羔羊胃颗粒在慢性萎缩性胃炎大鼠中的作用效果及对炎性因子的影响研究

陈昌欣

(福建省泉州市第一医院消化内科,福建 泉州 362000)

慢性萎缩性胃炎(GAS)是常见的一种消化系统疾病,具有反复发作、病程长等特点[1-2]。GAS特征以胃黏膜固有腺体萎缩常伴炎性反应及肠上皮化生常见[3-4]。随着人们饮食结构的改变,生活习惯的变化,GAS发病率呈不断上升趋势,严重影响人们生活质量[5-6]。因此,采取及时有效的治疗慢性萎缩性胃炎方法。羔羊胃颗粒是一种复发制剂,组成包括羔羊胃的提取液和维生素b12,具有健脾消食功效,主要用于慢性胃炎引起的食欲不振、上腹部不适及胀满等。本文研究探讨羔羊胃颗粒在GAS大鼠中的作用效果及对炎性因子的影响,以期为GAS治疗及其作用机制提供参考。现将报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验材料

SD大鼠40只,雄性,体重(180±20)g,由北京维通利华实验动物技术公司提供,许可证号:SCXK(京)2016-0006。大鼠适应性饲养1周,控制室温23±2℃,控制湿度50%～70%。羔羊胃提取物b12颗粒(厂家:新疆生化药业有限公司;国药准字H20140012)。

1.2 主要试剂及仪器

主要试剂:胃动素(MTL)试剂盒(上海恒远生物科技有限公司),胃泌素(MTL)试剂盒(上海恒远生物科技有限公司),白介素-1β(IL-1β)试剂盒(上海恒远生物科技有限公司),白介素-6(IL-6)试剂盒(上海恒远生物科技有限公司),白介素-10(IL-10)试剂盒(上海恒远生物科技有限公司),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)试剂盒(上海恒远生物科技有限公司)。

主要仪器:日本奥林巴斯公司BX53光学显微镜;美国Bio-rad伯乐iMark酶标仪;日立7600型全自动生化分析仪。

1.3 方法

1.3.1 GAS模型制备

给予2%的水杨酸钠溶液,每日2mL灌胃,灌胃前1h禁饮禁食,前3周正常饮食,后3周间日常足量饮食,进行6周。

1.3.2 实验分组及给药方法

40只大鼠随机分为正常组、模型组、低剂量组和高剂量组,各10只。低剂量组给予1.2g/(kg·d)灌胃,每日1次;高剂量组给予4.8g/(kg·d),每日1次;正常组和模型组给予等剂量生理盐水灌胃,每日1次。各组大鼠连续灌胃4周。

1.4 观察指标

1.4.1 胃黏膜病理组织学改变

采用HE染色法评价胃黏膜病理组织学,取胃黏膜组织,采用多聚甲醛固定24h,常规石蜡包埋,HE染色,再于光学显微镜下观察胃黏膜病理组织学改变。

1.4.2 胃黏膜损伤指数

于大鼠全胃,沿胃大弯侧剪开,将全胃展开,冲洗胃黏膜,采用10%福尔马林固定,平铺于解剖显微镜载物台上观察损伤情况,根据Cuth法计黏膜损伤指数。

1.4.3 血清GAS和MTL水平测定

取大鼠静脉血,以10cm半径,3000r/min,离心8min,采集血清标本,于-20℃下保存待测。采用酶联免疫吸附法测定血清GAS和MTL水平,严格依据试剂盒说明书测定。

1.4.4 炎症因子水平测定

取大鼠静脉血,以10cm半径,3000r/min,离心8min,采集血清标本,于-20℃下保存待测。采用酶联免疫吸附法测定血清IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平,严格依据试剂盒说明书测定。

1.5 统计学方法

采用SPSS 25.0软件处理数据。计数资料以例(百分比)表示,采用χ2检验;计量资料均符合正态分布,采用均数±标准差表示,行t/F检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠胃黏膜组织病理学变化

正常组大鼠胃腺体形态规则,胃黏膜厚度正常,固有腺及黏膜层毛细血管无扩张,腺上皮与腺管分界清楚;模型组大鼠固有层腺体减少,排列不规则,胃黏膜不同程度萎缩,且镜下可见异型增生、肠上皮化生病理改变;低剂量组和高剂量组可见胃黏膜腺体数量增多,排列较整齐。见图1。

