miR-124 联合miR-570 在宫颈癌不同病变阶段组织中的表达及其意义

孙凤仪 黄 煜 刘敏敏 张树超 赵田田

1潍坊市人民医院妇产科 山东 潍坊 261041；2青岛大学附属妇女儿童医院妇科中心 山东 青岛 266075；3青岛大学附属医院输血科 山东 青岛 266003

宫颈癌在女性常见肿瘤发病率中位居第2 位，全世界每年约有30 万人因宫颈癌失去生命。近年来，宫颈癌的发病率增加并且年龄趋于年轻化，对女性的健康构成严重威胁［1］。宫颈癌早期无明显症状，临床上确诊的患者多处于中晚期，且预后不良。因此，其早期诊断对其治疗和预后具有重要意义［2］。目前，宫颈癌的发病机制尚未完全阐明。研究表明，宫颈癌的发生和发展是一个极其复杂的多阶段过程，受多种因素的制约。其中核酸水平的调节与宫颈癌的发生密切相关，特别是微小microRNA（miRNA）可通过调节靶基因的表达影响肿瘤下游表型改变，进而调控宫颈癌的发生和发展［3，4］。其中，miR-124 是重要的抑癌基因［5］。研究表明，它可抑制许多肿瘤细胞 发 挥 作 用，如 卵 巢 癌［6］、胃 癌［7］和 乳 腺 癌［8］。而miR-570 已在肝癌［9］和慢性粒细胞白血病［10］中进行了研究。但是，其在宫颈癌中的表达和诊断价值的尚无相关报道。因此，本研究通过检测miR-124 及miR-570 在宫颈癌中的表达，探讨miR-124 联合miR-570 在宫颈癌早期诊断中的临床价值。

1 材料与方法

1.1 一般信息对2017 年4 月至2019 年4 月在潍坊市人民医院接受治疗的60 例宫颈癌患者进行回顾性分析，以病变组织为实验组。根据FIGO 分期标准：Ⅰ期22 例，Ⅱ期25 例，Ⅲ期7 例，Ⅳ期6 例。根据病理类型，宫颈鳞状细胞癌35 例，宫颈腺癌25例。选择同期体格检查确诊的另外57 名健康女性的正常宫颈组织作为对照组。取出所有组织并在-80 ℃快速储存。两组对象一般信息见表1。

表1 两组患者的一般信息比较

1.2 纳入和排除标准纳入标准：（1）实验组包括通过病理学确认患有宫颈癌的患者；（2）对照组包括通过身体检查确认为健康的女性。排除标准：（1）在取样前接受放疗和化疗的患者；（2）患有严重其他器官疾病的患者；（3）不配合检查的患者；（4）患有认知和沟通障碍的患者。参与者及其家属签署知情同意书，配合医务人员完成相关医疗，研究经潍坊市人民医院批准。

1.3 实验仪器和材料逆转录-定量聚合酶链反应（qRT-PCR）以及TRIzol 试剂（Invitrogen；Thermo Fisher Scientific，Inc.，Waltham，MA，USA）；qRT-PCR 试剂盒和逆转录试剂盒（Takara 生物有限公司）。

1.4 方法将肿瘤标本和正常宫颈组织从-80 ℃的冰箱中取出。加入TRIzol 试剂，提取组织RNA，得到1 μL 总RNA，分别加入特异性茎环引物。根据制造商的说明书进行逆转录cDNA。反应温度：42 ℃，15 min，85 ℃，5 s。根 据 序 列 设 计 扩 增miR-124 和miR-570 的 引 物，U6 作 为 内 部 参 照 对 照。扩增条件：在95 ℃变性30 s，在60 ℃退火10 s，在72 ℃延伸20 s，总共40 个循环，在72 ℃延伸5 min 后停止反应。使用2-ΔΔCt方法计算和分析miR-124 和miR-570 的表达。

1.5 统计学分析采用SPSS 21.0 软件进行统计分析，所有数据均以均数±标准差表示，两组间比较采用t检验，P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 比较miR-124 和miR-570 在两组之间的相对表达实验组的miR-124 的相对表达水平为0.56±0.15，低 于 正 常 对 照 组 的 0.82±0.34（P＜0.05）；实验组miR-570 的相对表达水平为0.63±0.18，低 于 正 常 对 照 组 的 0.86±0.37（P＜0.05）。详见表2。

