过氧乙酸戊二醛复方消毒剂治疗猪急性回肠炎效果研究

张 黎谈小龙王 辰 谭 凡 郑龙龙*

（1山西农业大学动物医学学院，山西太谷 030801；2安徽省六安市畜牧发展中心，安徽六安 237000）

胞内劳森氏菌(lawsonia intracelularis,Law-bacteria)可引起的猪回肠、盲肠、结肠黏膜等部位呈以腺瘤样增生为主要特征的肠道传染病，常造成13～16周龄(3～4月龄)育肥期和成年猪群出现急性猝死和血痢的临床症状[1,2]。我国养猪业在饲料“禁抗”压力下，猪增生性肠炎(pig proliferative enteritis,PPE)对猪场造成的损失更为显著，同时与非洲猪瘟的血便有相似之处，为降低该病造成临床更大的损失，猪场管理者主要通过添加治疗性药物和口服疫苗的方式综合防控[3,4]。

考虑到要谨慎使用抗生素和逐渐出现耐药菌株的威胁，药物防控效果越来越差，同时工作量大，操作复杂，严重制约了该病的有效防控。控制和预防猪回肠炎的长期策略应基于猪场特有的免疫接种计划、生物安全和降低风险因素等综合措施。过氧乙酸戊二醛复方消毒剂具有高效、稳定、低毒、刺激性小、易操作、水质要求低等优势[5,6]，通过饮水消毒的方式相比投药和疫苗免疫防控猪回肠炎是更优的选择。

本文通过PCR检测粪便携带细菌情况[7]，对比抗生素(泰妙菌素)和饮用水最常用消毒剂(漂白粉)对回肠炎的防控效果，探讨过氧乙酸戊二醛复方消毒剂治疗猪急性回肠炎的效果，为该病的控制提供新思路。

1 材料与方法

1.1 猪群情况

选取5个相同猪苗提供场(各500头)的3月龄育肥猪，且有猪乃急性死亡，病猪临床表现为排煤焦油样黑色稀薄粪便。试验前对猪乃粪便进行多重PCR鉴定，未检测到猪沙门氏菌和螺旋体核酸，而胞内劳森菌核酸检测为阳性。无菌棉签每天各取粪便10份，连续采样7天，总计350份，置于1.5 mL含生理盐水的EP管中，-20℃备用。

1.2 试验材料

过氧乙酸戊二醛复方消毒剂由山西农业大学动物医学学院动物病理学实验室提供。

1.3 试验方法

1.3.1 治疗方式

欧美国家常以泰妙菌素(100%)60 g/T作为治疗猪回肠炎的“金标准”[8]，我国常以80%含量的泰妙菌素110～200 g/T拌料用于治疗急性出血性回肠炎[9]，均取得较好的临床效果。本文以100 g/T 80%含量的泰妙菌素(A组)、10 g/T漂白粉(B组)作为对照组，不同稀释比例的过氧乙酸戊二醛复方消毒剂治疗组(C组、D组、E组)作为试验组，通过早晚各1次饮水，连续用药7 d的方式，治疗猪急性出血性肠炎，详见表1。

表1 猪急性出血性回肠炎治疗方法

1.3.2 多重PCR鉴定

无菌棉签蘸取100 mg发病猪粪便加入1 mL无菌生理盐水混匀，浸泡10 min后以2 000 r/min离心5 min，取上清液提取DNA，进行细胞内劳森菌等多重PCR检测[10]。引用Elder已建立的特异性检测方法，对粪便样本进行胞内劳森菌(Law-bacteria)、猪沙门氏菌(porcine salmonellosis,PS)和猪蛇形螺旋体(serpulina hyodysenteriae,SD)的检测[11]，其中，设计胞内劳森氏菌的引物为 Law-F：5’CACTCCG-3’，Law-R：5’-TGAAGGTATTGGTATTCTCC-3’，产物长度319 bp[12]；猪沙门氏菌的引物为PS-F：5’-TGC CTACAAGCATGAAATGG-3’，PS-R：5’-AAACTGG ACCACGGTGACAA-3’，产物长度为457 bp[13]；螺旋体引物为SD-F：5’-GGTACAGGCGGAAACACGAC-3’，SD-R：5’-TCCTATTCTCTGACCTACTG-3’，产物长度为1 550 bp[14]。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。反应条件为：94℃5 min，94℃30 s，58℃ 30 s，72℃ 30 s，共34个循环，72℃ 5 min，反应结束后的产物12℃保存。

1.3.3 粪便评分

腹泻指数评分标准参照Kelly等提供的方法[15]，见表2。

表2 粪便评分标准

2 试验结果

2.1 治疗期间各治疗组粪便评分

泰妙菌素(A组)和过氧乙酸戊二醛复方消毒剂(C组、D组，1∶1 000×20～1)治疗期间均能在第3 d显著治疗猪急性回肠炎，减少临床死亡；漂白粉(B组)和过氧乙酸戊二醛复方消毒剂(E组，1∶4 000)稀释时效果相当，第5 d才能对猪急性回肠炎有治疗效果。过氧乙酸戊二醛复方消毒剂(C组，1∶1 000)治疗第6 d和过氧乙酸戊二醛复方消毒剂(D组，1∶2 000)、泰妙菌素(A组)治疗第7 d能完全控住腹泻。详见表3。

表3 治疗期间各治疗组粪便评分结果

2.2 PCR鉴定

泰妙菌素(A组)和过氧乙酸戊二醛复方消毒剂(C组，1∶1 000)治疗组第3 d的猪粪便中胞内劳森菌的核酸检测呈阴性；过氧乙酸戊二醛复方消毒剂(D组，1∶2 000)治疗组第5 d的猪粪便中胞内劳森菌的核酸检测呈阴性；漂白粉(B组)和过氧乙酸戊二醛复方消毒剂(E组，1∶4 000)治疗组第6 d的猪粪便中胞内劳森菌的核酸检测呈阴性。详见表4。

表4 治疗期间粪便中的胞内劳森菌核酸检测结果

3 讨论

胞内劳森菌主要通过粪便排菌，猪发生急性出血性肠炎时粪便中的带菌量很大，能够污染圈舍内的用具和环境。胞内劳森菌常见的间接传播媒介有：胶鞋、铁锹、老鼠等。接触到病猪粪便的工具、人员和其他动物均可使病原菌进行长距离传播。胞内劳森菌引起的猪急性出血性回肠炎的净化工作比较困难，疫苗不能清除病原体携带者，需要采取综合措施对其进行防控。病原菌严格胞内寄生，环境消毒仅能减少排泄物中的病原载量；药物防控成本高，乃能暂时控制疾病造成的损伤，无法修复已经破损的肠绒毛，且容易形成耐药性和造成药物残留。

日常饮水消毒具有操作简便、成本低廉、安全高效，不易产生耐药性，并可降低排泄物中病原载量。畜禽日常饮用稀释过的过氧乙酸戊二醛复方消毒剂后，可有效降低畜禽排泄物中的病菌含量，且对猪急性回肠炎具有治疗作用。超低剂量稀释的过氧乙酸戊二醛复方消毒剂治疗猪急性回肠炎，在使用后第6 d，猪粪便中胞内劳森菌核酸呈阴性。

4 结论

综上所述，过氧乙酸戊二醛复方消毒剂对治疗猪急性回肠炎效果明显，在生猪养殖过程中有潜在的饮水消毒应用前景。