一例大林羚肠毒血症的诊断

郑秉武 智 宇 李彦军 丁玉林 高 雅 刘佳利 张承天 王金玲*

(1.呼和浩特市动物园，呼和浩特，010050；2.内蒙古自治区农牧业科学院，呼和浩特，010051；3.内蒙古阿拉善右旗动物疫病预防控制中心，阿拉善右旗，737300；4.内蒙古农业大学兽医学院和农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室，呼和浩特，010010)

肠毒血症(entorotoxaemia)是由产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens，魏氏梭菌)所引起的家养动物、野生动物和人的一种急性致死性传染病[1-2]。大林羚(Tragelaphusoryx)，也叫大羚羊，属于林羚属的反刍动物，分布于非洲南部、中部和东部，从南非北部至刚果民主共和国和肯尼亚均有分布。大林羚的栖息地主要是林地和稀树草原，从沿海平原至山区，从半沙漠到降雨量相对较高的地区。目前，大林羚是野生动物园内重要的观赏动物，关于其疾病的报道只涉及创伤性蝇蛆病[3]、睾丸小结石、肿瘤病[4]、牛病毒性腹泻[5-6]、心包黏液样脂肪肉瘤[7]和眼内线虫病[8]，尚未有肠毒血症的文献报道。本研究通过多种方法确诊了1例大林羚肠毒血症的死亡病例，为大林羚肠毒血症的诊断和防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验动物

1只病死成年大林羚，由大青山野生动物园提供。6只6周龄昆明种小白鼠(SPF级)，购于斯贝福(北京)生物技术有限公司。

1.2 尸体剖检

对病死大林羚进行系统尸体剖检，观察和记录大体病变。剖检过程中分别取心、肝、脾、肺和肾等各组织器官(1.5 cm×1.0 cm×1.0 cm)，立即放入10%福尔马林溶液中固定。

1.3 病理组织切片制备和观察

对固定24 h的组织进行修块，脱水、透明、石蜡包埋、切片(厚度为3 μm)、苏木素-伊红染色(HE)、封片和烤片后，显微镜下观察。

1.4 触片检查

无菌环境下，在严重出血的小肠黏膜表面制备触片，自然干燥，革兰氏染色，油镜下观察。

1.5 小白鼠毒素试验

取空肠血样内容物3 mL，加2倍生理盐水稀释后，3 000 r/min 离心5 min，取上清液，均匀分成2份，1份60 ℃加热30 min，1份不加热。取6只小白鼠，随机分为2组，3只/组。2份上清液分别腹腔注射于1组小白鼠，1.2 mL/只，观察结果至接种后24 h。

2 结果与分析

2.1 临床病史

2016年8月31日晨，动物园仅存的1只15岁大林羚死于圈舍内，死亡前1 d未出现任何临床症状，于死亡当日上午进行全面的尸体剖检。

2.2 剖检病变

尸体角弓反张(图1A)，眼结膜和肛门黏膜轻度发绀。空肠出血性肠炎，肠壁变薄，局部肠管内有较多血样内容物(图1B)，肠黏膜呈弥漫性深红色。十二指肠黏膜严重出血性肠炎，肠黏膜弥漫性暗红色到黑红色，肠腔内充有大量血样内容物(图1C)。皱胃黏膜充血呈红色，黏膜面有大量出血性坏死灶。轻度腹腔积水，腹水呈淡黄色。心包腔内积有较多淡黄色透明液体，左心室向心性肥大，心壁增厚明显。肝脏和肾脏肿大，呈暗红色至黑红色。肺脏大面积呈暗红色，质度轻度变实，尖叶和心叶气肿严重。全身淋巴结轻度肿大。其他组织器官无明显眼观病理变化。

