度普利尤单抗对成人中重度特应性皮炎皮肤屏障功能的影响

黄洁茹 李东宁 段函

1.锦州医科大学研究生学院，辽宁锦州 121001；2.锦州医科大学附属第一医院皮肤科，辽宁锦州 121011

特应性皮炎（atopic dermatitis，AD）是一种多因素疾病，其发病机制尚未完全阐明，皮肤屏障功能损害和免疫功能紊乱是AD 发生、发展和慢性化的重要原因。皮肤屏障破坏和皮肤炎症相辅相成。虽然抗炎治疗一直是AD 治疗的核心，但研究发现皮肤屏障功能也发挥重要作用。研究者逐渐认识到皮肤屏障功能障碍是AD 发病的关键因素，皮损和非皮损部位皮肤屏障破坏被认为是AD 重要的和较早出现的特征之一。研究表明，AD 患者皮肤角质层中神经酰胺（ceramide，Cer）含量显著降低。Cer 的缺乏可引起皮肤屏障功能受损，其表现为皮肤含水量降低或经皮水分丢失（transepidermal water loss，TEWL）增加。目前，度普利尤单抗被广泛用于治疗成人中重度AD，它基于白细胞介素–4（interleukin–4，IL–4）/白细胞介素–13（interleukin–13，IL–13）炎症通路，从Th2 细胞优势免疫的发病机制上解决AD 的难治现状。但度普利尤单抗对成人中重度AD 皮肤屏障的研究较少。本研究拟通过检测AD 患者和健康对照者的皮肤屏障功能相关指标，以评价度普利尤单抗对成人中重度AD 患者的皮肤屏障功能改善情况，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2020 年9 月至2021 年10 月于锦州医科大学附属第一医院皮肤科门诊就诊的20 例成人中重度AD 患者纳入研究组，选取同期于该院体检的20 名健康志愿者纳入对照组。纳入标准：①年龄18～60岁，性别不限；②临床诊断符合《中国特应性皮炎诊疗指南（2020 版）》中的诊断标准，且AD 评分≥25 分的中重度AD 患者；③参与本研究前4周内前臂掌侧被检测部位皮肤未外用保湿润肤剂及其他药物；④参与本研究前3 个月内未接受过系统治疗及紫外线光疗；⑤依从性好，能配合完成研究方案并及时随访。排除标准：①对医用胶带过敏者；②妊娠及哺乳期女性；③同时患有其他皮肤病者；④依从性差或不愿在研究期间遵守研究方案者。研究期间患者被检测部位皮损加重，无法配合当前方案时，允许退出研究。本研究经锦州医科大学附属第一医院伦理委员会审批通过（批件号：202224），患者自愿签署知情同意书。

1.2 仪器与试剂

快速液相色谱–质谱联用仪（美国 Eksigent LC–100 和AB SCIEX Triple TOF 5600），多功能皮肤测试仪（德国CKMPA10），艾卡VORTEX 3 涡旋混匀器（德国IKA），VS22–80AA 超声波清洗机（无锡沃信仪器制造有限公司），TGL–20M 高速冷冻离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司），VSD150–2 氮吹仪（无锡沃信仪器制造有限公司）。正己烷、乙醇、乙腈、异丙醇（色谱纯，美国Fisher Scientific）；Cer（d18∶1/26∶0/18∶1）购自美国Avanti Polar Lipids 公司；内标溶液（含19∶0 Cer 10μg/ml 的异丙醇–乙腈溶液，自配）。

1.3 研究方法

1.3.1 治疗方法 AD 患者使用度普利尤单抗［注册证号：S20 200017；生产厂商：Sanofi Winthrop Industrie；规格：300mg（2.0ml）/支（预充式注射器）］治疗，首次600mg 皮下注射，之后每2 周注射1 次，每次300mg，总疗程16 周；同时每天2 次外用保湿润肤剂作为基础护理，并严格避开前臂掌侧被检测部位的皮肤。分别于治疗前和治疗8 周、12 周、16周后评估患者的湿疹面积及严重程度指数（Eczema area and severity index，EASI），并检测前臂掌侧皮损部位的皮肤含水量和TEWL，同时采集距离此部位5cm 的非皮损部位皮肤角质层样本。同样的方法检测对照组。

