几种抗生素和手术季节对马氏珠母贝育珠贝成活率、留核率和商品珠率的影响

梁飞龙，邓岳文

(广东海洋大学 珍珠研究所，广东 湛江 524025)

引 言

马氏珠母贝(Pinctadafucatamartensii)又称合浦珠母贝(Pinctadafucata)，是中国养殖海水珍珠的最主要珍珠贝，养殖区位于广东、广西和海南沿海地区，其中广东和广西沿海生产的海水珍珠又称为南珠，雷州半岛为主产区[1]。海水珍珠培育包括植核贝的养殖、手术前处理、切片和植核、手术后休养、育珠贝养殖和收获珍珠等步骤[2]。尹立鹏等[3]进行了贝龄对马氏珠母贝育珠效果的影响研究、符韶等[4]比较了不同壳色系马氏珠母贝育珠结果、IWAI等[5]研究了性别对育珠效果的影响，梁飞龙等[6]、邓陈茂等[7]进行了马氏珠母贝手术前处理研究，翁雄等[8]、符韶等[9]、张博等[10]进行了植核技术研究，ATSUMI等[11-12]、LI等[13]、王庆恒等[14]、邓远球等[15]进行了育珠贝养殖技术研究。马氏珠母贝在植核时受到严重创伤，手术工具、珠核和移植小片消毒处理不规范会造成手术创口和移植小片感染，导致育珠贝术后大量死亡和影响移植小片形成珍珠囊分泌珍珠质；手术季节关系到贝体植核时的生理状况，从而影响到育珠贝成活率、留核成珠率和商品珠率。本研究比较了几种常用抗生素对马氏珠母贝手术工具、珠核和移植小片的处理技术，探讨了手术季节对马氏珠母贝植核效果的影响，为马氏珠母贝珍珠培育提供了技术支持。

1 材料和方法

1.1 实验材料

实验贝：湛江市雷州覃斗镇后洪村海区人工养殖的马氏珠母贝“海选1号”群体，贝体壳形端正，鳞片锐利，闭壳有力，贝壳表面光洁。手术贝：贝龄2.0龄，壳高6.0～6.5 cm，经适当的手术前处理，外套膜呈半透明。小片贝：贝龄1.0—1.5龄，壳高5.0～5.5 cm，生长线明显，壳内表面珍珠层呈虹彩色或者银白色。

珠核：直径5.8～6.2 mm，淡水丽蚌贝壳研磨而成。

养殖笼具：休养笼为锥形笼，高20 cm，底径35 cm，网径2.0 cm×2.0 cm。育珠笼为片笼，长72 cm，宽50 cm，网径3.0 cm×3.0 cm，分为4隔，每隔装贝7～8只。

1.2 实验方法

实验1，设立头孢克肟、四环素、阿奇霉素和罗红霉素4个实验组，分别使用500、1 000和1 500 mg/L的浓度浸泡手术工具和珠核，每90 min更换一次处理液，同时用相同浓度处理液滴加在移植小片上保养处理3—5 min，每浓度组设3个重复组，每重复组植核1 200只贝，评估抗生素种类和浓度对马氏珠母贝育珠贝成活率、留核率和商品珠率的影响。

实验2，分别在2017年春季(4月6—7日)、夏季(6月6—8日)和秋季(10月6—8日)进行植核育珠，春季、夏季和秋季各分3组进行植核，每季植核6 000只贝。比较手术季节对育珠贝成活率、留核率和商品珠率的影响。

采取先送核后送片的方法进行植核手术，每贝植入珠核2颗，植核位置为“左袋”和“右袋”[2]。完成植核手术的手术贝，按照每笼35～40只的密度腹部向上密排于锥形休养笼中，吊养于浮笩休养，吊养水深150～200 cm，每2—3 d检查一次育珠贝的恢复状况同时清除死亡的育珠贝，调整养殖密度。休养期结束后，将育珠贝移到片笼中进行珍珠育成，每笼装贝28～32只，吊养水深100～150 cm，按常规方法进行育珠贝养殖管理。

育珠贝休养时间为23—26 d，育珠时间为10个月。

1.3 数据处理分析

育珠贝成活率、留核率和商品珠率计算方法如下：

(1)

(2)

(3)

参照珍珠分级国家标准GB/T 18781-2008的规定，商品珍珠达到下列标准：珍珠形状A3级以上，珍珠形状近圆形、圆形和正圆形；珍珠光泽D级以上，反射光较弱、表面能照见物体；光洁度C级以上，有较小的瑕疵，肉眼易观察到；珍珠层厚度D级以上，珍珠层厚度大于0.3 mm。