2.3 组织病理学变化

十二指肠和空肠严重的出血性坏死性肠炎，整个肠黏膜层均发生坏死，呈均质粉红染(图1D)，伴有大小不等的出血灶或弥漫性出血。大肠局部黏膜绒毛顶部上皮细胞坏死，肌层可见较多的中性粒细胞浸润。坏死性皱胃炎，皱胃黏膜层水肿，局部胃黏膜在上1/3处坏死明显，壁细胞变性明显，可见散在坏死。中毒性肝损伤，肝淤血和水肿，狄氏腔显现，肝细胞普遍小泡性脂肪变性和部分大泡性脂肪变性，肝细胞散在性坏死(图1E)，肝小叶边缘肝细胞坏死相对明显。中毒性肾损伤，肾淤血，上皮细胞严重肿胀，呈明显的颗粒变性和水泡变性，散在性坏死，细胞核浓缩(图1F)。肾上腺髓质腺上皮细胞多数肿胀，散在坏死。胰腺以整个腺胞为单位发生散在性坏死，坏死腺泡细胞胞浆红染加深，核溶解消失。肺淤血，局部区域肺泡壁毛细血管内可见较多中性粒细胞。其他组织器官不同程度充血和变质。

图1 大林羚病理结果

2.4 触片检查

产气荚膜梭菌的菌体呈直杆状，两端钝圆，单个或成双，短链很少出现，革兰氏染色阳性。无鞭毛，不运动。芽孢大而卵圆，位于菌体中央或近端，使菌体膨胀[2]。通过革兰染色，在大林羚肠黏膜触片上可见散在或成簇的单个或成双的革兰阳性粗大的杆菌，有的菌体中央已形成芽孢，与产气荚膜梭菌形态一致(图2)。

图2 革兰阳性粗大的产气荚膜梭菌 (×1 000)

2.5 小白鼠毒素试验

不加热组小白鼠于接种后13～18 h全部死亡，加热组小白鼠接种后24 h未见异常。试验结果表明肠血样内容物有致死性毒素存在。

3 诊断

根据临床病史、剖检病变、组织病理学变化、触片检查和毒素试验综合诊断为大林羚肠毒血症。

4 讨论

家养反刍动物的肠毒血症主要见于牛[9-10]、羊[9-12]和骆驼[13]等，野生反刍动物的肠毒血症常见于鹿(Cervidae)[14]和羊驼(Vicugnapacos)[15-16]等，肠毒血症还报道于猪[17]、马[18]、猫科(Felidae)动物[19]、熊(Ursidae)[20]、狐狸(Vulpes)[21]、鸡[22]、鸵鸟(Struthiocamelus)[23]和白鹳(Ciconiaciconia)[24]等。反刍动物肠毒血症的临床特点为发病急，死亡快，多数在没有任何症状下突然死亡，生前有短暂的角弓反张、搐搦和昏迷等神经症状[25]，具有证病意义的病变为十二指肠和空肠严重的出血性或出血—坏死性肠炎，肠黏膜呈暗红色或紫红色血样，肠腔内有大量血样内容物，俗称“血肠子病”。肾脏皮质软化而有波动感，严重病例质软如泥，因此本病又有“软肾病”之称[25]。肾的软化程度取决于动物死后的剖检时间，如果动物死后短时间内剖检，常见肾脏肿大，淤血；若尸体在10 h后剖检，则肾脏皮质很快自溶而软化[16，25]。在出血性坏死性肠炎病变基础上，中毒性肝损伤在反刍动物肠毒血症时也具有特征性，肝脏表现肝淤血和水肿，肝细胞脂肪变性和散在性坏死，肝小叶边缘肝细胞坏死相对明显。

本研究中大林羚的十二指肠和空肠表现典型的出血性坏死性肠炎，与“血肠子病”病变相似。“软肾病”的病变在本例不典型，只出现肾脏肿大，但组织病理学病变显示肾小管上皮细胞普遍肿胀和散在性坏死。这是由于本研究中大林羚于死亡后2 h内剖检，肾脏无明显“软肾病”病变。为了预防野生动物园内大林羚等动物肠毒血症的发生，建议定期进行羊快疫、羊猝狙、羔羊痢疾和肠毒血症三联四防灭活疫苗免疫或定期在饲草料中添加磺胺咪片(按说明书用量)，1次/d，连续用药3～5 d。