羊水过少孕产妇胎盘和胎膜中AQP9、HGF的表达变化及其与妊娠结局的相关性

陶新梅，曾 利

(巴中市中心医院产科，四川 巴中 636000)

妊娠期正常的羊水量对维持胎儿生长发育至关重要，羊水过少指妊娠晚期羊水量低于300mL，是一种常见的妊娠并发症，会引起胎儿结构异常、生长受限及各种出生后综合征[1-2]。水通道蛋白(aquaporins，AQPs)是一种跨膜转运通道，主要负责体内水分子的运输[3]，AQP9作为一类对水具有高度选择性的通道蛋白，在孕妇胎盘、胎膜上的分布和调控胎膜两侧羊水平衡及其与羊水量异常的相关性研究广受关注[4]。肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)是一种酸性蛋白质，广泛表达于人体的肝、肾组织等，有研究发现在人体胎盘胎膜中也有表达，而绒毛间质细胞是主要合成及分泌细胞，HGF是妊娠中的重要因子，能通过促进绒毛血管新生，调节胎盘形态[5]。既往研究发现，HGF表达水平降低会减少绒毛数量，减少胎盘血管生成，导致缺血缺氧、胎儿窒息等疾病[6]。本研究通过检测羊水过少和正常孕产妇胎盘和胎膜组织中AQP9、HGF表达水平的差异，研究AQP9、HGF与妊娠结局间的相关性，以期为临床诊疗提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究收集2017年3月至2021年3月在巴中市中心医院妇产科分娩的羊水过少的114例孕产妇为观察组，平均年龄(26.02±3.62)岁，平均孕周(39.52±3.61)周；另随机收集同期114例羊水正常孕产妇为对照组，平均年龄(25.51±3.12)岁，平均孕周(39.45±3.25)周；两组孕产妇的年龄、孕周和产前体重之间均无统计学差异(P>0.05)。纳入标准：①妊娠期间无明显感染及服药史，无黄体酮等保胎治疗史；②孕周大于37周，小于41周；③观察组孕妇经B超检查后符合羊水过少诊断[7]；④单胎；⑤经检查未见胎儿畸形等疾病。排除标准：①伴有妇科肿瘤；②伴有妊娠期高血压疾病、妊娠期糖尿病等；③存在呼吸、循环、泌尿等重大脏器并发症；④合并胎膜早破者。所有患者及家属均签署知情同意书，本研究经本院伦理委员会批准通过。

1.2 研究方法

本研究采用免疫组化方法检测胎盘和胎膜组织中AQP9和HGF的表达。具体步骤如下：①标本采集及固定：所有孕产妇胎盘娩出后，将胎盘的母体面分为四个象限，在每个中心取2块1.0cm×1.0cm×1.0cm的胎盘组织和直径2cm的胎膜组织，避开出血、钙化及梗死区域，采集的标本用甲醛溶液固定24～48h以上，进行常规石蜡包埋，连续切片(厚度：4μm)。②利用免疫组化方法检测AQP9、HGF的表达：用3%H2O2清除过氧化物酶后中加入特异性兔抗人AQP9多克隆抗体(北京博奥森生物技术有限公司，浓度1:50)，以及兔抗人HGF多克隆抗体(武汉博士德生物工程有限公司，浓度1:100)，4°C冰箱过夜，磷酸盐缓冲液冲洗2min；采用PV-9000两步法(北京中山生物技术公司)进行免疫组化染色；同时使用DAB显色，经过苏木精复染且脱水封片后在高倍显微镜下观察AQP9和HGF的表达。③结果判读：利用镜下在细胞内出现黄色或棕色颗粒为阳性细胞判定标准。每张切片在高倍镜视野下，选取5个随机视野，进行观察记录。根据细胞染色程度和阳性细胞百分比进行评分，染色程度计分标准：强着色3分，中等着色2分，浅着色1分，不着色0分；阳性细胞数百分比计分标准为0分：着色细胞数≤5%，1分：5%～10%，2分：11%～50%，3分：>50%。最终组织学积分结果为染色程度得分和阳性细胞百分比得分之和。

1.3 观察指标

①两组孕产妇胎盘组织和胎膜组织中AQP9、HGF的表达情况和相关性；②两组孕产妇的妊娠结局情况，剖宫产和产程异常的诊断标准依据《妇产科学》[8]；③羊水过少孕产妇胎盘和胎膜组织中AQP9和HGF的表达与妊娠结局的相关性。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组患者的一般情况比较