采用文献资料的方法比较各实验组育珠指标差异[16-17]，利用双因素方差分析比较抗生素种类和浓度对育珠贝成活率、留核率和商品珠率的影响，如果影响显著，用最小显著极差法(LSR)进行多重比较，差异的显著水平设为P<0.05。利用单因素方差分析植核季节对育珠贝成活率、留核率和商品珠率的影响，如果影响显著，用最小显著差数(LSD)检验进行各处理组平均数的比较，差异的显著水平设为P<0.05。

2 结果与分析

2.1 几种常用抗生素对手术工具、珠核和移植小片的处理效果

几种抗生素对马氏珠母贝手术工具、珠核和移植小片处理的育珠贝成活率、留核率和商品珠率如表1所示，方差分析结果如表2所示。

表1 实验1各组合育珠性状比较

2.1.1 几种抗生素对马氏珠母贝手术工具、珠核和移植小片处理的育珠贝成活率

从表2可见，双因素方差分析显示，不同抗生素处理组育珠贝成活率差异不显著(P>0.05)，不同浓度处理组间差异显著(P<0.05)，抗生素种类与浓度之间无交互效应(P>0.05)。为了减少误差，将互作变异合并到误差项中重新对药物种类、浓度进行F检验，结果表明不同抗生素处理的育珠贝成活率差异不显著，因此对药物浓度各水平之间作多重比较。结果显示，浓度500 mg/L组育珠贝成活率最低(28.99%)，显著低于1 500 mg/L(33.02%)和1 000 mg/L(31.53%)组，1 500 mg/L和1 000 mg/L组差异不显著，因此适合使用1 000 mg/L和1 500 mg/L的抗生素对植核工具、珠核和移植小片进行消毒处理。

2.1.2 几种抗生素对马氏珠母贝手术工具、珠核和移植小片处理的育珠贝留核率

从表2可见，抗生素种类与浓度交互作用效应极显著(P<0.05)，抗生素种类和浓度对育珠贝的留核率具有显著影响，因此对水平组合的育珠贝留核率平均数进行多重比较，结果如表3所示。从表3可见，浓度1 500 mg/L和1 000 mg/L头孢克肟、四环素，以及1 500 mg/L阿奇霉素组育珠贝留核率显著高于其他处理组合组(P<0.05)，其中浓度1 500 mg/L头孢克肟、四环素和1 000 mg/L头孢克肟组的育珠贝留核率差异不显著，1 500 mg/L四环素和1 000 mg/L头孢克肟、四环素，以及1 500mg/L阿奇霉素之间差异不显著。因此，马氏珠母贝植核工具、珠核和移植小片处理的抗生素第一选择为头孢克肟和四环素，浓度为1 500 mg/L和1 000 mg/L，第二选择为1500 mg/L阿奇霉素。

表2 实验1抗生素种类和浓度对育珠贝成活率、留核率和商品珠率影响的方差分析

表3 各组合马氏珠母贝育珠贝留核率平均数的多重比较结果

2.1.3 几种抗生素对马氏珠母贝植核工具、珠核和移植小片处理的育珠贝商品珠率

表2双因素方差分析表明，不同抗生素种类和浓度处理的马氏珠母贝育珠贝商品珠率差异显著(P<0.05)，抗生素种类与浓度之间无显著交互效应(P>0.05)。为了减少误差，将互作变异合并到误差项中重新对药物种类、浓度进行F检验，方差分析显示抗生素种类和浓度对育珠贝商品珠率无显著交互作用，利用LSR进行育珠贝商品珠率多重比较，结果显示头孢克肟组的商品珠率最高(85.7%)，显著高于其他抗生素处理组(P<0.05)，其次是阿奇霉素组(82.64%)和四环素组(80.96%)，两者间差异不显著(P>0.05)，罗红霉素组(78.44%)显著低于其他处理组(P<0.05)；浓度500 mg/L组的育珠贝商品珠率显著低于1 500 mg/L组和1 000 mg/L组，1 500 mg/L和1 000 mg/L组差异不显著。因此，马氏珠母贝植核工具、珠核和移植小片消毒处理的合适抗生素为头孢克肟、阿奇霉素和四环素，合适处理浓度为1 000 mg/L和1 500 mg/L。

2.2 季节对马氏珠母贝植核育珠效果的影响

不同手术季节的马氏珠母贝植核育珠结果如表4所示，不同季节手术的育珠贝成活率差异显著(P<0.05)，秋季(10月)植核的育珠贝成活率最高(51.93%)，夏季(6月)植核的育珠贝成活率最低(29.33%)。不同季节植核的育珠贝留核率和商品珠率差异不显著(P>0.05)。

表4 马氏珠母贝不同季节植核育珠的结果

3 讨论

3.1 几种抗生素对马氏珠母贝育珠效果的影响

根据化学结构，抗生素分为四环素类、大环内酯类、β-内酰胺类和氨基糖苷类，四环素类抗生素是20世纪40年代末发现的广谱抗生素，能够抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的活性，具有抗炎、抗凋亡和神经保护作用[18]。头孢克肟为第三代头孢菌素，属β-内酰胺类抗生素，对革兰氏阴性菌具有强的抗菌活性，对呼吸道感染、尿路感染、耳鼻喉科感染具有显著的疗效[19]。阿奇霉素和罗红霉素是大环内酯类抗生素，适用于敏感细菌引起的呼吸道、尿道、生殖道、皮肤和软组织感染[20-22]。

