猪流行性腹泻免疫临床效果评估

蒋家霞 林昌华 韩定角 王艳午 李宇 韦秋艳

（1，广西农垦永新畜牧集团新兴有限公司 545112；2，广西职业技术学院 530226；3，广西农垦永新畜牧集团西江有限公司 537100）

猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED），是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的，以腹泻症状为主的高度接触性传染病，会发生急性腹泻、呕吐、脱水、厌食、精神沉郁等临床症状，哺乳仔猪死亡率高[1]。全球猪流行性腹泻病毒分为两群，一群是经典PEDV 毒株，另一群是新型PEDV 毒株，新型PEDV 毒株进一步分为“non-S INDEL”（主要为高致病性）和“S INDEL”亚群[2]；疫苗免疫接种是防控猪流行性腹泻最主要手段，目前商品化疫苗主要有灭活疫苗和弱毒疫苗[3]。在养猪生产中，特别是在冬季，温度变化大，猪舍保温措施跟不上，很容易爆发该病，诊治不及时可造成大量仔猪脱水死亡，给养殖户造成巨大经济损失。因此，猪流行性腹泻免疫效果评估对该病防控具有较大意义，可直接控制仔猪死亡，促进生猪健康养殖。

1 材料和方法

1.1 主要试剂

Baypure 通用型磁珠法病毒DNA/RNA 快速提取试剂盒购自广州湾区生物科技有限公司；猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪德尔塔冠状病毒（PDCV）三重荧光RT-PCR 检测试剂盒和猪轮状病毒（ABC亚型）分型荧光RT-PCR 检测试剂盒，均购自上海麦诺迪生物科技有限公司；猪流行性腹泻猪传染性胃肠炎二联弱毒疫苗（简称腹泻二联疫苗）购自某生物工程有限公司。

1.2 主要设备

全自动核酸提取纯化仪，品牌型号：北京天根TGuide；荧光定量PCR 仪，品牌型号：瑞士罗氏LightCycler96。

1.3 样品采集和处理

采集粪便拭子：将2 根棉签蘸取患病仔猪粪便，浸入含有1ml 生理盐水的采样管中，掰断棉签，盖好盖子。56℃水浴30min 进行灭活。3000r/min 离心3min，取上清液进行核酸提取。

1.4 试验设计

采集发生腹泻的仔猪粪便拭子样品，经过临床诊断和实验室诊断来确诊仔猪发生猪流行性腹泻疾病；以发生猪流行性腹泻猪场为试验对象，猪场发生腹泻后免疫腹泻二联疫苗，妊娠100 日龄母猪后还需免疫，1.5 份/头，其他母猪包括后备母猪肌肉注射免疫1.5 份/头；2 周后二免，操作按照一免执行；观察统计免疫前1～10d、免疫后1～10d，免疫后11～20d 哺乳仔猪日均死亡率变化情况，并进行显著性分析，评估疫苗免疫临床效果。

1.5 数据统计和分析

采用SPSS 17.0 软件分析数据，结果以“平均值±标准差”表示。＜0.05 表示差异显著，＜0.01 表示差异极显著。

2 结果和分析

2.1 临床诊断

哺乳仔猪发生呕吐、腹泻、拉黄色粪便、厌食、脱水、精神不振（见图1）。刚出生仔猪出现腹泻急性脱水死亡，每日新增病例加大，发病率达80%，随后日死亡率异常增加。临床上与传染性胃肠炎、轮状病毒等具有很多共同特征，难以鉴别，需进一步进行实验室诊断。

图1 临床症状（腹泻脱水）

2.2 实验室诊断

采集粪便拭子经过处理后，使用全自动核酸提取纯化仪进行核酸提取，使用猪传染性胃肠炎病毒（TGEV 标记FAM）、猪流行性腹泻病毒（PEDV 标记HEX/VIC）、猪德尔塔冠状病毒（PDCV 标记Cy5）三重荧光RT-PCR 检测试剂盒和猪轮状病毒（RV-A 型标记FAM、RV-B 型标记HEX/VIC、RV-C 型标记Cy5）分型荧光RT-PCR 检测试剂盒，对提取的核酸产物进行荧光RT-PCR 检测，检测仔猪病毒性腹泻常见病原：猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎、猪德尔塔冠状病毒、猪轮状病毒。

