奥拉西坦联合石菖蒲对AD大鼠氧化应激能力及空间学习记忆功能的影响

田小海 常亮 王莘

(1长春医学高等专科学校基础医学部，吉林 长春 130000；2吉林农业大学)

奥拉西坦是吡咯烷酮衍生物，即是一种新型的y-氨基丁酸环化衍生物，其有效成分不仅能调节脑组织氧代谢、能量代谢，还能通过保护、修复及激活神经元细胞，发挥其脑组织抗氧化等保护功能，临床常用于治疗神经功能损伤、空间记忆功能缺失及障碍〔1～4〕。石菖蒲是多年生天南星科草本植物，其性温、味辛苦、归心胃经，主要化学成分有多种如苯丙素类、木脂素类、氨基酸类等，在阿尔茨海默症治疗中主要作用是抗氧化应激、镇静、抗神经细胞凋亡、抗炎症反应及改善空间学习记忆功能等〔5～9〕。 本文拟分析奥拉西坦联合石菖蒲对AD大鼠氧化应激能力及空间学习记忆功能的影响。

1 材料与方法

1.1实验动物分组与造模 75只Wistar雄性SPF级大鼠，体重(228±22)g，由长春市亿斯实验动物技术有限责任公司提供。实验分为对照组10只，实验组65只。造模的65只Wistar大鼠(实验组)均腹腔注射D-半乳糖(100 mg/kg)6 w，通过Morris水迷宫实验筛选出50只造模成功的大鼠，分为模型组、奥拉西坦组、奥拉西坦+低剂量石菖蒲组、奥拉西坦+中剂量石菖蒲组和奥拉西坦+高剂量石菖蒲组各10只。

1.2实验试剂与检测设备 中药石菖蒲购买后自制成细粉使用(毫州市佰林堂药业有限公司)；奥拉西坦胶囊购于石药集团欧意药业有限公司-国药准字H20031033；D-半乳糖购自长春市南关区金莱博生物实验服务部(美国，Invitrogen)；超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)检测试剂盒购于南京建成生物工程公司。Morris水迷宫(上海，XR-XM101-Z)和Biotek Epoch酶标仪(山东，JD-SY96A)。

1.3给药方法、药物配制和剂量 给药方式：灌胃，每天上午1次，连续灌胃5 w。配制奥拉西坦(20 ml，160 mg/ml)、奥拉西坦+低剂量石菖蒲(20 ml，奥拉西坦160 mg+2 g石菖蒲/ml)、奥拉西坦+中剂量石菖蒲(20 ml，奥拉西坦160 mg/ml+4 g石菖蒲/ml)和奥拉西坦+高剂量石菖蒲(20 ml，奥拉西坦160 mg/ml+8 g石菖蒲/ml)，现用现配。对照组、模型组分别给予5 ml/kg生理盐水，各实验组给予等剂量相关药物。

1.4Morris水迷宫实验 造模6 w(治疗前)和给药4 w(治疗后)均进行Morris水迷宫测试，记录大鼠逃避潜伏期、总路程、经过平台象限次数及目标象限游泳时间占总时间比，检测大鼠空间学习记忆功能。Morris水迷宫测试共7 d，其中1～6 d是定位航行试验记录大鼠逃避潜伏期，第7天是空间探索实验，撤掉平台记录第1次穿越目标区域时间、穿越目标区域次数、穿越中心区域及中环区域的百分比。

1.5检测各组血清和脑组织中SOD和MDA含量 Morris水迷宫测试结束第2天采集血清和脑组织海马区待检测，采用生物化学方法严格遵守试剂盒操作步骤检测各组血清和脑组织中SOD和MDA含量。

1.6统计学分析 采用SPSS20.0软件进行多因素方差分析。

2 结 果

2.1定位航行试验记录结果比较 治疗前实验各组逃避潜伏期和总路程均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，实验各组差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后与治疗前比较实验各给药组逃避潜伏期和总路程均降低，差异有统计学意义(P<0.05)；治疗后与模型组比较，治疗各组逃避潜伏期和总路程均降低，联合用药优于单纯奥拉西坦给药，且联合用药随剂量增加效果更佳，组间差异均有统计学意义(均P<0.05)，见表1。

2.2空间探索实验结果比较 治疗前实验各组第1次穿越目标区域时间、穿越目标区域次数、穿越中心区域及中环区域的百分比均低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，实验各组组间差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后与治疗前比较实验各给药组均提高；治疗后与模型组比较，治疗各组均提高，联合用药优于单纯奥拉西坦给药，且联合用药随剂量增加效果更佳，组间差异均有统计学意义(均P<0.05)，见表2。

表1 定位航行试验各组逃避潜伏期和总路程的比较

1)与对照组比较，2)与治疗前比较，3)与模型组比较，4)与奥拉西坦组比较，5)与奥拉西坦+石菖蒲低剂量组比较，6)与奥拉西坦+石菖蒲中剂量组比较：均P<0.05；表2同

表2 各组空间探索实验结果比较

2.3各组血清和脑组织中SOD和MDA含量比较 与对照组比较，实验组各组血清和脑组织中SOD含量均降低，MDA含量均升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，各给药组血清和脑组织中SOD含量均升高、MDA含量降低，且石菖蒲呈剂量依赖性，各组差异均有统计学意义(均P<0.05)，见表3。

表3 各组血清和脑组织中SOD和MDA含量比较

3 讨 论

随着社会发展世界人口老龄化趋势日益明显，老年病的形式、种类多样和严重性受到医务工作者的广泛关注，AD是老年人常见的一种痴呆性疾病，不但影响患者自身生存质量、加重家庭与社会的医疗负担，还是老年人死亡的重要因素〔10〕。

奥拉西坦是一种营养神经类药物，临床常用于促智、脑卒中等脑血管疾病的治疗；其可直接或间接性作用于脑组织各个分区，通过提高脑组织抗氧化能力、降低脑组织氧化应激损伤、活化乙酰胆碱等作用，保护修复脑组织神经细胞，从而改善大脑的学习记忆功能〔11～13〕。由于西药作用有限且靶点单一，而中药品种丰富且具有多靶点优势，因此中西药结合治疗AD是国际性趋势，有广阔的临床应用前景〔14〕。石菖蒲在《汉武帝内传》和《神农本草经》记载中都有益智功效，临床已广泛用于癫痫、痴呆、中风、心悸及健忘等〔14～16〕。

因此结合两种药物的作用机制，将其共同应用于AD疾病的治疗；本实验结果说明联合用药更有助于提高AD大鼠的空间学习记忆功能和氧化应激能力。

综上，中药石菖蒲联合奥拉西坦治疗能明显改善AD大鼠空间学习记忆功能，效果优于单纯奥拉西坦，其作用机制有待进一步探讨。