西安、内蒙古通辽、山西运城、山西晋中、河北唐山、陕西延安、天津、山西繁峙、贵州红河州、山西高平、江苏宿迁、江西宜昌、安徽濉溪、河北霸州、陕西渭南、陕西铜川、江苏淮安、辽宁熊岳、陕西咸阳、西安户县、湖南娄底、宁夏、陕西渭南、吉林长春等地,养殖规模为5,000~30,000 羽。采集的样品为病鸡的肝脏样本,共采集333 份样本。
1)利用Primer Premier5 设计引物。鸡心包积液-肝炎综合症P1:CCT CAA CCA ACA AGG ACC CA;P2:TCC AGG CAC CCG TTA CCA。其他疾病的引物由于保密原因,省略。
2)PCR 试验:反应体系:模板1μL;上游引物1μL;下游引物1μL;MIX(Taq 酶,dNTP,Mg)12.5μL;ddHO 9.5μL;反应程序:94℃预变性5min,94℃变性45s,56℃退火30s,72℃延伸45s;30个循环。
所采集样品的鸡心包积液-肝炎综合症病例的阳性率(表1,图1)。
表1 近6年鸡心包积液-肝炎综合症病例的阳性率
图1 近6 年HPS 阳性率趋势
图1 显示:从时间纵轴上看,连续6 年对HPS 的监测显示,2016 年出现了顶峰,随后逐年下降,2018 年微弱上升。
典型病例一:吉林长春市某养殖场,养殖总量100,000 只,均为海兰品种,于2020 年送检肝脏病料组织2 份,可见澄明淡黄色的心包积液,肝脏颜色发黄。预做Ⅰ群禽腺病毒4 型鸡心包积液-肝炎综合症、马立克、禽白血病的检测,见图2-1。
图2-1 病例1
典型病例二:2016 年淮北市濉溪县某养殖场60 日龄的青年鸡,100 日龄时发病,鸡群怕冷、精神萎靡,拉黄色稀粪采食正常;剖检心包有积液、心冠脂肪出血;器官环状出血;肺脏充血、出血;肝脏水肿,有淡黄色胶冻样物渗出,表面有条带样出血;脾脏肿大,表面有灰白色坏死灶;肾脏肿大、出血;输卵管萎缩,表面充血出血;卵泡充血、出血;免疫情况为:进栏后先后免疫了新城疫Ⅳ系疫苗和新流二联、传喉、禽流感H5-6-7-8;预做Ⅰ群禽腺病毒4 型鸡心包积液-肝炎综合症、流感H9 株的抗原检测。预做Ⅰ群禽腺病毒4型鸡心包积液-肝炎综合症、禽流感的病原检测和新城疫抗体检测,见图2-2。
图2-2 病例2
剖检典型病例,无菌取典型病例的鸡的内脏,制作石蜡切片后用HE 染色。病理变化为:
图2-3:肝脏中央静脉和窦状隙广泛淤血、肝细胞严重脂肪变性,局灶性肝细胞坏死,同时细胞浆和细胞核内可见嗜碱性包涵体;
图2-3 肝脏
图2-4:心脏局灶性坏死,心外膜充血,淋巴管扩张;
图2-4 心脏
图2-5:肺脏充血淤血严重,肺泡上皮细胞脱落,肺泡腔内有大量渗出液,淋巴细胞浸润,弥散性含铁血黄素沉着;
图2-5 肺脏
图2-6:脾脏白髓中淋巴细胞广泛坏死,弥散性含铁血黄素沉着;
图2-6 脾脏
图2-7:肾脏广泛淤血,肾小管上皮细胞变性坏死,肾小管内出现大量尿管型。
图2-7 肾脏
图2-8、2-9、2-10 显示:典型病例1:HPS 阳性,马立克阴性、禽白血病阴性。图2-11、2-12 显示:典型病例2:HPS 阳性,禽流感亚型阴性。
图2-8 HPS(1 号为阳性;2 号为阴性)
图2-9 马立克(1 号为阴性;2 号为阴性)
图2-10 禽白血病(1 号为阴性;2 号为阴性)
图2-11 HPS(1 号为阳性;2 号为阳性)
图2-12 禽流感H9 亚型(1 号为阴性;2 号为阴性)
从空间上,HPS 纵向由山东、江苏、河南等地向东北三省辽宁、吉林、黑龙江及内蒙古东北部蔓延,横向向安徽、湖北湖南等地蔓延。
6 年的监测曲线显示:2015 年鸡心包积液-肝炎综合症疾病开始被发现,2016 年全国各地均有此病的发生,在调研的6 年间达到峰值。随后几年中,由于全国对本病认知和防治手段的提升,样本数量和阳性样本均下降。2018 年,养殖户对此病稍有轻视,导致指标略有升高。随着各种疫苗、防控手段的进一步实践,2019、2020 年呈下降趋势。
鉴别诊断显示疾病初期,症状较轻微,一线养殖人员对HPS 了解较少,在HPS、马立克、禽白血病中徘徊;随着疾病的发生发展,症状病理变化相对严重,引起与其他传染病如鸡新城疫、禽流感混合感染的误解,通过对病原进行检测,最终确定为HPS。
上所述,6 年来通过对HPS 的监测,体现了随着HPS 的发生发展,全国兽医部门全心全德,共同努力抗击疫情,研制出了各种疫苗,加强生物安全与管理,使疾病最终被控制在可控阶段的局面。