子宫肌瘤组织中miR-590、miR-16 表达的临床意义

黄 燕 周玉珍 潘小虹 朱倩梦 张玉英▲

1.江苏省苏州市中西医结合医院妇产科，江苏苏州 215101；2.苏州大学附属第二医院妇产科，江苏苏州 215100

子宫肌瘤是女性常见的良性盆腔肿瘤，患者可能 出现月经过多、盆腔疼痛、反复流产等症状，约60%的绝经前妇女会受其影响[1-2]。微RNA（microRNA，miRNA）为单链、内源性、非编码RNA，由21～25 个核苷酸组成，参与细胞增殖、分化等多个生物学过程，具有十分重要的作用[3-4]。有相关研究表明[5-6]，miR-590、miR-16 均是miRNA 家族中的成员，表达水平与肿瘤的发生、发展密切相关。目前临床中对子宫肌瘤组织中miR-590、miR-16 表达的临床意义尚不清楚。鉴于此，本研究探讨子宫肌瘤组织中miR-590、miR-16表达的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018 年10 月至2020 年8 月江苏省苏州市中西医结合医院收治的186 例子宫肌瘤患者为研究组，并选择同一时间段120 例因子宫脱垂实施手术治疗的患者为对照组。对照组年龄31～64 岁，平均（54.48±4.36）岁；体重指数（body mass index，BMI）18.52～28.87 kg/m2，平均（26.32±1.27）kg/m2。研究组年龄32～65 岁，平均（53.84±4.13）岁；BMI 18.38～28.63 kg/m2，平 均（26.58±1.31）kg/m2；子宫肌瘤大小1～6 cm，平均（3.81±1.02）cm；子宫肌瘤数目1～5 个，平均（2.18±0.65）个。两组年龄、BMI 比较，差异无统计学意义（P ＞0.05），具有可比性。本研究经江苏省苏州市中西医结合医院医学伦理委员会批准同意。

纳入标准：研究组术前经阴道超声和核磁共振检查[7]并经组织病理学诊断证实为子宫肌瘤；符合手术指征，且行子宫肌瘤切除术治疗，手术由同一组医生完成；患者及家属签署知情同意书。排除标准：合并生殖系统肿瘤或其他恶性肿瘤；全身性感染或有免疫系统疾病；严重盆腔粘连或盆腔急性炎症；凝血功能障碍；血液系统疾病；严重肝肾功能障碍或衰竭；妊娠或哺乳期妇女；盆腔腹部巨大肿块。

1.2 分析方法

1.2.1 样本收集及miR-590、miR-16 表达水平检测术中对子宫组织样本进行收集，立即放入液氮中保存，后转入-80℃超低温冰箱中保存待测。实时定量PCR（real-time quantitative PCR，qRT-PCR）检测子宫肌瘤组织与正常子宫组织miR-590、miR-16 水平：取子宫组织，使用Trizol 法提取组织miRNA，并检测miRNA 的质量和浓度，将miRNAs 反转录为cDNA，miR-590、miR-16 及内参U6 序列：miR-590 正向引物：5’-TGGCGGCACCTGACCTACCTG-3’，反向引物：5’-TATTGCAGTCACGGTACGGTA-3’，产物长度124bp；miR-16 正向引物：5’-CTCCAGGTTCAGGTAACATG-3’，反向引物：5’-CCGGGTAACACTAGTCGTAG-3’，产物长度118 bp；U6 正向引物：5’-ACCGCTTGCAAAGGCTGCA-3’，反向引物：5’-CCAGGGGTCCGAGGTACGT-3’，产物长度115 bp。反应体系为20 μl：2×SYBR 混合物10 μl，10×cDNA 模板1 μl，正反向引物各1 μl，H2O 7 μl，每样品3 个重复。反应程序：95℃预变性3 min，95℃10 s、60℃30 s，72℃2 min，35 个循环，72℃延伸10 min，在PCR 仪上进行反应，以U6 作为内参按照2-ΔΔCt算法分析基因相对定量表达。

1.2.2 临床资料收集 收集可能影响子宫肌瘤发生的相关资料，主要包括年龄、BMI 及是否合并高血压、糖尿病、高脂血症，产次、流产次数、初潮年龄，是否痛经、月经紊乱，月经情况、遗传病史、生殖道炎、避孕药服用史、剖宫产史、白细胞计数（white blood cell count，WBC）及子宫组织miR-590、miR-16 表达水平。

1.3 统计学方法

采用SPSS 25.0 软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（）表示，采用t 检验；计数资料以例数或百分率表示，采用χ2检验；采用多因素logistic 回归分析探讨子宫肌瘤发病的影响因素；采用Pearson相关性分析明确r 值。以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组子宫组织miR-590、miR-16 表达水平比较