植核育珠过程中，对珠核和移植小片进行处理的作用是提高移植小片的活力，促进移植小片细胞增殖快速形成珍珠囊细胞分泌珍珠质，防止感染，促进创口愈合，提高小片与珠核、组织与珠核的亲和力，目的是提高育珠贝的成活率、留核成珠率和珍珠质量[2,23-27]。例如，金启增等[23]使用珍珠生长激素浸泡移植小片，育珠期6个月的实验组育珠贝正圆珠率、白色珍珠比例和珠层厚度比对照组提高了9.28%、22.57%和52 μm。邓陈茂等[2]指出，用3%聚乙烯吡咯烷酮(简称PVP)或者1/5 000荧光素伊尔名诺R2或者0.2%三磷酸腺苷二钠(ATP)海水溶液浸泡小片能够显著提高珍珠质量，用1/50 000金霉素海水浸泡移植小片，同时用十万分之一的金霉素海水处理手术工具和珠核育珠效果更佳。王梅芳等[25]用匹配的处理液对小片和珠核处理的育珠贝脱核率为31%～32%，对照组为46.2%，育珠贝成活率和百贝收珠率显著高于对照组。本实验结果显示，使用1 000 mg/L和1 500 mg/L的头孢克肟、四环素和阿奇霉素对马氏珠母贝手术工具、珠核和移植小片进行处理，能够显著提高育珠贝的成活率、留核率和商品珠率。引起海洋贝类致病的细菌主要为革兰氏阴性菌(G-)，是条件致病菌，通过改善养殖条件和使用合适的抗生素可以预防和治疗条件致病菌引起的疾病[28-29]。温崇庆等[30]从马氏珠母贝手术创口分离到5个种的弧菌，其中4种为海水动物常见致病菌，属于条件致病菌。头孢克肟对革兰氏阴性菌抑制作用较强，而海水中主要致病细菌为革兰氏阴性菌，因此头孢克肟的处理效果最佳。四环素对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的活性具有抑制作用，效果次之。阿奇霉素和罗红霉素对革兰氏阴性菌的抑制作用较弱，效果又次之。笔者认为，利用合适浓度的抗生素对马氏珠母贝手术工具中的开口针、通道针和送核器等进行消毒处理，可以减少送核和送片过程中，工具对切口、通道和核位周围组织的感染。其次，对珠核进行消毒处理，能够有效减少珠核从切口送到核位过程中，以及珠核到达核位后对贝体周围组织的感染，并且经消毒处理的珠核有利于移植小片在珠核表面增殖形成珍珠囊分泌珍珠质。第三，抗生素可以抑制或杀灭移植小片上附着的病原微生物，因此经消毒保养处理的移植小片能够快速形成珍珠囊，提高育珠贝的商品珠率和珍珠质量。

3.2 手术季节对马氏珠母贝育珠效果的影响

手术季节与育珠贝养殖环境和植核母贝性腺发育水平密切相关，不同季节的海区环境条件如水温、流速、海水浑浊度、饵料生物的丰度不同，其次不同季节的植核母贝生理状态不同，导致季节影响到育珠效果。KY等[31]观察到，秋季(水温25.1～26.1 ℃)植核的珠母贝育珠贝45 d平均死亡率为1.2%、留核率91.1%，而春季(水温28.1～29.4 ℃)植核的育珠贝死亡率为8.0%、留核率79.4%，后者育珠贝死亡率是前者的6倍多，留核率后者比前者低11.7%；KY等[31]认为春季高温和随后夏季高水温导致低溶氧，以及降水带来的低比重和有毒有害藻类、细菌的大量繁殖是造成春季植核的育珠贝成活率和留核率比秋季低的主要原因。本实验表明，10月植核的育珠贝成活率(51.93%)显著高于4月(32.37%)和6月(29.33%)植核的育珠贝，但成活的育珠贝留核率和和商品珠率差异不显著。育珠贝的成活状况与Ky研究结果相似。笔者认为，6月至9月是雷州半岛沿海高温、暴雨和台风多发季节，水环境的温度、盐度急剧变化，影响了育珠贝手术后的恢复和存活。其次，饵料生物的组成和种类发生变化。第三，7月强劲的西南风将水体搅混浊，影响育珠贝的呼吸和摄食。第四，10月后育珠贝的性腺发育水平低于春季和夏季，贝体处于比较适合植核的状态。因此，4月和6月植核的育珠贝成活率、留核率和商品珠率比10月植核的育珠贝低。