观察组114例孕产妇的平均年龄为(26.02±3.62)岁，平均孕周(39.52±3.61)周，产前平均体重为(75.89±7.11)kg；对照组孕产妇平均年龄为(25.51±3.12)岁，平均孕周(39.45±3.25)周，产前平均体重为(75.31±6.93)kg；两组孕产妇的年龄、孕周和产前体重之间均无统计学意差异(t值分别为1.14、0.15、0.62，P>0.05)，两组具有可比性，见表1。

表1 两组患者的一般情况比较

2.2 两组患者胎盘和胎膜组织中AQP9、HGF的表达情况

两组孕产妇的胎盘和胎膜组织中均有AQP9和HGF的表达；胎盘组织中AQP9和HGF主要在胎盘合体滋养细胞的细胞膜中表达，如图1、图2；胎膜组织中AQP9和HGF主要在胎盘上皮细胞的细胞膜中表达，如图3、图4。观察组孕产妇胎盘和胎膜组织中AQP9和HGF的表达水平均低于对照组(t值分别为27.03、33.31、18.17、12.27，P<0.01),见表2。

表2 两组孕产妇胎盘和胎膜组织中AQP9、HGF表达的组织学积分比较

注：A对照组胎盘组织AQP9；B观察组胎盘组织AQP9。

注：A对照组胎盘组织HGF；B观察组胎盘组织HGF。

注：A对照组胎膜组织AQP9；B观察组胎膜组织AQP9。

注：A对照组胎膜组织HGF；B观察组胎膜组织HGF。

2.3 两组患者AQP9和HGF在胎盘、胎膜组织中表达的相关性

观察组胎盘和胎膜组织中AQP9的表达与HGF的表达均呈正相关(r值分别为0.69和0.82，P<0.05)；对照组胎盘和胎膜组织中AQP9的表达与HGF的表达无明显相关性(r值分别为0.10和0.21，P>0.05)，见表3。

表3 两组患者AQP9和HGF在胎盘、胎膜组织中表达的相关性

2.4 两组患者妊娠结局的比较

观察组孕产妇不良妊娠结局总发生率(90.35%)明显高于对照组(37.72%)(χ2=68.56，P<0.01)；观察组不良妊娠结局中剖宫产和产程异常发生率均明显高于对照组，差异均有统计学意义(χ2值分别为35.86和10.28，P<0.01)，见表4。

表4 两组孕产妇妊娠结局比较[%(n/N)]

2.5 羊水过少孕产妇胎盘、胎膜组织中AQP9和HGF的表达与妊娠结局的相关性

羊水过少孕产妇胎盘和胎膜组织中AQP9和HGF的表达与剖宫产呈负相关(r值分别为-0.20、-0.39、-0.22、-0.31，P<0.05)；羊水过少孕产妇胎盘和胎膜组织中AQP9和HGF的表达与产程异常的发生呈负相关性(r值分别为-0.27、-0.34、-0.26、-0.36，P<0.05)，见表5。

表5 羊水过少孕产妇胎盘和胎膜中AQP9和HGF的表达与不良妊娠结局的相关性

3 讨论

羊水是胎儿能够在母体内正常生存的基本环境，能通过稳定子宫内部温度环境、提供胎儿内部环境及缓冲外部压力等，在正常妊娠过程中，随着孕周增加，羊水量在孕38周时可以达到1 000mL[9]。羊水过少是指孕产妇在妊娠28周以后的羊水量少于300mL，临床上主要是根据B超进行诊断，羊水过少的羊水指数≤5cm或者羊水最大暗区深度≤2cm可以诊断为羊水过少[10]。羊水量的改变对于维持母婴临床结局具有重要意义，羊水过少的发生能够在增加胎儿宫内窘迫、新生儿窒息、胎儿发育畸形等方面发挥消极作用；羊水过少的原因可以分为胎盘功能异常、母体原因、羊膜病变及胎儿畸形等[11]。