图1 各组大鼠胃黏膜组织病理学

2.2 各组大鼠胃黏膜损伤指数变化比较

模型组、低剂量组和高剂量组胃黏膜损伤指数高于正常组(P<0.05);低剂量组和高剂量组胃黏膜损伤指数低于模型组(P<0.05);高剂量组胃黏膜损伤指数低于低剂量组(P<0.05)。见表1。

表1 各组大鼠胃黏膜损伤指数变化比较

2.3 各组大鼠血清GAS和MTL水平比较

模型组、低剂量组和高剂量组血清GAS水平低于正常组,而MTL水平高于正常组(P<0.05);低剂量组和高剂量组血清GAS水平高于模型组,而MTL水平低于模型组(P<0.05);高剂量组血清GAS水平高于低剂量组,而MTL水平低于低剂量组(P<0.05)。见表2。

表2 各组大鼠血清GAS和MTL水平比较

2.4 各组大鼠炎症因子水平比较

模型组、低剂量组和高剂量组血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平高于正常组,而IL-10水平低于正常组(P<0.05);低剂量组和高剂量组血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平低于模型组,而IL-10水平高于模型组(P<0.05);高剂量组血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平低于低剂量组,而IL-10水平高于低剂量组(P<0.05)。见表3。

表3 各组大鼠炎症因子水平比较

3 讨论

GAS是多基因、多阶段及多病因逐渐变异积累的一个过程,其症状主要为胃部疼痛,且伴反酸、恶心、上腹部饱胀不适等症状,容易反复发作,不易治愈[7-9]。GAS常与十二指肠反流、烟酒、饮食及幽门螺杆菌感染等致病因素有关[10-12]。采取及时有效的治疗GAS方法尤为重要。

羔羊胃提取物b12颗粒主要成分是羊羔第四胃提取物,其中含双岐因子、粘蛋白、胃蛋白酶和乳凝酶等多种生物活性成分,且与维生素b12相互组成的复合型中药制剂。羔羊胃提取物b12颗粒具有健脾消食功效,临床主要用于慢性胃炎引起的食欲不振、上腹部不适及胀满等。现代药理研究表明,羔羊胃颗粒具有消化蛋白质的高度活性,具有超强的凝乳能力,改善伟胃液分泌机能,并且不会影响蛋白质结合维生素b12的能力;同时羔羊胃颗粒维持肠能菌群平衡,具有很强的消化缓冲作用,从而保护胃黏膜[13]。本文研究表明,低剂量组和高剂量组胃黏膜损伤指数低于模型组,可见羔羊胃颗粒可减轻胃黏膜损伤;低剂量组和高剂量组血清GAS水平高于模型组而MTL水平低于模型组,可见羔羊胃颗粒可改善大鼠胃动力学。

炎性因子与GAS发生、发展密切相关[14]。IL-1β是胃酸分泌的一种有效抑制剂,可通过阻断细胞内钙依赖性蛋白酶激酶C增加及钙离子分布而抑制胃酸分泌[15]。IL-6主要由淋巴细胞、上皮细胞和巨噬细胞分泌,在炎症中具有损伤和保护作用,可通过STAT途径激活NF-κB,诱导细胞间黏附分子表达,而其中细胞间黏附分子在炎性胃肠病上皮细胞-中性粒细胞相互作用中发挥关键作用。IL-6对多细胞具有促炎作用,诱导肝脏组织产生C反应蛋白,加重炎症反应[16]。IL-10作为典型的一种多效性抗炎因子,具有广泛生物活性,主要由活化的辅助性T、B细胞、巨噬细胞和单核细胞产生,其生物学作用主要是抑制炎症反应[17]。TNF-α主要由单核细胞、淋巴细胞等分泌,参与炎症反应和特异性免疫反应,且可促进内皮细胞、上皮细胞、平滑肌细胞、纤维母细胞和巨噬细胞分泌花生四烯酸代谢物、蛋白酶,且可吞噬细胞产物以及补体片段导致细胞坏死,间质中蛋白质破坏的发生,损害胃黏膜上皮[18]。本文研究表明,低剂量组和高剂量组血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平低于模型组,而IL-10水平高于模型组,可见羔羊胃颗粒可通过降低IL-1β、IL-6和TNF-α水平及提高IL-10水平而减轻炎性反应。

综上所述,羔羊胃颗粒在GAS大鼠中作用效果明显,可减轻胃黏膜损伤,改善胃动力,减轻炎性反应。