1.3.2 皮肤含水量与TEWL 检测 被检者处于温度18～23℃、相对湿度40%～56% 的环境中，避免阳光照射，检测前静坐30min；75% 乙醇消毒皮肤测试仪探头，在前臂掌侧待检测部位做好标记；用Corneometer CM825 探头检测标记部位皮肤含水量、Tewameter TM300 探头检测TEWL，测定3 次取平均值，每次检测部位一致。

1.3.3 皮肤角质层Cer 检测 标记前臂掌侧待检测部位皮肤；75%乙醇消毒皮肤，操作人员戴手套，剪下面积为2.5cm×3.0cm 的医用胶带（美国3M 公司），粘取标记部位皮肤，同一部位反复粘贴5 次；取样后的胶带放入10ml 离心管中，并于-80℃冰箱中保存备用。采集的所有角质层样本统一进行预处理：从冰箱中取出存有样本的离心管，加入5ml 配比液（正己烷∶乙醇为95∶5）和20μl 内标溶液，放置于涡旋混匀器上振荡混匀，并用超声提取20min，以使胶带上粘贴的表皮充分溶解，用镊子取出胶带，再以12 000 转/min 离心8min；将上清液用移液枪移至15ml 离心管，余下残渣加入5ml 配比液按上述步骤再重复提取一次，合并两次提取的滤液；将合并后的离心管一同放于氮吹仪（40℃）上吹至1.0ml，再次涡旋混匀，然后以同样的转速离心5min；取200μl上清液置于样品瓶的内衬管中；取2μl 样品进样，用高效液相色谱–质谱联用法对Cer 进行定性定量分析。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组研究对象的一般情况比较

研究组患者20 例，其中因病情活动无法继续当前研究方案而自愿退出者2 例，脱落率10%，18 例患者纳入研究。两组研究对象的性别和年龄比较差异均无统计学意义（>0.05），见表1。

表1 两组研究对象的一般情况比较

2.2 两组研究对象的皮肤屏障功能相关指标比较

研究组患者治疗前后的皮肤角质层Cer 含量、皮肤含水量均显著低于对照组（Welch=171.010，=56.915；＜0.05），TEWL 与对照组比较差异有统计学意义（=41.823；＜0.05）；治疗前和治疗8周、12 周后，TEWL 均高于对照组（<0.05）；治疗16 周后TEWL 接近于对照组，差异无统计学意义（=0.093）。见表2。

表2 两组研究对象的皮肤屏障功能相关指标（）

2.3 研究组患者治疗前后的皮肤屏障功能相关指标比较

治疗后，研究组患者的皮肤角质层Cer 含量、皮肤含水量逐渐升高，治疗12 周、16 周后以上指标均显著高于治疗前（<0.05）。治疗后，研究组患者的TEWL 逐渐降低，治疗8 周、12 周、16 周后的TEWL均显著低于治疗前（<0.05），见图1。

图1 研究组患者治疗前后的皮肤屏障功能相关指标比较

2.4 研究组患者治疗前后的EASI 评分比较

治疗后，研究组患者的EASI 评分显著下降（Welch=103.795，<0.05）；治疗12 周后与治疗8周后比较，EASI 评分差异无统计学意义（=0.355）；治疗16 周后较治疗8 周、12 周后，EASI 评分降低，差异均有统计学意义（<0.05），见图2。

图2 研究组患者治疗前后的EASI 评分比较

2.5 研究组患者皮肤屏障功能相关指标与EASI 的相关性分析

皮肤角质层Cer 含量、皮肤含水量与EASI 均呈负相关（=-0.532，<0.001；=-0.559，<0.001），TEWL与EASI 呈正相关（=0.622，<0.001），见图2。