3.1 羊水过少孕产妇胎盘和胎膜组织中AQP9、HGF的表达和意义

AQP是一类通道蛋白，对水分子具有高度选择性，目前已发现13种水通道蛋白[12]，统称为AQP家族。AQP9最早发现于脂肪组织，随后逐渐发现脑、肺、肝及胎盘等组织器官中也存在。本研究结果表明，孕产妇的胎盘和胎膜组织中均有AQP9表达，胎盘组织中AQP9主要在胎盘合体滋养细胞的细胞膜中表达，胎膜组织中AQP主要在胎盘上皮细胞的细胞膜中表达。AQP9能够通过长期、短期调节方式，从而影响细胞膜对水分子通透性，在胎盘胎膜上还能够转运嘧啶、嘌呤等小分子物质，通过影响渗透浓度梯度影响羊水量。既往有研究结果认为，当羊水量异常时，AQP9在羊膜的表达量与羊水量呈正相关，在胎盘的表达量则与羊水量呈负相关[13]。然而，AQP9 是参与羊水量异常的病理形成过程还是仅参与羊水量异常的代偿性调节，其分子调节机制仍未知[14]。本研究结果发现，羊水过少孕产妇胎盘和胎膜组织中AQP9的表达水平明显低于羊水正常组，提示胎盘和胎膜组织中AQP9的表达水平与羊水过少的发生存在负相关。

HGF是一种广泛存在于体内的酸性蛋白质，具有能够启动肝再生、促进细胞分裂、促进细胞扩散和迁移等作用，在胎盘胎膜中也广泛存在，由绒毛间质细胞合成并分泌，调节滋养层细胞，促进胎盘绒毛血管新生，维持胎盘形态，是妊娠维持的重要作用因子。胎盘中HGF水平的降低可能会使绒毛数量发生改变，从而影响胎儿呼吸[15]。本研究结果也表明孕产妇的胎盘和胎膜组织中均有HGF的表达，胎盘组织中HGF主要在胎盘合体滋养细胞的细胞膜中表达，胎膜组织中HGF主要在胎盘上皮细胞的细胞膜中表达；同时研究结果发现，羊水过少孕产妇胎盘和胎膜组织中HGF的表达水平明显低于羊水正常组，提示胎盘和胎膜组织中HGF的表达水平与羊水过少的发生存在负相关。此外，本研究结果发现羊水过少孕产妇的胎盘和胎膜组织中AQP9的表达与HGF的表达均呈正相关，而羊水正常的孕产妇胎盘和胎膜组织中AQP9的表达与HGF的表达无明显相关性，提示胎盘和胎膜组织中AQP9和HGF的表达对羊水过少存在一定的协同作用。

3.2 胎盘和胎膜组织中AQP9、HGF表达与妊娠结局的相关性

既往研究结果表明，羊水过少会导致胎儿生长发育受限，容易增加胎儿发生宫内窘迫，在临产中出现宫缩，容易压迫脐带，引起胎儿窒息[16]。羊水过少也容易降低胎儿对宫缩的耐受力，增加孕产妇剖宫产概率；同时，羊水过少也会导致分娩时羊水冲洗能力下降，引起感染等。本研究结果显示，观察组孕产妇不良妊娠结局总发生率(90.35%)高于对照组(37.72%)，其中观察组剖宫产率(74.56%)和产程异常率(15.79%)也高于对照组剖宫产率(35.09%)和产程异常率(2.63%)，与既往研究结果基本一致。同时，本研究相关性分析显示，羊水过少孕产妇胎盘和胎膜组织中AQP9和HGF的表达与剖宫产和产程异常的发生均呈负相关，提示羊水过少产妇剖宫产和产程异常可能与AQP9和HGF表达水平降低有关。AQP9表达水平的降低减少母体和胎儿的液体交换，减少羊水生成，同时改变羊水的通透性，减少羊水的重吸收。另外，HGF的表达水平降低，可导致胎盘血管改变，减少血管生成及羊水生成，与AQP9具有协同作用，最终导致孕产妇妊娠结局改变。刑宁宁等[17]研究认为，AQP1与HGF的异常表达共同影响胎盘血管，引起内环境改变，减少羊水量，影响妊娠结局。

综上所述，羊水过少孕产妇胎盘和胎膜组织中AQP9和HGF的表达水平较低，且均呈正相关；羊水过少孕产妇剖宫产率、产程异常的发生率均增加，而胎盘和胎膜组织中AQP9和HGF的表达与不良妊娠结局的发生呈负相关。但本次研究中选取的研究对象来源较局限，存在地域、人文等因素的差异，可能存在一定的误差。需扩大样本数量后进行更为深入的探究。