表2 miR-124 和miR-570 在两组之间的相对表达

2.2 miR-124 和miR-570 在不同阶段的相对表达比较在早期（Ⅰ～Ⅱ期）和中晚期（Ⅲ～Ⅳ期）的宫颈癌患者中，实验组中miR-124 的相对表达水平分别为0.62±0.18 和0.28±0.16，miR-570 的表达水平分别为0.74±0.23 和0.34±0.11。总体水平均存在显著差异（P＜0.01），表明临床分期越晚，miR-124 和miR-570 的表达水平越低。详见表3。

表3 miR-124 和miR-570 在不同阶段的相对表达比较

2.3 单独miR-124 和miR-570 检测的诊断价值及其在宫颈癌早期（Ⅰ～Ⅱ）中的联合检测在早期宫颈癌患者的诊断中，miR-124 诊断的敏感性、特异性和曲线下面积（AUC）分别为83.56%，63.54%和0.753；miR-570 的诊断的灵敏度、特异性和AUC分别为82.18%，58.68%和0.682；而miR-124 联合miR-570 的灵敏度、特异性和AUC分别为91.25%，61.23%和0.813。其 中，miR-124 联 合miR-570 的敏感性和AUC显著高于单独的miR-124 和miR-570 诊断。详见表4。

表4 miR-124 和miR-570 单独检测及其联合检测对早期宫颈癌的诊断价值

3 讨论

宫颈癌是女性生殖系统中最常见的恶性肿瘤之一，近年来发病率不断上升［11］。有研究报道，早期宫颈癌在临床上不易被发现。一旦发现，往往处于中晚期，其复发、侵袭和转移率较高，导致宫颈癌的治疗和预后不良［12］。宫颈癌的发病机制是一个非常复杂的过程，涉及从正常宫颈上皮细胞到癌细胞浸润的许多编码和非编码基因的结构和表达异常［13，14］。作为单链非编码调控RNA，通过参与靶基因表达的调控，miRNA 在各种生物过程中发挥作用，如细胞增殖、凋亡、分化和迁移［15-17］。miR-124通过靶基因的调控与卵巢癌、胃癌、乳腺癌和其他肿瘤的发生密切相关。此外，研究报道miR-124 可通过直接靶向IGF2BP 抑制宫颈癌的生长和转移，可能被发展成为一种治疗宫颈癌的新方法［18］。Lin等［19］的研究表明，miR-570 在肝癌的增殖、血管生成和免疫逃逸中起着重要作用，可能是潜在的诊断和预测生物标志物。

为了阐明miR-124 和miR-570 在宫颈癌中的诊断价值，本研究比较了它们在病变组织和正常宫颈组织中的表达。结果发现，实验组的表达低于对照组（P＜0.05）。然后，比较miR-124 和miR-570 在不同阶段的相对表达。结果显示，临床分期越晚，miR-124 和miR-570 的表达水平越低（P＜0.05）。进一步评估miR-124 和miR-570 单独及联合检测在早期宫颈癌中的诊断价值。结果显示，单独miR-124 诊断的敏感性、特异性和AUC分别为83.56%、63.54%和0.753，单独miR-570 诊断的敏感性、特异性和AUC分别为82.18%，58.68% 和0.682，而miR-124 联合miR-570 诊断的敏感性，特异性和AUC为91.25%、61.23%和0.813。联合诊断的敏感性和AUC显著高于单独miR-124 和miR-570，表明miR-124 和miR-570 联合诊断早期宫颈癌的价值高于他们的单独诊断价值。

总之，miR-124 和miR-570 在宫颈癌组织中的表达显著下调，而miR-124 联合miR-570 的价值高于早期宫颈癌中单独检测的价值，其可用作早期宫颈癌的临床诊断的优选解决方案。然而，目前关于宫颈癌中miR-124 和miR-570 相关的报道仍然很少。因此，未来需要进行更大样本规模的调查以验证并应用。