c-Met 及MACC1 在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

郑时玉，郭亚男

（宁波市临床病理诊断中心组织病理科，浙江 宁波 315000）

甲状腺癌（thyroid carcinoma）是临床十分常见的恶性肿瘤，约占所有内分泌肿瘤的95%。甲状腺癌的发病率呈逐年上升的趋势，对人类健康构成了严重威胁。在甲状腺癌的分型中，甲状腺乳头状癌（PTC）约占所有甲状腺癌的80%，其发病率远高于其他病理类型。虽然大部分患者经手术、放射碘治疗后预后较好，但仍有少数患者会发生远处转移。因此，有必要进一步深入研究甲状腺癌的致病机理及其相关分子机制，为甲状腺癌的治疗提供新的靶点和方向。结肠癌转移相关基因（metastasis-associated in colon cancer 1，MACC1）是2009 年Ulrike S等[1]用差异RT-PCR 的方法分析结肠黏膜、结肠癌原发灶、转移灶之间基因表达的异同，进而发现了新基因MACC1。c-Met 是具有酪氨酸激酶活性的跨膜受体，它与HGF 结合后，胞内区发生自身磷酸化，从而激活下游信号通路，导致细胞发生增殖、侵袭等生物学行为。MACC1 在细胞核内与c-Met 的启动子结合后可在转录水平上调节c-Met 的表达[1]。目前，c-Met 及MACC1 蛋白已被报道在胃癌[2]、肺癌[3]、结肠癌[4]、声门癌[5]、骨肉瘤[6]等中存在高表达水平，并被证实与患者病理参数密切相关；然而在甲状腺乳头状癌中表达较少，尤其是MACC1 在甲状腺癌中的表达罕见报道。本研究通过检测甲状腺乳头状癌组织中c-Met 及MACC1 蛋白的表达，旨在探讨其与甲状腺乳头状癌临床病理特征的相关性。

1 材料与方法

1.1 材料 收集2014 年1 月-2020 年6 月宁波市临床病理诊断中心的甲状腺石蜡标本90 例，其中甲状腺乳头状癌60 例，良性甲状腺疾病30 例（甲状腺腺瘤15 例，结节性甲状腺肿15 例）。甲状腺癌患者年龄26～74 岁，其中男15 例，女45 例。所有抽取病例术前均未进行放化疗及免疫治疗。本研究已通过中心伦理委员会批准，取得患者知情同意，并签署知情同意书。

1.2 主要试剂 c-Met 兔抗人多克隆抗体及MACC1兔抗人多克隆抗体均为abcam 公司产品。SP 试剂及DAB 显色试剂盒均为北京中杉金桥生物技术有限公司产品。

1.3 方法 所有石蜡以4 μm 厚度进行连续切片，经脱蜡至水。免疫组化染色采用EnVison 两步法：柠檬酸盐缓冲液高压热修复，PBS 浸洗2 次，各5 min，0.3%H2O2室温孵育10 min，抗原热修复，以1∶200 稀释比例滴加c-Met 兔抗人多克隆抗体或MACC1 兔抗人多克隆抗体后4 ℃过夜，PBS 浸洗3 次，各5 min，滴加生物素标记二抗室温孵育30 min，PBS 浸洗3 次，各5 min，DAB 显色，苏木精复染，常规脱水，用中性树脂封片。分别以膀胱癌及结肠癌石蜡组织作为阳性对照，以PBS 代替一抗作为阴性对照。

1.4 结果判定 c-Met 及MACC1 蛋白的阳性染色呈棕黄色或棕褐色，c-Met 蛋白主要定位于细胞膜和细胞质，MACC1 蛋白主要定位于细胞质。染色强度计分：0 分为无染色，1 分为淡黄色，2 分为棕黄色，3分为棕褐色；染色范围计分：无染色细胞为0 分，＜25%为1 分，25%～50%为2 分，＞50%为3 分；总分为两者相加，0～2 分记为阴性（-），3～6 分记为阳性（+）。染色结果判读由2 位病理医师独立完成。

1.5 统计学处理 应用SPSS 19.0 统计软件。免疫组化结果表达强度的比较及与临床病理参数之间的关系采用χ2检验。表达结果的相关性分析采用Spearman 相关。以P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 c-Met 及MACC1 在甲状腺乳头状癌中的表达c-Met 蛋白主要定位于甲状腺滤泡上皮细胞的细胞膜及细胞质，见图1。甲状腺乳头状癌中c-Met 蛋白阳性率为51/60（85.00%），高于良性甲状腺疾病中的6/30（20.00%），差异有统计学意义（χ2=36.388，P＜0.05）；MACC1 蛋白主要定位于甲状腺滤泡上皮细胞的细胞质，见图2。甲状腺乳头状癌中MACC1 蛋白表达阳性率为40/60（66.67%），高于良性甲状腺疾病中的2/30（6.67%），差异有统计学意义（χ2=28.929，P＜0.05）。