3 讨论

近年来，AD 的发病率不断上升，成人患病率为2%～8%，其中约20%为中重度AD，给个人和家庭带来很大影响。环境与遗传因素之间复杂的相互作用影响AD 患者的免疫系统及表皮的结构和功能，预防和治疗的重点是恢复皮肤屏障功能。研究提示，度普利尤单抗可减少与AD 相关的表皮异常，减轻AD 患者皮肤炎症，其机制可能与皮肤屏障功能的改善有关。本研究通过检测皮肤角质层Cer 含量、皮肤含水量和TEWL 并评估疾病严重程度（EASI 评分），证实度普利尤单抗可改善成人中重度AD 的皮肤屏障功能和临床症状。

本研究结果表明，在治疗前，AD 患者EASI 评分明显升高，但治疗第8 周开始，EASI 评分已明显下降，治疗16 周后基本恢复健康。这些结果与临床研究一致。其他研究结果也显示出度普利尤单抗治疗的积极作用。笔者观察到，在治疗前皮肤角质层Cer 含量和皮肤含水量均明显降低、TEWL 明显增加，使用度普利尤单抗治疗8 周后，皮肤角质层Cer 含量和皮肤含水量未见明显改变，但在治疗12周和16 周后，皮肤角质层Cer 含量和皮肤含水量较治疗前均明显增加，虽然仍显著低于健康水平；而TEWL 在治疗第8 周时已经明显低于治疗前，且在治疗16 周后接近于健康水平。这与既往研究结果类似，表明度普利尤单抗可显著改善皮肤屏障功能。Furuhashi等研究发现，度普利尤单抗治疗后皮损部位的TEWL 迅速减少，但皮肤含水量在半年内没有增加。这与本研究结果不同，造成这种差异的原因尚不清楚，还需要对更多患者进行长期观察研究。度普利尤单抗治疗成人中重度AD 后，皮肤屏障功能不断改善、临床症状逐渐减轻，AD 皮肤屏障功能的恢复与临床严重程度呈负相关。本研究证实，成人中重度AD 患者存在皮肤角质层Cer 含量和皮肤含水量的降低及TEWL 的增加，使用度普利尤单抗治疗可增加AD 患者皮损部位的皮肤含水量、降低TEWL，同时增加非皮损部位的皮肤角质层Cer 含量，减轻皮肤炎症，进而改善皮肤屏障功能。

图3 皮肤屏障功能相关指标与EASI 的相关性分析

本研究表明度普利尤单抗在成人中重度AD 治疗中提供的益处不仅是通过其抗炎作用，还可通过改善皮肤屏障功能的作用应用于临床。度普利尤单抗是一种针对IL–4 受体α 链的全人源单克隆抗体，可阻断IL–4/IL–13 对炎症的协同作用。IL–4 和IL–13 在AD 中过度表达可刺激炎症介质释放并诱发特应性反应，破坏皮肤屏障功能；而皮肤屏障功能的破坏将激活细胞免疫应答，导致皮肤瘙痒及全身炎症反应。此外，IL–4 和IL–13 能有效抑制角质形成细胞中丝聚合蛋白的表达，从而加重表皮屏障功能障碍。度普利尤单抗打破了IL–4/IL–13 诱导的皮肤炎症和屏障功能障碍的恶性循环，通过靶向阻断IL–4Rα 抑制2 型炎症，在不抑制免疫和不增加感染风险的同时，改善皮肤的屏障功能。

本研究对皮肤屏障功能相关指标的检测仅反映皮肤屏障功能的恢复情况，度普利尤单抗恢复成人中重度AD 皮肤屏障功能的具体机制还需进一步深入研究。随着对皮肤屏障修复机制的深入研究，未来可能会开发出更多针对AD 皮肤屏障受损的药物，以改善AD 患者的生活质量。