结核病患者CD64、TLR2及TLR4表达变化及其意义

辛超 张权武

(陕西省结核病防治院，陕西 西安 710100)

结核病是由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染性疾病，任何年龄段均可发病，免疫力低下者更容易感染，其主要的转播途径为飞沫传播[1]。流行病学调查显示[2]，结核病患者中，有大约10%的患者会发展为活动性疾病。既往研究表明[3]，若结核分枝杆菌受到感染，中性粒细胞会通过血液向受感染部位迁移，导致炎症反应发生变化，可作为急性炎症的标志。随着临床对结核病研究的不断深入，有学者[4]认为多形核细胞家族受细胞因子吸引的免疫反应，可能与抗结核病细菌感染有一定的关系，可以防御早期感染。TOLL样受体(TLRs)在巨噬细胞、树突细胞(前体细胞)等细胞上有所表达，若皮肤、肠道黏膜等受到感染，TLRs会对其进行识别，以此对免疫反应进行启动[5]。目前，临床关于结核病感染期间，中性粒细胞CD64、TLR2、TLR4表达的变化及其对免疫反应的研究并不多见。本研究主要探讨结核病患者中性粒细胞CD3、CD4、CD8、CD64和TLR2、TLR4、CRP表达及其意义。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年6月至2021年6月我院收治的结核病患者，健康体检者，肺部良性疾病患者、肺部恶性肿瘤各50例患者作为研究对象。结核病患(进展期18例、好转期16例、稳定期16例)者：男27例，女23例；年龄31～83岁，平均年龄(61.59±11.03)岁。健康体检者：男25例，女25例；年龄28～81岁，平均年龄(62.03±11.14)岁。肺部良性疾病者：男29例，女21例；年龄26～85岁，平均年龄(61.16±11.01)岁。肺部恶性肿瘤患者：男31例，女19例；年龄32～87岁，平均年龄(61.83±11.08)岁。纳入患者均符合结核病的诊断标准[6]；精神和认知正常，意识清晰；依从性较佳，可积极配合完成相关检测及调查工作；临床资料完整、齐全。已排除合并严重心肝肾等器质性病变者；伴有其他传染性疾病者；艾滋病毒/艾滋病、高血压疾病史；妊娠期或哺乳期者；合并恶性肿瘤疾病者。各组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2方法 于清晨空腹状态下，经静脉穿刺采集受试者的肝素化血液3 mL，保存至EDTA抗凝管中，及时送检。要求采集标本时，严格坚持无菌操作的原则，确保标本无污染。对结核分枝杆菌进行接种处理，所接种的培养基为酸性罗氏培养基。接种时，斜面朝上，培养箱的温度为恒温37℃，每隔3 d进行1次观察。若长出菌落，转接至MGIT960液体培养基中，A600达到0.8后待用。

1.3指标检测 使用PBS溶液对细胞进行洗涤2次，行流式细胞术染色方案。对于中性粒细胞Fcy受体CD3、CD4、CD8和CD64的表达的检测。选取肝素化血液各30μL，分别代表两组。将TLR2-PE、TLR4-PE单克隆抗体分别加入其中，进行为期0.5 h的孵育。随后采用PBS洗涤液进行1清洗，3 000 r/min离心环境下离心处理10 min，将上层血清分离，保存并作为感染前待测样本。加入抗体前，加入结核分枝杆菌液30 μL，在37℃的情况下，进行0.5 h的孵育。加入TLR2-PE、TLR4-PE单克隆抗体，并重复上述操作，获得结核分枝杆菌感染后待测液。采用QT-PCR法，对中性粒细胞TLR2、TLR4进行检测。采用酶联免疫吸附法(ELIA)对CRP进行检测，使用全自动生化分析仪(日立SF3600)操作，试剂盒购自上海物联生物科技有限公司，检测时严格根据试剂盒说明操作，确保检测的质量。

2 结 果

2.1外周血中性粒细胞水平 结核病患者的CD3、CD4、CD8均低于健康体检者和肺部良性疾病患者，高于肺部恶性肿瘤患者，但CD64表达水平高于肺部恶性肿瘤，低于健康体检者和肺部良性疾病患者(t=11.024、10.963、4.696、11.400，P均<0.05)。见表1。

表1 各组外周血中性粒细胞水平的比较

2.2外周血中性粒细胞相对表达量 观察组的TLR2、TLR4及CRP相对表达量均高于健康体检者和肺部良性疾病患者，但低于肺部恶性肿瘤患者(t=8.320、7.512、6.829，P均<0.05)。见表2。

表2 各组外周血中性粒细胞相对表达量的比较

2.3不同分期结核病患者外周血中性粒细胞水平及相对表达量 进展期患者的CD3、CD4、CD8均低于稳定期和好转期患者，但CD64表达水平高于稳定期和好转期患者(t=8.206、12.412、6.281、10.027，P均<0.05)；进展期患者的TLR2、TLR4、CRP相对表达量均高于稳定期和好转期(t=9.213、8.236、7.028，P均<0.05)。见表3。

表3 不同分期结核病患者外周血中性粒细胞水平及相对表达量的比较

3 讨 论

结核病是一种传染性非常强的慢性疾病，可通过咳嗽、谈吐、说话等在空气中传播结核分枝杆菌，使他人受到感染[7]。近年来，随着生态环境污染日益加剧及艾滋病疾病的传播，结核病的发病率逐年上升，严重威胁到人们的健康乃至生命安全，其防治形势不容乐观[8]。抗菌药物是当前结核病治疗的常见方式，尽管能够取得一定的效果，但是由于耐药性问题的日益严峻，在很大程度上影响了治疗的效果，尤其是多重耐药现象的出现，严重制约了抗菌药物治疗价值的提升[9]。因此，有必要加强对结核病相关问题的研究，这显得十分有必要。

Fcy受体对于中性粒细胞的吞噬作用发挥着十分重要的作用，它们在所有吞噬细胞上表达，因此针对其与结核病

感染期间水平的检测十分重要[10]。本研究结果显示，观察组外周血中性粒细胞CD3、CD4、CD8均低于对照组，高于实验组，而CD64水平高于对照组，低于实验组，说明了相较于结核病患者Fcy受体的表达有所上升，集中体现在CD64表达水平的上升。由此不难看出，Fcy受体是参与抗原吞噬作用和相关功能调节。有研究指出[11]，TLRs受体在结核分枝杆菌的识别中扮演着十分重要的角色。国外有研究发现[12]，通过中性粒细胞TRLs可对结核分枝杆菌进行识别，其中以TLR2为例，其表达水平在感染结核分枝杆菌后明显变化。炎性因子在感染后，其表达会发生相应的变化，其中CRP的变化尤为明显。本研究中，观察组TLR2、TLR4及CRP相对表达量均高于对照组，但低于实验组(P<0.05)，表明了对于结核病患者而言，在感染后机体炎性因子的确发生了相应的变化。进一步分析相关性发现，相较于稳定期和好转期患者，进展期结核病患者CD3、CD4、CD8更低，CD64、TLR2、TLR4及CRP相对表达量(P<0.05)，这充分提示了TLR2、TLR4及CRP参与了病情的发生、发展，对机体免疫功能会造成较大的影响。

综上所述，结核病患者的中性粒细胞CD64、TLR2、TLR4表达水平(量)会有明显上升，导致机体免疫功能受到影响，因此需加强相关检测，以为临床提供科学的理论参考。