图1 c-Met 在甲状腺乳头状癌及良性甲状腺组织中的表达（EnVision×100）

图2 MACC1 在甲状腺乳头状癌及良性甲状腺组织中的表达（EnVision×100）

2.2 c-Met 蛋白及MACC1 蛋白在甲状腺乳头状癌中表达的相关性 Spearman 相关性检验显示，在甲状腺乳头状癌中c-Met 蛋白与MACC1 蛋白的表达呈正相关（r=0.394，P＜0.05），见表1。

表1 c-Met 和MACC1 表达的相关性

2.3 c-Met 蛋白及MACC1 蛋白与甲状腺乳头状癌患者临床病理特征的关系 MACC1 蛋白在有无淋巴结转移的甲状腺乳头状癌的阳性表达率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；c-Met 蛋白在有无淋巴结转移的甲状腺乳头状癌的阳性表达率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；而不同年龄、性别、肿块大小c-Met 蛋白及MACC1 蛋白阳性表达率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 c-Met 和MACC1 在不同患者中的表达（n，%）

3 讨论

c-Met 基因定位于人7 号染色体长臂（7q31），其编码产物主要存在于上皮细胞膜和细胞质中，是受体酪氨酸蛋白激酶家族中的成员，包含7 个外显子和6 个内含子。MACC1 作为HGF/c-Met 信号通路的一个关键调节因子，在细胞核内与c-Met 的启动子结合后可在转录水平上调节c-Met 的表达[1]。近几年国内外研究发现，MACC1、c-Met 蛋白在结肠癌[4]、胃癌[2]、肺癌[3]、骨肉瘤[6]等多种常见肿瘤中高表达，且与肿瘤的发生发展有相关性。另外最近几年，针对c-Met 及MACC1 与疾病发生的具体机制也在做深入的研究[7-10]，胃癌及胆管癌中MACC1 可以通过TWIST1/VEGF-A 信号通路促使血管形成，从而诱导肿瘤的进展[11，12]；Zheng D 等[13]证实LncRNA MACC1-AS1/MACC1 通过调节新陈代谢活动促进胶质瘤的发展。还发现MACC1 除了之前发现的和HGF/MET 通路的关系外，还与SP1[14]等其他信号分子相关。Hohmann T 等[15]发现MACC1 还可以促进胶质母细胞瘤细胞运动的改变。还有学者探讨了MACC1 的多态性对肝细胞肝癌的影响及临床参数相关性[16]。国内也有报道证实c-Met 在甲状腺乳头状癌中高表达[17，18]。马泽忠等[19]发现在甲状腺乳头状癌的血清中MACC1 高表达。也有文献报道在乳腺癌中血清MACC1 是一个新的预测指标[20]。但MACC1蛋白在甲状腺乳头状癌石蜡切片中的表达罕见报道。

本研究结果显示，c-Met 及MACC1 蛋白在甲状腺乳头状癌中的阳性表达率均高于良性甲状腺疾病，差异有统计学意义（P＜0.05）；Spearman 相关性检验结果表明，c-Met 与MACC1 蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达呈正相关（r=0.394，P＜0.05）；MACC1 蛋白在有无淋巴结转移的甲状腺乳头状癌的阳性表达率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；而不同年龄、性别、肿块大小c-Met 蛋白及MACC1 蛋白阳性表达率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；c-Met 蛋白在有无淋巴结转移的甲状腺乳头状癌的阳性表达率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。既往的文献报道均显示c-Met 在甲状腺乳头状癌中高表达，但c-Met与不同临床病理参数如之间的关系不同，分析原因可能与选取标本不同、试剂厂商不同、实验条件不同等多因素相关，今后还需要收集更多标本及用更多论文数据来综合分析判断。c-Met 和MACC1 二者在甲状腺乳头状癌发生、发展过程中的具体协作机制有待进一步研究。

综上所述，MACC1 及c-Met 蛋白可能参与了甲状腺乳头状癌的发生发展过程，在甲状腺乳头状癌的发生及演进过程中发挥重要的作用，MACC1 的发现为HGF/c-Met 通路研究提供了新的思路，为今后甲状腺癌的诊断及靶向治疗提供新的方向。