结果显示：猪流行性腹泻病毒阳性（Ct 值22.56），猪传染性胃肠炎、猪德尔塔冠状病毒、猪轮状病毒均为阴性（见图2～3）。

图2 TGEV/PEDV/PDCV/RV-A/B/C 荧光RT-PCR 检测结果

2.3 疫苗免疫临床效果

2.3.1 免疫前后哺乳仔猪日死亡率变化情况

仔猪发生猪流行性腹泻后对母猪使用腹泻二联疫苗进行免疫，由于疫苗免疫产生抗体需要一定时间，试验统计3 个发生流行性腹泻猪场免疫前后哺乳仔猪日死亡率变化情况（图4），结果表明，3 个发生猪流行性腹泻的猪场免疫前后仔猪日死亡率先升高后降低，最高日死亡率分别为7.05、11.43%、3.91%；哺乳仔猪发生流行性腹泻后死亡率会急剧升高、母猪免疫疫苗后，哺乳仔猪被动免疫获得抗体，日死亡率迅速下降，说明疫苗免疫猪流行性腹泻具有良好效果。

图4 免疫前后哺乳仔猪日死亡率变化情况

2.3.2 免疫前后哺乳仔猪日均死亡率显著性分析

图3 TGEV/PEDV/PDCV/RV-A/B/C 荧光RT-PCR 检测结果

试验统计3 个发生猪流行性腹泻的猪场免疫前1～10d、免疫后1～10d、免疫后11～20d 哺乳仔猪日均死亡率，结果显示，免疫后1～10d 日均死亡率显著高于免疫前1～10d（=0.040），免疫后11～20d 日均死亡率明显低于免疫后日均死亡率1～10d（=0.077）；由于发病后才紧急免疫疫苗，疫苗产生抗体需要时间，因此，免疫后出现死亡高峰，免疫后1～10d 和免疫后11～20d 虽然没有显著性差异（参见附表），但日均死亡率明显降低，说明疫苗起到了比较好的保护效果。

附表 3 个场免疫前后哺乳仔猪日均死亡率显著性分析（单位：%）

3 讨论

所有日龄猪都会感染猪流行性腹泻，但死亡率高主要是1 周龄内的仔猪，由于肠道疾病保护力主要取决于肠黏膜sIgA 抗体，因此，防控仔猪猪流行性腹泻最关键的还是仔猪通过初乳获得母源抗体，特别是中和抗体和sIgA 抗体[2]。

返饲是通过妊娠母猪接触PEDV 病毒，激活肠道-乳腺-sIgA 轴，刺激母猪产生乳源性免疫，可减轻仔猪临床症状，缩短临床发病期；但存在的其他病原也可通过返饲传播，尤其在非洲猪瘟防控前提下，返饲会增加疫病爆发风险。因此，猪流行性腹泻防控比较有效的方法仍是接种疫苗，通过对妊娠100日龄母猪进行跟胎免疫，使仔猪获得母源抗体来抵抗猪流行性腹泻病毒的感染。目前，市场上猪流行性腹泻疫苗种类较多，经典PEDV 疫苗并不能保护猪对高致病性non-S INDEL PEDV的感染，且并不是所有接种疫苗的母猪都能产生保护性的乳源性免疫[2]，因此，临床上并不是所有疫苗对本场发生的猪流行性腹泻都有效果，需根据本场情况评估选择。

猪场在秋冬季来临时需做好各项预防措施，才能更好地防控腹泻疾病发生。

（1）提供适宜环境。做好防寒保暖工作，准备保温灯、保温板、灯线、保温箱等物资，通过调节保温和通风设施控制保温区的温度；使用干燥粉保持仔猪身体干燥；产房每批次猪出完后尽快清洗消毒，空栏7d 以上，为下批仔猪提供一个更干净环境。

（2）强化产房饲养管理。仔猪分娩护理，按照“一擦二断三保温四初乳五记录六寄养”工作要求；仔猪做好固定奶头、保健及教槽工作；母猪保健防子宫炎，饲喂充足防掉膘严重。

（3）疫苗免疫接种。使用腹泻疫苗，秋冬季母猪普免1 月后，妊娠100 日龄母猪跟胎免疫。

（4）仔猪腹泻治疗。原则补液、防脱水、缓解酸中毒，防继发细菌感染，对症治疗。细菌感染可选用抗生素治疗，如阿莫西林克拉维酸钾、水溶性土霉素粉、硫酸粘菌素、恩诺沙星等；使用吸附剂减缓腹泻症状，如蒙脱石、高岭土等；及时补液防急性脱水死亡，如葡萄糖盐水、小苏打；用酸化剂调节肠胃，如巧妙酸。

4 结论

综上所述，提前做好防寒保暖措施，选择合适的疫苗对母猪进行免疫接种，强化产房饲养管理措施，及时关注猪舍环境变化和仔猪腹泻情况，发现仔猪零星拉稀及时采取有效措施进行治疗，若出现发病率高传染性强的腹泻，及时进行实验室诊断，结合猪场实际采取相应措施，防止仔猪因猪流行性腹泻而产生大规模死亡，造成巨大的经济损失。