2019—2020年北疆部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒的抗体检测与分析

常军帅，李 娜，孙琼飞，屈勇刚，梁 晏，张小玉，党瑞莹

（1.石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832003；2.动物疾病防控兵团重点实验室，新疆 石河子 832003）

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）又称猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的，在世界范围内给养猪业造成了巨大的经济损失。PRRSV最早于1987年在美国被报道，由于该病毒既可垂直传播，又可水平传播，在短短的3～5年欧洲和亚洲也相继出现PRRSV[1-2]。我国于1995年从北京某猪场流产胎儿内首次分离出PRRSV[2]。之后的时间，经典蓝耳病毒株在我国各地蔓延，直到2006年夏季，我国多地猪群发生无名高热病。该病主要以体温升高（41 ℃）、呼吸困难、皮肤发红为症状，死亡率高达30%，部分猪场死亡率接近100%，给养猪业造成了毁灭性的打击，后经研究发现该毒株为经典PRRSV的基因序列Nsp2区缺失了30AA，被命名为HP-PRRSV[3]。PRRSV可分为欧洲型和美洲型，在我国主要流行美洲型，但韩国、俄罗斯等国近几年开始流行欧洲型PRRSV，我国也面临着巨大的威胁[4]。猪场存在PRRSV后，很难彻底净化，且一年四季均可发病。PRRSV不仅增加了猪只的死亡率，还严重损害患猪的繁殖和呼吸系统：母猪表现为发情推迟、久配不孕、死胎增多、妊娠后期流产；公猪精液带毒、性欲下降；仔猪多成为僵猪，伴随着呼吸困难、结膜水肿等症状；肥育猪的料重比增高[5]。对于PRRSV，生产中常采用疫苗免疫来进行预防。PRRSV疫苗最常见的为弱毒苗和灭活苗，灭活苗可同时预防经典PRRSV和HP-PRRSV，对母源抗体干扰性小，运输、储存方便，是预防蓝耳病的首选[6]。

为了解北疆部分地区PRRSV的免疫状况，本试验在2019—2020年对采集的1 006份血样进行PRRSV抗体检测，根据结果对各猪场、各猪群进行免疫程序优化，以减少PRRSV及其相关疾病的发生。

1 材料

1.1 样品

2019年1月至2020年12月从新疆石河子市、伊犁哈萨克自治州、阿克苏市、巴音郭楞蒙古自治州、奎屯市、塔城地区，按照各猪群总量5%～10%的比例随机采集了1 006份血样，立即分离血清，送至石河子大学动物科技学院进行ELISA（酶联免疫吸附试验）抗体检测。其中哺乳仔猪184份、保育猪112份、肥育猪96份、后备猪104份、繁殖母猪382份、种公猪128份。

1.2 材料和仪器

蓝耳病病毒（PRRSV）抗体检测试剂盒购自北京爱德士元亨生物科技有限公司；兽用一次性采血器5 mL为南昌市山力畜牧器械有限公司产品；自动酶标仪购自青岛智汇谷信息技术有限公司。

2 方法

2.1 样品处理

取出试剂，室温平衡30 min后震荡混匀；血清样放至室温。

2.2 ELISA检测方法

首先进行样品稀释，吸取5 μL血清与195 μL样品稀释液吹打混匀后，吸100 μL到抗原包被孔内。同时将阴、阳对照100 μL也加入抗原包被孔内作为对照（各两孔）。室温下孵育30 min后，洗涤5次，拍干后每孔加100 μL酶标抗体，相同的条件下再次孵育30 min。再次洗涤拍干，加入100 μL的TMB底物，室温下放置避光处15 min，加入100 μL终止液，在OD650nm下测量数值并记录。

2.3 结果判定

试验成立的标准为阴性对照平均值≤0.15，且阳性对照平均值-阴性对照平均值≥0.15，否则试验不成立，成立后才可计算S/P值。S/P中，S=样品值-阴性对照平均值，P=阳性对照平均值-阴性对照平均值。当S/P≥0.4判定为阳性，S/P＜0.40判定为阴性。

2.4 数据分析

使用SPSS软件对数据进行统计分析，计算各组数据的差异。

3 结果

3.1 不同猪场PRRSV抗体检测结果

在采集的1 006份血清样品中，874份为PRRSV抗体阳性样品，阳性率达86.88%（874/1 006），S/P平均值为1.63。各猪场阳性率均超过了70%，其中A猪场阳性率最高，为92.50%（148/160）；B猪场阳性率最低，为76.60%（72/94）。A猪场的S/P平均值与B、C、D、E、F存在显著差异（P＜0.05）；E猪场的S/P平均值与B、C、D场差异不显著（P＞0.05）。结果见表1。

表1 不同猪场PRRSV抗体检测结果

3.2 不同类别猪群PRRSV抗体检测结果

各类别猪群P R R S V抗体阳性率均超过了70%，其中种公猪阳性率最高，为96.10%（123/128）；哺乳仔猪阳性率最低，为78.80%（145/184）。繁殖母猪的S/P平均值与哺乳仔猪、保育猪、后备猪、种公猪存在显著差异（P＜0.05）；后备猪的S/P平均值与哺乳仔猪、保育猪、肥育猪、种公猪差异不显著（P＞0.05）。结果见表2。

表2 不同类别猪群PRRSV抗体检测结果

4 讨论与分析

养猪业是新疆的支柱性产业之一，为新疆经济的持续增长做出了巨大贡献。PRRSV可危害猪场各个猪群，为养猪业带来了巨大损失。彭晓玲等[7]调查显示，新疆地区规模化养猪场、散养户及屠宰场均含有PRRSV，检出率为0.65%。疫苗免疫作为预防PRRSV的首选，疫苗质量、免疫途径、免疫效果等就显得尤为重要。免疫失败不仅劳力伤财，还为猪场带来巨大的生物安全隐患。ELISA抗体检测方便快捷，可对免疫效果进行评价，在生产中最为常见。

本试验检测结果显示，整体阳性率为86.88%（874/1 006），明显高于国家规定的70%，说明各地区对PRRSV都给予了重视[8]。郑丹阳等[9]检测发现，2019年陕西省规模化猪场的PRRSV抗体合格率为85.06%（5 324/6 259）；邹秀明等[10]2016—2018年期间对怀化市猪场进行的PRRSV抗体阳性率检测结果为75.52%（2 462/3 260），这说明北疆地区对PRRSV的免疫效果要高于我国大部分地区。在各猪场中，B猪场的阳性率最低（76.60%），E猪场的S/P值最低（1.20），这说明这两个猪场存在一定问题，可与A场进行对比，及时找出漏洞，才能保证更加安全的持续生产。在各类别猪群中，种公猪和繁殖母猪的PRRSV的抗体阳性率均超过了90%，说明针对繁殖猪群免疫程序合理。相比而言，后备猪的阳性率有待提高。后备猪的健康与PRRSV抗体水平是猪场持续健康的保障，需维持猪群的高健康度，再配合优秀的生产管理水平，才有可能发挥出后备猪的繁殖潜能，避免疾病的暴发，从而提升猪场效益。

对于PRRSV的预防，不仅需要疫苗的免疫，更需要严格管理和健康饲养。在生产中坚持自繁自养、全进全出的制度，不从PRRSV疫区引种，把好种源关头。从母猪产前35 d开始饲喂营养水平更高的饲料，更有助于增加胎儿对PRRSV的抵抗力。规范猪场消毒程序、进场隔离制度，使PRRS的防控做到全面化、精细化，那么就能实现健康养殖、效益养殖。