研究组miR-590 表达水平高于对照组（P ＜0.05），miR-16 表达水平低于对照组（P ＜0.05）。见表1。

表1 两组子宫组织miR-590、miR-16 表达水平比较（）

表1 两组子宫组织miR-590、miR-16 表达水平比较（）

2.2 两组临床资料比较

研究组合并糖尿病、月经紊乱、生殖道炎占比高于对照组，流产次数多于对照组（P ＜0.05）。见表2。

表2 两组临床资料比较

2.3 影响子宫肌瘤发生的多因素logistic 回归分析

以子宫肌瘤发生情况为因变量（发生=1，未发生=0）；合并糖尿病，流产次数，月经紊乱，生殖道炎，子宫组织miR-590、miR-16 表达水平为自变量，相关赋值信息见表3。logistic 回归分析结果显示，月经紊乱，生殖道炎，子宫组织miR-590、miR-16 表达水平是子宫肌瘤发生的影响因素（P ＜0.05）。见表4。

表3 自变量赋值

表4 影响子宫肌瘤发生的多因素logistic 回归分析

2.4 miR-590、miR-16 表达水平与子宫肌瘤大小、数目的关系

miR-590 表达水平与子宫肌瘤大小、数目呈正相关（r ＞0，P ＜0.05），miR-16 表达水平与子宫肌瘤大小、数目呈负相关（r ＜0，P ＜0.05）。见表5。

表5 miR-590、miR-16 表达水平与子宫肌瘤大小、数目的关系

3 讨论

子宫肌瘤是一种能够根治的良性肿瘤，但易使患者产生心理负担，同时会严重影响患者的日常生活、生育功能[8-10]。通过对子宫肌瘤组织中miR-590、miR-16 表达的临床意义进行分析探讨，可为临床诊断、防治提供一定的理论基础，对子宫肌瘤患者具有十分重要的临床意义。

miRNA 由21～25 个核苷酸组成，其异常表达与器官纤维化、肿瘤细胞的侵袭、迁移等有关[11-12]。随着学者们对分子生物的深入探讨，越来越多的miRNA被发现并进行了研究[13-15]。有研究表明，miR-590 在不同类型的肿瘤中的表达存在一定的差异，可通过不同的信号通路对肿瘤增殖、凋亡等生物学行为产生不同的影响[11]。miR-16 是近年来新发现的与血管生成相关的miRNA，相关研究表明[16-18]，miR-16 在乳腺癌、胃癌中呈低表达，在体外可明显抑制肿瘤细胞的增殖、迁移能力。

本研究结果显示，研究组miR-590 表达水平高于对照组，miR-16 表达水平则低于对照组，提示miR-590 在子宫肌瘤组织中呈高表达，miR-16 则呈低表达。本研究结果表明，研究组合并糖尿病、月经紊乱、生殖道炎占比高于对照组，流产次数多于对照组。经logistic 回归分析结果提示，月经紊乱、生殖道炎、子宫组织miR-590、miR-16 表达水平是子宫肌瘤发生的影响因素。临床中需逐一控制各项因素的影响，以降低子宫肌瘤的发生率。薛宏[19]研究结果表明，月经紊乱、生殖道炎等是子宫肌瘤发生的相关因素，与本研究结果相符。月经紊乱为子宫肌瘤发生的相关因素，可能是由于发生月经紊乱后多采用激素疗法进行治疗，易导致患者体内激素水平发生紊乱，尤其是雌激素水平的上升，子宫肌瘤又为激素依赖性疾病，故而月经紊乱患者子宫肌瘤的发病率较高[20]。生殖道炎多因症状较轻，不易引起患者注意，导致病原体长期刺激子宫内膜使其增生增长，致使子宫肌瘤的发生[21]。miR-590 是miRNA 家族中的成员，在胃、子宫等组织中均有表达，Ma 等[22]研究表明，miR-590 在肺癌、子宫颈鳞状细胞癌中的表达明显增加。miR-16 也是miRNA 家族中的成员，相关研究表明[23-25]，miR-16 表达水平与胃癌、前列腺癌等恶性肿瘤的发生密切相关，可作为辅助诊断的重要参考指标。本研究发现，miR-590 表达水平与子宫肌瘤大小、数目均呈正相关，miR-16 表达水平与子宫肌瘤大小、数目均呈负相关，提示子宫肌瘤组织中miR-590、miR-16 表达水平可能与子宫肌瘤的发生存在一定的相关性。

综上所述，miR-590 在子宫肌瘤组织中呈高表达，miR-16 则呈低表达，且miR-590、miR-16 表达水平与子宫肌瘤的发生相关，对疾病的早期筛查和诊断具有一定的参考价值，本研究的不足之处在于样本量较小，在后续研究中需扩大样本量进行大规模、多中心临床试验进一步进行研究。